• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    外泌體在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病及治療中的作用研究進(jìn)展

    2021-11-30 10:08:35王若欣
    醫(yī)學(xué)研究雜志 2021年5期
    關(guān)鍵詞:外泌體充質(zhì)滑膜

    王若欣 張 勉

    骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)又稱退行性關(guān)節(jié)炎,主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨破壞、軟骨面出現(xiàn)垂直裂隙且伴有軟骨細(xì)胞/滑膜細(xì)胞反應(yīng)性增殖、關(guān)節(jié)囊中有骨及軟骨碎片等,但OA的具體發(fā)病機(jī)制仍不明確。目前對(duì)于OA的早期治療以非甾體類藥物治療為主,但藥物治療不良反應(yīng)明顯且最終仍無法避免關(guān)節(jié)軟骨的退變。晚期以手術(shù)治療為主,但是手術(shù)創(chuàng)傷大且費(fèi)用高昂[1,2]。近年來,以外泌體為對(duì)象的基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用研究逐漸興起,越來越多的研究表明,外泌體在OA的發(fā)展和治療中都有著極其特殊的作用,對(duì)外泌體的深入研究為明確OA的發(fā)病機(jī)制以及創(chuàng)新治療方式提供了新的前景。

    一、骨關(guān)節(jié)炎定義及組織改變

    一般而言,軟骨承受超負(fù)荷后會(huì)引起表面部位的變薄與結(jié)構(gòu)破壞,隨著時(shí)間的推移關(guān)節(jié)軟骨會(huì)進(jìn)一步凹陷破損,脫落的軟骨碎片進(jìn)入關(guān)節(jié)腔內(nèi),引起后續(xù)的一系列惡性反應(yīng)最終形成骨關(guān)節(jié)炎。正常軟骨由軟骨細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)組成[3]。在發(fā)生OA的關(guān)節(jié)軟骨中,軟骨細(xì)胞損傷和修復(fù)失衡引起ECM結(jié)構(gòu)破壞。在溶酶體蛋白酶以及膠原酶的作用下,軟骨基質(zhì)內(nèi)的蛋白多糖成分急劇減少、膠原纖維變性,同時(shí)軟骨細(xì)胞退化且功能受損失去合成ECM的能力。隨著關(guān)節(jié)軟骨的病變,軟骨承載和緩沖力量的能力下降,軟骨下骨逐漸暴露并承受較大應(yīng)力和摩擦力,進(jìn)而出現(xiàn)局部骨折、骨壞死,而關(guān)節(jié)面和周圍的骨質(zhì)代償性增生形成骨贅,同時(shí)可能會(huì)伴隨骨囊性病變發(fā)生[4]。

    二、外泌體的基本結(jié)構(gòu)與功能

    外泌體(exosomes,EX)是一種由磷脂雙分子層膜包裹的囊泡,直徑通常在30~120nm左右,幾乎所有細(xì)胞都能夠分泌[5]。外泌體膜上富含膽固醇和鞘磷脂。此外,膜上還富含具有交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白、參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易?CD63、CD81、CD9等)、熱休克蛋白家族以及一些細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)。外泌體內(nèi)則含有眾多代謝相關(guān)酶類、核糖體蛋白、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子等蛋白質(zhì),以及mRNA和miRNA,這些生物活性物質(zhì)分別對(duì)不同的細(xì)胞發(fā)揮不同的生理作用。外泌體由宿主細(xì)胞釋放,作用于各種受體細(xì)胞,在免疫應(yīng)答、腫瘤發(fā)展、代謝調(diào)節(jié)等眾多生理、病理過程中均起到重要作用。通過外泌體進(jìn)行細(xì)胞間信息交流無需細(xì)胞直接接觸,外泌體同靶細(xì)胞上的膜受體結(jié)合,激活胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)而改變受體細(xì)胞的活動(dòng)與功能。此外部分外泌體膜能同靶細(xì)胞膜融合使外泌體內(nèi)的生物活性物質(zhì)直接進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用[6]。

