泡囊草氯仿提取物中3個二苯乙烷類化合物的分離鑒定

胡畢斯哈拉圖，包玉秋，白蘇雅，王青虎

（1.包頭市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；3.內(nèi)蒙古民族大學(xué) 蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028043）

泡囊草（Physochlaina phsaloides（L.）G. Don）來源于茄科植物泡囊草的干燥根，主要分布于我國內(nèi)蒙古、新疆、吉林、黑龍江等地區(qū)，生長于草地、山坡、山溝［1］.泡囊草蒙醫(yī)用藥始載于《無誤蒙藥鑒》，后在《認(rèn)藥白晶鑒》中也有記載，現(xiàn)已載入《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（蒙藥分冊），該藥具有清“協(xié)日烏素”、消腫、殺蟲、鎮(zhèn)痛、解痙等功效，用于“黏”性胃炎、蟲疾、腦刺痛、頭痛等的治療.目前，泡囊草化學(xué)成分及其分析研究報道［2-4］較少，主要化學(xué)成分有山莨菪堿、莨菪堿、東莨菪堿和紅古豆堿等4個生物堿及新蘆丁和槲皮素三糖苷等2個黃酮類化合物.課題組為了進一步研究泡囊草的化學(xué)成分，對采集于內(nèi)蒙古呼倫貝爾的泡囊草展開了化學(xué)成分分離分析研究，結(jié)果從泡囊草不同溶劑提取物中發(fā)現(xiàn)2個生物堿、3個環(huán)烯醚萜苷和7個香豆素及其苷類化合物［5-7］.筆者為了完成泡囊草氯仿提取物的后續(xù)工作，采用硅膠柱色譜和反相制備HPLC法對其進行了分離，得到3個二苯乙烷類化合物，分別為1-（3-羥基苯基）-2-（5-羥基-3-甲氧基苯基）乙烷（1）、1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二甲氧基苯基）乙烷（2）和1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二羥基苯基）乙烷（3）.

1 儀器和材料

反相制備高效液相色譜儀（LC-20AP）：日本島津公司；液質(zhì)聯(lián)用儀（Waters Xevo G2-S QT）：美國沃特斯公司；紫外光譜儀（UV-2201）：日本島津公司；紅外光譜儀（TN-200）：日本島津公司；核磁共振波譜儀（Bruker AVAIVCEⅢ-500）：布魯克公司（德國）；氘代氯仿：Cambridge Isotope Laboratories Inc；柱色譜硅膠：青島海洋化工廠；其他試劑均為分析純.泡囊草收集于內(nèi)蒙古呼倫貝爾，經(jīng)蒙藥學(xué)專家布和巴特爾鑒定為茄科植物泡囊草的干燥根.

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離取泡囊草的干燥根1.0 kg，先用石油醚（3.0 L）回流提取2次，每次4 h，合并提取液.然后，藥渣用氯仿（10 L）回流提取2次，每次4 h，合并提取液并減壓回收溶劑，得到氯仿提取物55.0 g.稱取氯仿提取物50.0 g，用少許加硅膠拌樣，自然晾干后上安裝好的硅膠色譜柱，以氯仿-丙酮為洗脫液，不同濃度洗脫.把氯仿-丙酮（20∶1）的洗脫液合并，減壓回收溶劑，得到洗脫物850 mg.洗脫物用色譜甲醇溶解，溶液經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過濾，濾液后續(xù)HPLC（島津，日本）分離備用.HPLC 的條件：Shim-pack Prep ODS柱（25 mm i.d.×350 mm），流動相為MeOH-H2O（65∶5，v/v），流速為5 mL·min-1，檢測波長為254 nm，進樣量為500 μL.在上述色譜條件下，分離得到化合物1（24 mg）、2（15 mg）、3（13 mg）.經(jīng)化合物1-3的一維和二維核磁共振數(shù)據(jù)和質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析，確定了其結(jié)構(gòu)式，見圖1.

圖1 化合物1-3的結(jié)構(gòu)式Fig. 1 Structural formula of compounds 1-3

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物1 無色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、乙醚、甲醇等有機溶劑.UV（CH3OH）λmax（nm）（logε）：259（3.12）；IR（KBr）νmax（cm-1）：3 309、1 581、1 480、1 302、1 177 cm-1.化合物1 質(zhì)譜圖中給出m/z 243.102 5［M-H］-（計算值為243.102 1），其分子量為244，分子式為C15H16O3.化合物1的1H NMR譜（表1）中顯示出7 個芳香質(zhì)子信號，分別在δH6.63（1H，d，J=8.0 Hz）、7.05（1H，t，J=8.0 Hz）、6.57（1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz）、6.62（1H，brs）、6.23（1H，d，J=1.5 Hz）、6.14（1H，t，J=2.0 Hz）、6.22（1H，brs）.在HSQC譜中觀察到δH6.63 與δc 119.4（C-6'）相關(guān)，7.05 與129.6（C-5'）相關(guān)，6.57 與113.2（C-4'）相關(guān)，6.62 與115.7（C-2'）相關(guān)，6.23 與105.3（C-2''）相關(guān)，6.14與99.2（C-4''）相關(guān)，6.22與108.3（C-6''）相關(guān).此外，1H NMR譜中還給出了1個甲氧基質(zhì)子信號和2個亞甲基質(zhì)子信號，分別是δH3.66（3H，s）和2.72（2H，m）、2.70（2H，m）.在HSQC譜中觀察到δH3.66 與55.2（-OCH3）相關(guān)，2.72與37.6（C-1）相關(guān)，2.70與37.3（C-3）相關(guān).

