組蛋白修飾酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法在腫瘤領(lǐng)域的研究進(jìn)展

張林,丁杰,,李顯,樊斐,曾家興，陳俊豪，黃銳，張媛玲

【提要】 組蛋白修飾在基因調(diào)控、腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡以及DNA修復(fù)等方面發(fā)揮了重要作用。近年來(lái)，以PD-1、PD-L1及CTLA-4抗體為代表的免疫檢查點(diǎn)抑制劑在腫瘤治療中取得了顯著的臨床療效，但臨床應(yīng)用中仍有部分患者無(wú)應(yīng)答。目前眾多研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白修飾中甲基化、乙?；头核鼗瘏⑴c了腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的增殖、分化等過(guò)程，并發(fā)現(xiàn)一些組蛋白修飾酶抑制劑和免疫檢查點(diǎn)阻斷療法之間存在協(xié)同效應(yīng)。本文就組蛋白修飾酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法在腫瘤領(lǐng)域的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為腫瘤的臨床治療和研究提供新的思路。

表觀遺傳學(xué)的本質(zhì)是核苷酸序列在沒(méi)有發(fā)生改變的前提下，其功能發(fā)生可遺傳變化進(jìn)而導(dǎo)致基因表達(dá)水平發(fā)生變化[1]。組蛋白修飾作為表觀遺傳修飾的重要形式之一，對(duì)腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移起著重要的調(diào)控作用，因此逐漸成為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。目前，組蛋白修飾酶相關(guān)抑制劑已在結(jié)腸癌、胃癌等腫瘤研究中取得顯著進(jìn)展[2]，但是大多處于臨床前試驗(yàn)階段，組蛋白修飾對(duì)腫瘤調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明，組蛋白修飾酶抑制劑在腫瘤治療的全面應(yīng)用仍需更多的研究。

近年來(lái)，免疫檢查點(diǎn)抑制劑在包括黑色素瘤在內(nèi)的許多腫瘤治療中發(fā)揮了顯著的臨床療效，減少了腫瘤的復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率[3]，但由于腫瘤的異質(zhì)性，使用免疫檢查點(diǎn)抑制劑時(shí)仍有部分患者沒(méi)有產(chǎn)生有效應(yīng)答[4]。當(dāng)前眾多研究表明，部分組蛋白甲基化、乙?；胺核鼗揎椕竻⑴c調(diào)節(jié)包括PD-1、PD-L1及CTLA-4在內(nèi)的免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)，一些組蛋白修飾酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)。

1 組蛋白與組蛋白修飾的分類(lèi)

組蛋白是染色質(zhì)中核小體的重要組成成分，分為2大類(lèi)(5種)：一類(lèi)是核心組蛋白，分別為H2A、H2B、H3、H4；另一類(lèi)是連接組蛋白即H1。組蛋白修飾包括甲基化(methylation)、乙?；?acetylation)、泛素化(ubiquitination)、磷酸化(phosphorylation)、SUMO化(small ubiquitin-related modifier)等，這些修飾之間相互作用，在組蛋白的N末端發(fā)生共價(jià)修飾，因此形成了“組蛋白密碼”[5]，這些密碼被含有特定結(jié)構(gòu)域的蛋白解讀后，能夠進(jìn)一步調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄中激活和沉默等重要的生物學(xué)過(guò)程[6]。

1.1 組蛋白乙?；讣耙种苿?/h3>

組蛋白乙?；悄壳把芯孔疃嗟慕M蛋白修飾種類(lèi)，在多種類(lèi)型腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。其中，組蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)和組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶 (histone acetyltransferase, HAT)是染色質(zhì)重塑、基因表達(dá)控制和抗腫瘤研究最多的靶標(biāo)，組蛋白乙酰化途徑主要受到這兩類(lèi)酶調(diào)節(jié)[7-8]。

組蛋白去乙?；敢种苿?HDAC inhibitors，HDACi)主要通過(guò)改變機(jī)體內(nèi)組蛋白乙?；癄顟B(tài)來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和凋亡，從而表現(xiàn)出抗腫瘤活性[9]?；诮M蛋白去乙?；冈谀[瘤中起著關(guān)鍵的生物學(xué)作用，研究者開(kāi)發(fā)出了一系列HDACi，如2006年伏立諾他(vorinostat，SAHA)為第一個(gè)被FDA批準(zhǔn)上市用于治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤[10]；2014年貝利司他(belinostat，PXD101)被FDA 批準(zhǔn)用于治療外周T細(xì)胞淋巴瘤[11]；苯甲酰胺類(lèi)的恩替諾特(entinostat，MS-275)作為Ⅰ型HDAC亞型的HDACi被批準(zhǔn)上市[12]；2015年帕比司他(panobinosta，LBH589)作為泛組蛋白去乙?；敢种苿┍籉DA批準(zhǔn)治療多發(fā)性骨髓瘤[13]。