    三、外泌體在骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)展中的作用

    OA的發(fā)生、發(fā)展受到多種因素的影響,目前外泌體作為熱門研究方向,為骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展機(jī)制提供了新的研究方向。

    1.外泌體對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的影響:關(guān)節(jié)內(nèi)存在促炎性細(xì)胞因子、抗炎性細(xì)胞因子和雙向作用因子,三者的動(dòng)態(tài)平衡維持著關(guān)節(jié)軟骨正常的生理代謝。當(dāng)此動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)后,將會(huì)引起軟骨細(xì)胞代謝異常,誘發(fā)和促進(jìn)OA。實(shí)驗(yàn)證實(shí),在關(guān)節(jié)腔中存在外泌體參與的成纖維細(xì)胞與軟骨細(xì)胞之間的正反饋通路,促進(jìn)炎癥的發(fā)生[7]。當(dāng)用白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-1β處理滑膜成纖維細(xì)胞分泌的外泌體刺激OA軟骨細(xì)胞,能夠顯著上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13和結(jié)合蛋白序列的解聚蛋白樣金屬蛋白酶(adisintegrin and metalloprotease with thrombospondinmotifs,ADAMTS)-5的表達(dá),同時(shí)減少Ⅱ型膠原的分泌。此外,IL-1β處理后成纖維細(xì)胞分泌的外泌體中含有較豐富的IL-6、MMP-3、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子,這些細(xì)胞因子在OA早期發(fā)揮重要的促進(jìn)病變發(fā)展作用。

    此外,IL-1β刺激成纖維細(xì)胞后有340個(gè)miRNA被上調(diào)、24個(gè)被下調(diào),在其產(chǎn)生的外泌體中有11個(gè)miRNA被上調(diào)、39個(gè)被下調(diào),在細(xì)胞和外泌體內(nèi)均被上調(diào)的miRNA有5個(gè),這說明外泌體中的miRNA種類是細(xì)胞選擇性的結(jié)果。目前研究最廣的miR-4454受腫瘤壞死因子α刺激增多,miR-720在促進(jìn)細(xì)胞遷移中發(fā)揮作用[8,9]。成纖維樣滑膜細(xì)胞分泌的外泌體可影響軟骨細(xì)胞的增殖、分化、遷移及分泌活動(dòng),在促進(jìn)軟骨細(xì)胞凋亡的同時(shí)減少蛋白聚糖的產(chǎn)生,增加細(xì)胞外基質(zhì)成分的降解。以上研究表明,外泌體可減少正常軟骨細(xì)胞數(shù)目、降解細(xì)胞外基質(zhì),影響關(guān)節(jié)軟骨的正常形態(tài)以及功能。

    2.外泌體可作為OA潛在生物學(xué)標(biāo)志物:骨關(guān)節(jié)炎是漸進(jìn)性退行性疾病,目前主要檢測(cè)依靠患者自身感覺、影像學(xué)診斷和臨床特征性癥狀,仍缺乏統(tǒng)一的診斷學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)有的臨床診斷以及影像學(xué)檢查對(duì)于患者早期病癥缺乏敏感度,因此能夠明確的便于檢測(cè)的早期生物學(xué)改變,對(duì)于OA的診斷有重要意義。