化合物1 的13C NMR 譜（表1）中給出了2 個亞甲基碳信號、1 個甲氧基碳信號和2 個苯基碳信號.在HMBC 譜中觀察到δH3.66（3H，s）與C-3''（δC160.8）相關(guān)，2.72（2H，m，H-1）與C-2'（δC115.7）相關(guān)，C-6'（δC119.4）與C-1''（δC144.2）相關(guān)，2.70（2H，m，H-2）與C-2''（δC105.3）相關(guān)，C-6''（δC108.3）與C-1'（δC143.7）相關(guān)，說明1個甲氧基連接于C-3''位，而2個苯基分別連接于C-1和C-2.

表1 化合物1的1H和13C-NMR數(shù)據(jù)（分別為500和125 MHz，CDCI3）Tab. 11H and13C-NMR data（500 and 125 MHz，respectively CDCl3）of compound 1

此外，在HMBC譜中觀察到δH6.62（1H，brs，H-2'）與C-4'（δC113.2）、C-6'（δC119.4）和C-1（δC37.6）相關(guān)，7.05（1H，t，J= 8.0 Hz，H-5'）與C-3'（δC157.7）和C-1'（δC143.4）相關(guān)，6.14（1H，t，J=2.0 Hz，H-4''）與C-2''（δC105.3）、C-3''（δC160.8）、C-5''（δC158.8）和C-6''（δC108.3）相關(guān)，6.23（1H，d，J=1.5 Hz，H-2''）w與C-2（δC37.4）、C-6''（δC108.6）和C-4''（δC99.2）相關(guān)，這些進一步證實了化合物1的結(jié)構(gòu)式.經(jīng)以上其NMR數(shù)據(jù)分析，確定該化合物為1-（3-hydroxyphenyl）-2-（5-hydroxy-3-methoxyphenyl）ethane.

2.2.2 化合物2 無色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、乙醚、甲醇等有機溶劑.UV（CH3OH）λmax（nm）（logε）：260（3.12）；IR（KBr）νmax（cm-1）：3 310、1 583、1 485、1 311、1 177 cm-1.化合物2 質(zhì)譜圖中給出m/z 257.102 5［M-H］-（計算值為257.102 1），其分子量為258，分子式為C16H18O3.化合物2的NMR數(shù)據(jù)（表2）與化合物1的相似，除了C-5''羥基信號消失，取而代之的是1 個甲氧基信號.在HMBC 譜中δH3.66（3H，s）與C-3''相關(guān)，而3.68（3H，s）與C-5''相關(guān)，說明2個甲氧基分別連接于C-3''和C-5''.因此，化合物2的結(jié)構(gòu)式確定為1-（3-hydroxyphenyl）-2-（3，5-dimethoxyphenyl）ethane.

表2 化合物2的1H和13C-NMR數(shù)據(jù)（分別為500和125 MHz，CDCI3）Tab. 21H and13C-NMR data（500 and 125 MHz，respectively CDCl3）of compound 2

2.2.3 化合物3 無色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、乙醚、甲醇等有機溶劑.UV（CH3OH）λmax（nm）（logε）：252（3.12）；IR（KBr）νmax（cm-1）：3 306、1 583、1 481、1 301、1 171 cm-1.化合物3 質(zhì)譜圖中給出m/z 229.087 0［M-H］-（計算值為229.086 5），其分子量為230，分子式為C14H14O3.化合物3的NMR數(shù)據(jù)（表3）與化合物1的相似，除了C-3''甲氧基信號消失，取而代之的是1 個羥基信號.因此，化合物3 的結(jié)構(gòu)式確定為1-（3- hydroxyphenyl）-2-（3，5-dihydroxyphenyl）ethane.

表3 化合物3的1H和13C-NMR數(shù)據(jù)（分別為500和125 MHz，CDCI3）Tab. 31H and13C-NMR data（500 and 125 MHz，respectively CDCl3）of compound 3

3 討論

課題組在泡囊草化學(xué)成分前期研究［5，7］中，依次用石油醚、氯仿和乙酸乙酯回流提取，得到其提取物，采用硅膠柱色譜法對其氯仿提取物進行分離得到7-甲氧基香豆素、7-羥基香豆素、6，7，8-三甲氧基香豆素、8-羥基-6，7-二甲氧基香豆素和6，7-二羥基-8-甲氧基香豆素等5個化合物.筆者利用同樣提取方法得到其氯仿提取物，運用硅膠柱色譜和HPLC法對氯仿提取物進一步分離，得到上述5個化合物外，還得到了3個二苯乙烷類化合物，分別為1-（3-羥基苯基）-2-（5-羥基-3-甲氧基苯基）乙烷（1）、1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二甲氧基苯基）乙烷（2）和1-（3-羥基苯基）-2-（3，5-二羥基苯基）乙烷（3）. 3個化合物均在泡囊草中首次分離得到.此結(jié)果說明，藥材化學(xué)成分分離過程中各種色譜的合理結(jié)合運用使分離結(jié)果為更佳.