在臨床試驗(yàn)中，多數(shù)HDACi小劑量單藥給藥時(shí)顯示出良好的抗腫瘤效果，但是多數(shù)HDACi除與Zn2+結(jié)合外還與其他金屬酶結(jié)合，因而缺乏特異性，在很小的劑量下就可發(fā)生惡心、嘔吐等副作用[14]。因此，急需較高特異性和低副作用的HDACi產(chǎn)生，為臨床患者提供更優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

1.2 組蛋白甲基化酶及抑制劑

組蛋白甲基化主要由組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(histone methyltransferase，HMT)催化。HMT家族包括組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(histone lysine methyltransferase，HKMT)和組蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(protein arginine methyltransferase，PRMT)[15]。其中HKMT又分為L(zhǎng)SD(lysine specific demethylase)和JMJD(JmJC domain-containing family)兩個(gè)家族。

組蛋白賴氨酸特異性去甲基酶1(lysine specific demethylase 1，LSD1)是一種黃素腺嘌呤二核苷依賴的去甲基酶，能特異性地去除組蛋白H3K4和H3K9的單雙甲基化修飾[16]，調(diào)控靶基因的表達(dá)。我們課題組研究發(fā)現(xiàn)，靶向沉默LSD1，能明顯減弱結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力[17]。因此，靶向LSD1是結(jié)腸癌潛在的治療策略。目前在腫瘤中研究較多的LSD1 抑制劑有苯環(huán)丙胺類(lèi)(TCP)、多肽類(lèi)(CBB1003)、小分子化合物(NCL1)等。

JMJD組蛋白去甲基化酶能特異性地去除賴氨酸三甲基化的修飾，其抑制劑主要包含：α-酮戊二酸 (2-OG)類(lèi)似物、基于吡啶(或嘧啶)的抑制劑、異羥肟酸類(lèi)抑制劑等[18]。

組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶EZH2是多梳抑制復(fù)合體2(polycombrepressivecomplex2, PRC2)介導(dǎo)組蛋白H3(H3K27me3)的催化亞基，H3K27甲基化能夠誘導(dǎo)下游基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄抑制并參與相關(guān)基因的表達(dá)。EZH2表達(dá)上調(diào)與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，EZH2的表達(dá)活性與結(jié)腸癌的發(fā)生和結(jié)腸癌患者的預(yù)后緊密相連[19]。

目前，對(duì)EZH2抑制劑種類(lèi)的報(bào)道有很多，DZNep是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的EZH2 抑制劑，其屬于SAH水解酶抑制劑。GSK126在2014年進(jìn)入Ⅰ期臨床試驗(yàn)被用于各種實(shí)體瘤、淋巴瘤，對(duì)EZH2具有極高的選擇性，能夠有效抑制對(duì)EZH2突變細(xì)胞的增殖[20]。雖然GSK126在小鼠的治療應(yīng)用中表現(xiàn)出很好的耐藥性，但仍然存在著血腦屏障通透性問(wèn)題[21]。

當(dāng)前組蛋白甲基化修飾多種酶被認(rèn)為是抗腫瘤藥物的新靶標(biāo)，其抑制劑在臨床前試驗(yàn)中顯示出一定的抗腫瘤效果，但仍處于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)階段，未能大規(guī)模獲得批準(zhǔn)投入臨床應(yīng)用，同時(shí)，組蛋白甲基化修飾酶抑制劑在臨床中的安全性如何尚待進(jìn)一步研究。

1.3 組蛋白泛素化酶及抑制劑

泛素化是將單個(gè)或多個(gè)泛素單體的羧基末端共價(jià)連接在賴氨酸殘基上的氨基的過(guò)程。通過(guò)泛素化修飾的蛋白質(zhì)大多在泛素-蛋白酶體作用下發(fā)生降解，進(jìn)而在細(xì)胞的增殖、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及腫瘤發(fā)生等生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用[22]。

組蛋白泛素化通常需要三種酶，包括泛素活化酶(E1)、泛素結(jié)合酶(E2)和泛素連接酶(E3)[23]，在去泛素化酶(deubiquitinating proteins, DUBs)作用下此過(guò)程可以發(fā)生逆向調(diào)控。在整個(gè)組蛋白泛素化過(guò)程中，E3擁有對(duì)目的蛋白識(shí)別和招募E2的關(guān)鍵作用，并且不同亞型的E3同源性低，對(duì)其底物具有高度特異性，在T細(xì)胞的調(diào)節(jié)和腫瘤免疫治療中發(fā)揮重要作用[24]，成為當(dāng)前泛素系統(tǒng)中的研究熱點(diǎn)。

E3主要分為環(huán)指(Ring-finger)家族、HECT家族等[25],其中，HECT家族中的UBR5作為泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，在結(jié)直腸癌[26]、三陰性乳腺癌[27]中呈現(xiàn)高表達(dá)水平，UBR5蛋白水平高的患者預(yù)后較差，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，敲低UBR5可有效控制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)UBR5的敲低降低腫瘤的生長(zhǎng)。由此看出，UBR5可能成為結(jié)腸癌、乳腺癌等腫瘤潛在治療和預(yù)后的靶點(diǎn)。