    細(xì)胞產(chǎn)生并釋放到體液的外泌體能夠反映細(xì)胞的生理情況,故其有望作為部分疾病的發(fā)生、發(fā)展的生物學(xué)標(biāo)志物[10]。在關(guān)節(jié)退行性病變?cè)缙?,滑液中的Ⅱ型前膠原C端前肽表達(dá)增加,濃度升高,可預(yù)測(cè)早期的OA發(fā)生。而血清Ⅱ型膠原C末端肽和C端前肽濃度的動(dòng)態(tài)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于OA的早期診斷以及嚴(yán)重程度預(yù)判有參考價(jià)值[11]。此外,ADAMTs與OA發(fā)展有關(guān),早期OA患者中ADAMTs4水平高于中晚期患者,與ADAMTs1、3、5正好相反?;褐刑崛〉耐饷隗w內(nèi)高于正常濃度水平的miR-200C以及滑液中的相關(guān)促炎性細(xì)胞因子都可以作為標(biāo)志,而根據(jù)最新研究顯示,滑液中提取出的外泌體內(nèi)lncRNA PCGEM1可能是OA發(fā)展早期和晚期的區(qū)分標(biāo)識(shí)[12,13]。雖然外泌體具有作為生物學(xué)標(biāo)志物的潛力,但是到目前為止僅有少數(shù)因子有應(yīng)用價(jià)值。此外,軟骨組織、滑膜組織以及軟骨下骨產(chǎn)生的外泌體之間也會(huì)相互影響,再考慮到性別、年齡、種族、發(fā)病部位等因素,以及數(shù)量龐大的不同因子,還需要進(jìn)行更多的檢測(cè)與實(shí)驗(yàn)。

    四、外泌體在骨關(guān)節(jié)炎治療中的作用

    1.干細(xì)胞外泌體對(duì)OA治療的積極作用:目前很多研究表明間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSCs)來源的外泌體(MSCs-EX)對(duì)治療OA有積極作用[14]。Zhang等[15]研究證實(shí)MSCs-EX能夠從多個(gè)方面緩解OA的發(fā)展。間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體通過介導(dǎo)動(dòng)態(tài)修復(fù)進(jìn)程加快軟骨修復(fù),在大鼠骨軟骨缺損處加入MSCs-EX處理后新軟骨組織形成顯著增多,s-GAG和Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)顯著提升,同時(shí)Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)下降,軟骨深層組織中可觀察到有增大間隙的肥大軟骨細(xì)胞,軟骨下骨完全恢復(fù),新生軟骨組織同原組織結(jié)構(gòu)整合良好。MSCs-EX增強(qiáng)細(xì)胞增殖并減少細(xì)胞凋亡,MSCs-EX處理后軟骨組織和上覆滑膜組織中PCNA陽性細(xì)胞顯著增加,同時(shí)凋亡軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯減少。Liu等[16]也研究發(fā)現(xiàn)在小鼠OA模型中,MSCs-EX通過ln-cRNA-KLF3-AS1/miR-206/GIT1軸促進(jìn)OA中軟骨細(xì)胞的增殖并且抑制其凋亡。MSCs-EX促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞分化且同時(shí)減少M(fèi)1型巨噬細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子分泌。

    MSCs-EX主要通過腺苷介導(dǎo)的AKT和ERK信號(hào)通路調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞的生存、增殖以及基質(zhì)合成[17]。當(dāng)外泌體作用于軟骨細(xì)胞時(shí),AKT和ERK信號(hào)通路在1h內(nèi)開始磷酸化并在6h達(dá)到巔峰,說明MSCs-EX能夠很快地激活軟骨細(xì)胞,促進(jìn)軟骨細(xì)胞代謝活動(dòng)快速增加和相關(guān)基因表達(dá)。此外,軟骨細(xì)胞通過攝取外泌體還可以對(duì)自身活動(dòng)產(chǎn)生影響。Zhang等[15]研究發(fā)現(xiàn),軟骨細(xì)胞在遇到MSCs-EX后會(huì)快速將其吞入胞內(nèi),并且大部分吞入的外泌體會(huì)較長(zhǎng)時(shí)間集中存在于胞質(zhì)內(nèi),同時(shí)細(xì)胞增殖相關(guān)的基因如生存素、Bcl-2、FGF-2等的mRNA水平會(huì)在細(xì)胞同MSCs-EX直接接觸24h后明顯上升。同時(shí)與細(xì)胞遷移、分化、基質(zhì)合成等活動(dòng)相關(guān)的基因表達(dá)在4h后也有顯著提高。還有研究發(fā)現(xiàn)MSCs-EX可抑制IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎性細(xì)胞因子的表達(dá),同時(shí)促進(jìn)IL-10等抗炎性細(xì)胞因子的表達(dá),因此MSCs-EX也具有一定的抗炎潛能。

