葛根中葛根素含量的測定*

王麗婷，郭雙華，鄒慧巖，宋祎諾，謝承佳

(揚(yáng)州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,江蘇 揚(yáng)州 225127)

葛根素又稱葛根黃素，8-β-D葡萄吡喃糖-4’7-二羥基異黃酮，是從豆科植物葛的塊根中提取的異黃酮類化合物。葛根素能夠擴(kuò)張血管、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈,增加冠脈血流量,改善缺鐵區(qū)的血流,降低心肌耗氧量,增加氧供應(yīng)，被廣泛用于冠心病、心絞痛等；葛根素還可以調(diào)節(jié)血液粘度、降低血壓, 防治高血壓頭暈，用于治療高血壓[1]。研究表明，葛根素可以提高骨量和骨密度,改善骨生物力學(xué)性能和骨形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu),對(duì)骨骼有良好的保護(hù)作用及治療骨質(zhì)疏松的作用[2]。葛根素還能夠抑制人體對(duì)酒精的吸收，具有解酒護(hù)肝作用[3]。現(xiàn)在市面上有葛根素注射液、葛根素膠囊、葛根素片劑等劑型的藥物已應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)。隨著生活質(zhì)量的提高，人們?cè)絹碇匾曉谌粘Ｉ钪型ㄟ^藥食同源的食物改善身體的質(zhì)量、防未病、治已病。葛根因性味平和是藥食同源植物，既有藥用價(jià)值，又可作為日常保健食品服用。為了滿足人們食用需求，葛根已經(jīng)實(shí)現(xiàn)人工種植，由于天然葛根含水量高，易發(fā)霉，當(dāng)?shù)厝瞬捎米顐鹘y(tǒng)的方法制備干燥的葛根粉來延長葛根的貯存期，本文對(duì)不同產(chǎn)地的柴葛、粉葛和采用的傳統(tǒng)方法制備的葛根粉，利用超聲波輔助乙醇提取葛根素，采用紫外分光度計(jì)測葛根素的含量，測定的數(shù)據(jù)結(jié)果可以供人們食用葛根、葛根產(chǎn)品開發(fā)、食用方式提供參考。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

普析通用-T6紫外分光光度計(jì),上海光盤儀器有限公司；PX523ZH精密天平，奧豪斯儀器(上海)有限公司；超聲波清洗儀器CE-6200A，潔康智能科技有限公司；Mixplus漩渦混合器,合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司。

1.2 藥 品

葛根素(純度≥98%)，上海源葉生物科技有限公司；乙醇(分析純)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水為自制高純水；待測葛根從江西吉安、鎮(zhèn)江茅山、安徽宣城、云南臨滄購買，其中柴葛為野生，粉葛為種植葛根，都為生長兩年采收。

1.3 試劑的配置

稱取1.0000 mg的葛根素標(biāo)準(zhǔn)樣品于100 mL容量瓶中，用70%的乙醇溶液稀釋至刻度線，定容。配制成0.01 mg/mL的葛根素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.4 葛根素的提取

1.4.1 新鮮葛根中葛根素的提取

新鮮野葛根用高純水洗凈,晾干，削皮，切片、用植物粉碎機(jī)打成漿，漿液顆粒均勻，顆粒大小達(dá)到40～80目。準(zhǔn)確稱取新鮮葛根漿液1.0000于10 mL刻度試管中，加入10 mL乙醇溶液，在漩渦混合器上混勻2 min,然后在超聲頻率為42000 Hz、功率為70 W的超聲波清洗儀器進(jìn)行超聲提取葛根素，離心分離，收集取上層清液，殘?jiān)僦貜?fù)上次的超聲提純兩次，合并三次上層清液，上層清液用0.40 μm的濾膜，然后用紫外分光光度計(jì)普析通用-T6測吸光度，計(jì)算葛根素的含量，每個(gè)樣品測試五個(gè)平行樣。

1.4.2 葛根粉中葛根素的提取

采用傳統(tǒng)的制備葛根粉的方法，挑選新鮮葛根、去離子水清洗，然后去皮、切片、粉碎、過濾將漿渣分開、用去離子水多次淘洗葛根渣，合并濾液、沉淀，干燥，即得葛根粉。準(zhǔn)確稱取干燥葛根粉1.0000 g于10 mL刻度試管中，之后操作同新鮮葛根中葛根素的提取及測試操作。

1.5 測 試

分別準(zhǔn)確吸取0.00 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL的葛根素儲(chǔ)備液至25.00 mL的容量瓶中，用95%的乙醇溶液稀釋至刻度。配制成0.0000 mg/L、00002 mg/L、0.0004 mg/L、0.0006 mg/L、0.0008 mg/L、0.0010 mg/L的葛根素溶液，用紫外分光光度計(jì)普析通用-T6在200～300 nm范圍內(nèi)掃描，在 252 nm 處有最大吸收峰，在最佳條件下測葛根素標(biāo)準(zhǔn)序列液，繪制葛根素的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 紫外可見分光光度計(jì)法測葛根素的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve for determination of puerarin by ultraviolet visible spectrophotometer