    2.外泌體miRNA對(duì)OA治療的作用:外泌體中含有大量的miRNA,miRNA通過調(diào)節(jié)組織中各種細(xì)胞的基因表達(dá)影響細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)。外泌體miRNA除了作為OA早期生物學(xué)標(biāo)志物的潛在價(jià)值外,還有治療的潛在可能。

    在MSCs-EX內(nèi)含有大量的miRNAs,可調(diào)節(jié)多種重要的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,較為主要的有ATK、ERK、SMAD等[18]。miR-125b和miR-320能夠通過下調(diào)ADAMTs而減輕OA的發(fā)展[19]。有關(guān)研究表明miR-23b是人間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化過程中有重要調(diào)節(jié)作用,miR-221和miR-92a則有可能在促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖和分化方面發(fā)揮作用[20]。此外,miR-140、miR-30a、miR-558、miR-476b和miR-142-3p也可以在抑制IL-1β和TNF-α這兩個(gè)促炎性細(xì)胞因子的表達(dá),同時(shí)抑制它們下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

    對(duì)外泌體進(jìn)行人工修飾或干預(yù)后治療OA目前也備受關(guān)注。Jones研究顯示滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞具有使軟骨再生的組織特異性,對(duì)于軟骨再生具有重要的潛力。外泌體是Wnt信號(hào)通路中的一種潛在的細(xì)胞外運(yùn)輸載體,外泌體中的Wnt5a/b通過激活Hippo-YAP信號(hào)通路中的YAP(yes-associated protein),對(duì)抗經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號(hào),減少包括轉(zhuǎn)錄因子SOX9在內(nèi)的主鏈β-catenin的基因表達(dá),由此調(diào)控ECM的基因表達(dá)和軟骨形成[21,22]。Tao等[23]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體中Wnt5a/b含量較高,會(huì)激活YAP引起軟骨細(xì)胞的增殖和遷移,但是會(huì)引起SOX9表達(dá)降低以及ECM蛋白合成分減少。而miR-140-5p能夠通過增強(qiáng)SOX9以及蛋白聚糖的表達(dá)維持軟骨內(nèi)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)進(jìn)而緩解OA的進(jìn)程,利用添加核酸的方法在滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞(synovial membrane-derived MSCs,SMMSCs)以及其外泌體中過表達(dá)miR-140-5p,能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖和遷移的同時(shí)促進(jìn)軟骨細(xì)胞合成ECM蛋白,滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的高表達(dá)miR-140-5p的外泌體具有治療OA的潛力[24]。因此,外泌體內(nèi)miRNA為OA的治療提供了研究方向以及新策略。

    3.抑制OA中炎性細(xì)胞外泌體對(duì)OA的治療作用:已有實(shí)驗(yàn)證明在OA中關(guān)節(jié)軟骨和滑膜細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體及其內(nèi)容物起著促進(jìn)OA發(fā)展的作用,如果抑制了相關(guān)外泌體的作用就可能緩解OA的進(jìn)展。目前的研究主要集中在通過相關(guān)miRNA抑制物或者類似物(模擬物)抑制炎性細(xì)胞外泌體內(nèi)miRNA及炎性細(xì)胞因子作用減緩OA,例如通過向關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射miR-34a的抑制物,增加Col2a1降低 iNOS,進(jìn)而緩解OA發(fā)展過程[25]?;ひ彩悄壳把芯靠赡艿闹委煱悬c(diǎn)之一,IL-6作為一種炎性介質(zhì)在OA中起調(diào)控作用,Chen等[26]研究數(shù)據(jù)顯示,通過抑制滑膜組織外泌體中IL-6含量對(duì)于治療滑膜炎以及OA可能有著較好療效。也有部分研究者在研究干擾特定靶點(diǎn)的新治療方法,包括抗纖維素抗體、TNF單克隆抗體、抗神經(jīng)生長(zhǎng)因子抗體、抗蛋白酶(ADAMTs和MMPs)和緩激肽抗體等,用以對(duì)抗外泌體中相對(duì)應(yīng)的成分,從而發(fā)揮治療作用。此外還可以利用外泌體進(jìn)行基因治療,在關(guān)節(jié)局部導(dǎo)入含有高表達(dá)細(xì)胞因子基因或者細(xì)胞因子抑制劑基因的外泌體,使它們能夠緩慢且持續(xù)地在OA關(guān)節(jié)中發(fā)揮療效。

    五、展 望

    外泌體的發(fā)現(xiàn)為研究OA的發(fā)病機(jī)制、診斷與治療打開了新的大門。外泌體的內(nèi)容物會(huì)隨著OA病程的發(fā)展而改變,也有相關(guān)實(shí)驗(yàn)顯示在OA的早、中、晚期會(huì)有特定的細(xì)胞因子或miRNA等發(fā)生特定的上調(diào)或下降,故外泌體有可能在未來作為檢驗(yàn)OA的生物學(xué)標(biāo)志物。同時(shí)外泌體作為軟骨組織、滑膜組織、軟骨下骨等組織的樞紐,可激活不同的信號(hào)通路起傳遞信息的作用,進(jìn)而影響OA 的進(jìn)展。而MSC-EX可通過增加軟骨細(xì)胞增殖、減少軟骨細(xì)胞凋亡以及抑制炎癥等對(duì)損傷關(guān)節(jié)進(jìn)行修復(fù),延緩疾病的發(fā)展。綜上所述,不同細(xì)胞來源的外泌體對(duì)于OA的發(fā)展和診療作用已經(jīng)表現(xiàn)出顯著的影響,今后有必要對(duì)其進(jìn)行深入研究。

    猜你喜歡
    外泌體充質(zhì)滑膜
    基于滑膜控制的船舶永磁同步推進(jìn)電機(jī)直接轉(zhuǎn)矩控制研究
    外泌體miRNA在肝細(xì)胞癌中的研究進(jìn)展
    高層建筑施工中的滑膜施工技術(shù)要點(diǎn)探討
    miR-490-3p調(diào)控SW1990胰腺癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
    間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在口腔組織再生中的研究進(jìn)展
    間充質(zhì)干細(xì)胞治療老年衰弱研究進(jìn)展
    循環(huán)外泌體在心血管疾病中作用的研究進(jìn)展
    三七總皂苷對(duì)A549細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響
    外泌體在腫瘤中的研究進(jìn)展
    滑膜肉瘤的研究進(jìn)展
    精品少妇一区二区三区视频日本电影| av中文乱码字幕在线| 色av中文字幕| 男女下面插进去视频免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 欧美日本中文国产一区发布| 色综合婷婷激情| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美在线黄色| 999久久久精品免费观看国产| av片东京热男人的天堂| cao死你这个sao货| 国产伦人伦偷精品视频| 制服丝袜大香蕉在线| 女性被躁到高潮视频| 黄片大片在线免费观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一进一出抽搐动态| 韩国精品一区二区三区| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲少妇的诱惑av| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久性视频一级片| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久久久久国内视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产一区二区三区视频了| 99国产精品99久久久久| 成年人黄色毛片网站| 欧美成人性av电影在线观看| 久久香蕉国产精品| www.999成人在线观看| 午夜福利免费观看在线| www.999成人在线观看| 亚洲无线在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费 | 少妇 在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 又紧又爽又黄一区二区| 国产真人三级小视频在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产免费av片在线观看野外av| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲av熟女| 国产麻豆成人av免费视频| 天天添夜夜摸| 亚洲色图av天堂| 一区二区三区国产精品乱码| 黄片播放在线免费| 精品久久蜜臀av无| 精品无人区乱码1区二区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产麻豆成人av免费视频| 午夜成年电影在线免费观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 91大片在线观看| 国产av一区在线观看免费| 欧美一级毛片孕妇| 国产欧美日韩一区二区精品| 这个男人来自地球电影免费观看| 满18在线观看网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 视频区欧美日本亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲激情在线av| 黄色视频,在线免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 免费观看精品视频网站| 丝袜在线中文字幕| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产精品av久久久久免费| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲欧美精品综合久久99| 岛国在线观看网站| 亚洲美女黄片视频| 黑丝袜美女国产一区| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产高清激情床上av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久久久久久久久大奶| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲男人的天堂狠狠| 精品国产国语对白av| 亚洲国产精品合色在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜福利一区二区在线看| 精品久久久久久成人av| tocl精华| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 村上凉子中文字幕在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 成人欧美大片| 欧美乱色亚洲激情| 国产亚洲av高清不卡| www.