為了驗(yàn)證測定方法的準(zhǔn)確度，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，取等體積的樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的混合溶液三份進(jìn)行測定，求出平均值，結(jié)果見表1，由加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，可以看出此種方法準(zhǔn)確。

表1 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Table1 Results of recovery test

2 超聲波輔助提取葛根素的條件優(yōu)化

新鮮葛根大約含85%左右的水分、3%的淀粉，而葛根粉則含水分很少，但淀粉含量高于90%，葛根和葛根粉中的淀粉，在溫度較高的情況下易成糊狀，給葛根素提取的后續(xù)操作帶來很多麻煩，所以本研究將新鮮葛根粉研磨成40～80目之間的漿液、葛根粉研磨成100目的顆粒，常溫25 ℃下，在頻率為42000 Hz、功率為70 W的超聲波清洗儀器進(jìn)行超聲提取葛根素，然后測試其含量。選用江西吉安的柴葛，進(jìn)行超聲波輔助乙醇提取葛根素的提取條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

2.1 乙醇含量對(duì)葛根素提取的影響

在超聲波助時(shí)間為25 min、料液比為1:45、超聲功率為 70 W、超聲溫度為25 ℃，乙醇的含量分別為30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的條件下測定葛根素的含量，結(jié)果見圖2，由圖2看出隨著乙醇的含量的增加，提取的葛根素含量會(huì)逐漸增加，當(dāng)乙醇濃度為70%時(shí)含量最高，當(dāng)乙醇的濃度大于70%時(shí)，葛根素的提取量略有降低，所以選擇乙醇濃度為70%。

圖2 乙醇對(duì)葛根素提取的影響Fig.2 Effect of ethanol on Puerarin extraction

2.2 料液比對(duì)葛根素提取的影響

在超聲波助時(shí)間為25 min、超聲功率為70 W、超聲溫度為25 ℃、乙醇的含量為70%，改變料液比為1:15、1:30、1:45、1:60、1:75，進(jìn)行超聲提取葛根素，由圖3知隨著料液比的提高，葛根中的淀粉充分溶解到溶劑中，并在超聲的作用下將葛根總黃酮從其中釋放出來，所以葛根素的含量逐漸提高，在料液比為1:45時(shí)提取的量最高，料液比再增大時(shí)，則葛根中非黃酮物質(zhì)被提取[4-5]，導(dǎo)致黃酮量減少從而會(huì)導(dǎo)致葛根素減少。

圖3 固液比對(duì)葛根素提取的影響Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on Puerarin extraction

2.3 超聲時(shí)間對(duì)葛根素提取的影響

在超聲功率為70 W、超聲溫度為25 ℃、乙醇的含量為70%，料液比為1:45，改變超聲時(shí)間，進(jìn)行超聲提取葛根素，由圖4知隨著超聲時(shí)間的增加，葛根素在提取液中的含量逐漸增加，隨著超聲時(shí)間的延長，則葛根素提取量逐漸降低，因此最佳超聲時(shí)間為25 min。

圖4 超聲時(shí)間對(duì)葛根素提取的影響Fig.4 Effect of ultrasonic time on Puerarin extraction

3 不同產(chǎn)地的葛根中葛根素的含量

取不同產(chǎn)地的葛根及葛根粉在超聲功率為70 W、頻率為42000 Hz、超聲溫度為25 ℃、乙醇的含量分別為70%、料液比為1:45，超聲時(shí)間為25 min下提取葛根素，重復(fù)測葛根素含量含量5次，測定結(jié)果見表2。

表2 葛根中葛根素含量Table 2 Puerarin content in root of kudzu vine

從表2的測試結(jié)果可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地葛根的葛根素含量不同，所取產(chǎn)地的柴葛中葛根含量普遍高于人工培植粉葛葛根素含量，無論是將柴葛還是粉葛制成葛粉，葛根素相對(duì)于新鮮的葛根含量高。

4 結(jié) 論

本文采收不同產(chǎn)地的柴葛和粉葛，并將葛根用民間傳統(tǒng)的方法制取葛根粉，將葛根和葛根粉在超聲功率為70 W、頻率為42000 Hz、超聲溫度為25 ℃、乙醇的含量分別為70%、料液比為1:45，超聲時(shí)間為25 min下進(jìn)行超聲提取葛根素，然后用紫外分光光度計(jì)測葛根素的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地葛根的葛根素含量不同，所取產(chǎn)地的柴葛中葛根素含量略高于人工培植粉葛葛根素含量，無論是將柴葛還是粉葛制成葛粉，葛根素相對(duì)于新鮮的葛根含量高。