自偷自拍.com| 久久香蕉国产精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品久久电影中文字幕| 一区二区三区国产精品乱码| 悠悠久久av| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 电影成人av| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲激情在线av| av免费在线观看网站| 久久青草综合色| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 多毛熟女@视频| 老司机福利观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久影院123| av电影中文网址| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久久久亚洲av毛片大全| 999久久久国产精品视频| 国产亚洲精品一区二区www| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 精品国产美女av久久久久小说| 男女下面进入的视频免费午夜 | 一个人观看的视频www高清免费观看 | 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国产成人影院久久av| 午夜精品在线福利| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产熟女xx| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日本欧美视频一区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品91蜜桃| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品久久电影中文字幕| 大码成人一级视频| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久久久午夜电影| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| av有码第一页| 午夜亚洲福利在线播放| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲午夜理论影院| 午夜影院日韩av| 久久亚洲真实| x7x7x7水蜜桃| 国内精品久久久久久久电影| 大型av网站在线播放| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 婷婷精品国产亚洲av在线| 午夜福利欧美成人| 婷婷六月久久综合丁香| 88av欧美| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久久久久久久久久久大奶| 麻豆av在线久日| 日韩欧美免费精品| 在线永久观看黄色视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 搞女人的毛片| 欧美日韩黄片免| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久香蕉国产精品| av欧美777| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久久水蜜桃国产精品网| 啪啪无遮挡十八禁网站| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 日韩国内少妇激情av| 好男人电影高清在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 黄色视频,在线免费观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 在线永久观看黄色视频| 免费少妇av软件| 国产成人系列免费观看| 免费少妇av软件| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久久久久久免费视频了| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久久久久久久免费视频了| www.熟女人妻精品国产| 亚洲avbb在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 99久久精品国产亚洲精品| 久9热在线精品视频| 国产麻豆69| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久国产精品影院| 免费在线观看完整版高清| 这个男人来自地球电影免费观看| 国内精品久久久久久久电影| 国产精品国产高清国产av| 丰满的人妻完整版| 18禁美女被吸乳视频| 91老司机精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久久久国产一级毛片高清牌| 在线观看www视频免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品国产高清国产av| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品久久视频播放| 国产激情欧美一区二区| 神马国产精品三级电影在线观看 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久午夜综合久久蜜桃| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美乱码精品一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美激情极品国产一区二区三区| 性少妇av在线| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 变态另类丝袜制服| 久久草成人影院| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 极品人妻少妇av视频| 757午夜福利合集在线观看| 国产av一区二区精品久久| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲av电影不卡..在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 午夜精品在线福利| 看片在线看免费视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 1024视频免费在线观看| 中文字幕久久专区| av视频免费观看在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 真人做人爱边吃奶动态| 在线观看免费视频日本深夜| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产单亲对白刺激| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲激情在线av| 性欧美人与动物交配| www日本在线高清视频| 午夜福利一区二区在线看| 欧美成狂野欧美在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久这里只有精品19| 99国产精品一区二区三区| 在线天堂中文资源库| 免费不卡黄色视频| 无限看片的www在线观看| 最好的美女福利视频网| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲专区字幕在线| 黄色女人牲交| 大香蕉久久成人网| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久精品国产清高在天天线| 日本vs欧美在线观看视频| 久久 成人 亚洲| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩欧美免费精品| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品国产国语对白av| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久久国产成人免费| 亚洲国产欧美网| 国产成年人精品一区二区| 99久久精品国产亚洲精品| 手机成人av网站| 黄色女人牲交| 午夜久久久在线观看| 身体一侧抽搐| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美中文综合在线视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 真人一进一出gif抽搐免费| 黄色毛片三级朝国网站| АⅤ资源中文在线天堂| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 中文亚洲av片在线观看爽| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美+亚洲+日韩+国产| 男女下面插进去视频免费观看| av天堂久久9| 免费少妇av软件| 久久性视频一级片| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 91老司机精品| 丁香欧美五月| 大型av网站在线播放| 咕卡用的链子| 美女午夜性视频免费| a在线观看视频网站| 国产免费男女视频| 宅男免费午夜| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 麻豆成人av在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| xxx96com| 精品国产一区二区三区四区第35| 无限看片的www在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美日本视频| 亚洲久久久国产精品| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 两个人视频免费观看高清| 亚洲av成人一区二区三| av欧美777| 国产亚洲av嫩草精品影院| 在线观看舔阴道视频| 亚洲片人在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 精品高清国产在线一区| 亚洲熟妇熟女久久| 日韩欧美在线二视频| 一区二区三区高清视频在线| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 国产又色又爽无遮挡免费看| 视频在线观看一区二区三区| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久水蜜桃国产精品网| 精品日产1卡2卡| 97人妻天天添夜夜摸| 搡老妇女老女人老熟妇| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 无遮挡黄片免费观看| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲精品国产区一区二| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产成人av激情在线播放| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲精品美女久久av网站| 狂野欧美激情性xxxx| 九色国产91popny在线| 亚洲精品一区av在线观看| 又大又爽又粗| 国产乱人伦免费视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 97碰自拍视频| 十八禁人妻一区二区| 热re99久久国产66热| 国产三级黄色录像| 国产av一区在线观看免费| 久久狼人影院| 99香蕉大伊视频| 看黄色毛片网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| а√天堂www在线а√下载| 成人免费观看视频高清| 日韩免费av在线播放| 欧美黑人精品巨大| 欧美日本中文国产一区发布| 99香蕉大伊视频| 无限看片的www在线观看| 日本五十路高清| 一个人免费在线观看的高清视频| 丝袜美腿诱惑在线| 色精品久久人妻99蜜桃| 三级毛片av免费| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 美女大奶头视频| 国产高清有码在线观看视频 | 国产成人精品无人区| 午夜久久久在线观看| 国产视频一区二区在线看| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲av片天天在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 在线视频色国产色| 久久精品国产亚洲av高清一级| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 老司机在亚洲福利影院| 免费看a级黄色片| 精品人妻在线不人妻| cao死你这个sao货| 91精品国产国语对白视频| 国产一区二区三区视频了| 国产精品一区二区三区四区久久 | 精品人妻1区二区| 淫秽高清视频在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品一区二区精品视频观看| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲 国产 在线| 亚洲av成人av| 国产精品二区激情视频| 久久久久久大精品| 精品久久久久久成人av| 欧美国产日韩亚洲一区| 精品国产亚洲在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产麻豆69| 老司机靠b影院| 免费看十八禁软件| 亚洲最大成人中文| 久久久国产精品麻豆| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 精品卡一卡二卡四卡免费| 午夜福利高清视频| 99精品久久久久人妻精品| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 桃红色精品国产亚洲av| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 最新美女视频免费是黄的| 色老头精品视频在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| www.www免费av| 精品国产国语对白av| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美一级毛片孕妇| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 人妻久久中文字幕网| 日韩免费av在线播放| 欧美色欧美亚洲另类二区 | av福利片在线| 久久人人精品亚洲av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| av欧美777| 久久国产精品人妻蜜桃| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲最大成人中文| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久欧美精品欧美久久欧美| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 夜夜夜夜夜久久久久| 黄色视频,在线免费观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 黑人欧美特级aaaaaa片| av电影中文网址| 一级a爱片免费观看的视频| 久久久久久久久久久久大奶| 黄片播放在线免费| 亚洲少妇的诱惑av| 日韩大码丰满熟妇| 看黄色毛片网站| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲黑人精品在线| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲成国产人片在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲视频免费观看视频| 久久精品成人免费网站| 久久热在线av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 精品国产一区二区久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 天天添夜夜摸| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 99热只有精品国产| 99久久综合精品五月天人人| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久草成人影院| 国产伦一二天堂av在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 精品熟女少妇八av免费久了| 日日爽夜夜爽网站| 日本五十路高清| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久热在线av| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 一级毛片精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 性色av乱码一区二区三区2| 精品久久久精品久久久| 亚洲av电影在线进入| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 两个人视频免费观看高清| 99国产精品一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 色播在线永久视频| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品99久久99久久久不卡| 夜夜爽天天搞| 国语自产精品视频在线第100页| 一本久久中文字幕| 亚洲精品在线美女| 国产成人影院久久av| 自线自在国产av| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲国产精品久久男人天堂| 精品一品国产午夜福利视频| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲av片天天在线观看| 久久亚洲真实| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲五月天丁香| 午夜精品国产一区二区电影| x7x7x7水蜜桃| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩欧美在线二视频| 他把我摸到了高潮在线观看| av天堂久久9| 国产精品精品国产色婷婷| 国产伦一二天堂av在线观看| 91av网站免费观看| 亚洲欧美激情在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲精品国产区一区二| 久久久久国产一级毛片高清牌| 男女下面进入的视频免费午夜 | av欧美777| 在线观看日韩欧美| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲久久久国产精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 黑人操中国人逼视频| 日本欧美视频一区| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一级毛片高清免费大全| 婷婷六月久久综合丁香| av片东京热男人的天堂| 国产一区二区三区视频了| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲五月色婷婷综合| 精品国产乱码久久久久久男人| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久狼人影院| 操美女的视频在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 桃色一区二区三区在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久久精品欧美日韩精品| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲国产精品999在线| 又大又爽又粗| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美久久黑人一区二区| 一区福利在线观看| 欧美午夜高清在线| 亚洲精品久久国产高清桃花| 一本大道久久a久久精品| 国产一区二区三区综合在线观看| www.熟女人妻精品国产| av天堂在线播放| 一本久久中文字幕| 欧美亚洲日本最大视频资源| 电影成人av| 精品久久久久久成人av| 欧美久久黑人一区二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久青草综合色| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 男人操女人黄网站| 亚洲色图av天堂| 波多野结衣高清无吗| 日韩视频一区二区在线观看| 9色porny在线观看| 美女午夜性视频免费| 69精品国产乱码久久久| 亚洲色图av天堂| 久久中文字幕一级| 精品一区二区三区av网在线观看| 91精品三级在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 男女午夜视频在线观看| bbb黄色大片| 老鸭窝网址在线观看| 看黄色毛片网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 日本黄色视频三级网站网址| 69av精品久久久久久| 一区二区三区国产精品乱码| 精品国产美女av久久久久小说| 十分钟在线观看高清视频www| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产av精品麻豆| 老司机午夜福利在线观看视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美成狂野欧美在线观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频|