當(dāng)前，廣泛作用的蛋白酶體抑制劑已在臨床中使用，硼替佐米和卡非佐米進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)用于套細(xì)胞淋巴瘤。但是，關(guān)于組蛋白泛素化酶抑制劑在臨床中的應(yīng)用很少報(bào)道，相信在不久的將來(lái)將會(huì)造福于人類(lèi)。

2 免疫檢查點(diǎn)及抑制劑

如今，腫瘤免疫治療成為繼手術(shù)、放射、化療和靶向治療之后的第五大腫瘤治療方法，免疫檢查點(diǎn)抑制劑最受人們關(guān)注，被認(rèn)為是現(xiàn)代免疫治療的關(guān)鍵[28]。免疫檢查點(diǎn)作為一組對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)的因子，與腫瘤免疫逃逸密切相關(guān)。當(dāng)前，研究者對(duì)免疫檢查點(diǎn)的針對(duì)性研究日漸增多，如細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4(cytotoxic T-lymphocyte antigen-4, CTLA-4)、程序性細(xì)胞凋亡蛋白-1(programmed death-1 receptor, PD-1)、B7蛋白家族其他成員等，而PD-1/PD-L1和CTLA-4是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫檢查點(diǎn)抑制劑靶點(diǎn)。Allison和Honjo因發(fā)現(xiàn)CTLA-4和PD-1而榮獲2018年度諾貝爾生理獎(jiǎng)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)[29-30]。

PD-1又稱B7-H1、CD274，屬免疫球蛋白B7超家族，是一種重要的免疫檢查點(diǎn)[31]，主要在已激活的CD4+、CD8+T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞中表達(dá)，可影響樹(shù)突細(xì)胞的抗原提呈能力，并抑制腫瘤微環(huán)境中T淋巴細(xì)胞參與的遲發(fā)性免疫應(yīng)答[32]，而PD-L1作為PD-1的主要配體，除在淋巴細(xì)胞表達(dá)外，在諸如黑色素瘤、肺癌、結(jié)腸癌等腫瘤細(xì)胞表面異常表達(dá)并證實(shí)可能成為某些腫瘤預(yù)后的靶標(biāo)。

CTLA-4又名CD152，是T細(xì)胞表面的跨膜受體，與CD28共同享有B7分子配體。在正常生理?xiàng)l件下，當(dāng)CTLA-4與抗原提呈細(xì)胞表面B7分子結(jié)合時(shí)，可誘導(dǎo)T細(xì)胞發(fā)生無(wú)反應(yīng)性，減少因T細(xì)胞過(guò)度激活所帶來(lái)的免疫損傷。阻斷CTLA-4蛋白結(jié)合位點(diǎn)，可減弱Tregs對(duì)T細(xì)胞的活性抑制作用并能阻斷其與抗原提呈細(xì)胞表面的配體B7結(jié)合，因而能夠有效活化T細(xì)胞，增強(qiáng)T細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)[33]

當(dāng)前，pembrolizumab、nivolumab、atezolizumab和avelumab在內(nèi)的PD-1/PD-L1抑制劑和CTLA-4抑制劑ipilimumab已被FDA批準(zhǔn)用于多種腫瘤的臨床治療，但由于腫瘤的異質(zhì)性和腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment, TME)的復(fù)雜性，免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療的總體有效率較低[34]。

3 組蛋白修飾酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法在相關(guān)腫瘤中的研究

眾多研究證實(shí)，組蛋白修飾酶抑制劑和免疫檢查點(diǎn)抑制劑顯現(xiàn)出各自積極的抗腫瘤效應(yīng)，但是單一療法的局限性嚴(yán)重困擾著腫瘤患者。越來(lái)越多的證據(jù)支持組蛋白修飾酶及抑制劑具有免疫調(diào)節(jié)活性，能夠調(diào)控免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)，介導(dǎo)其抗腫瘤效果，同時(shí)發(fā)現(xiàn)組蛋白修飾酶抑制劑與免疫檢查點(diǎn)阻斷療法之間存在協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)。

3.1 組蛋白去乙?；敢种苿┞?lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法

HDACi不僅可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞來(lái)提高免疫應(yīng)答，而且可提高腫瘤細(xì)胞的免疫原性達(dá)到消除腫瘤細(xì)胞的目的。panobinostat可以提高包括PD-L1在內(nèi)的腫瘤細(xì)胞表面上免疫檢查點(diǎn)配體的表達(dá)，進(jìn)而影響免疫檢查點(diǎn)阻斷療法的效果[35]。臨床前相關(guān)研究表明[36]，HDACi以劑量依賴的方式誘導(dǎo)PD-L1的上調(diào)，在評(píng)估的抑制劑中，panobinostat顯示出最大的增強(qiáng)PD-L1表達(dá)的能力，為panobinostat和抗PD-1組合治療提供了依據(jù)。

當(dāng)前，一些關(guān)于HDACi聯(lián)合免疫治療的療法在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出令人鼓舞的療效，然而研究最多的組合為HDACi聯(lián)合靶向PD-1、PD-L1及CTLA-4的免疫檢查點(diǎn)阻斷療法[37]。

Orillion等[38]在腎細(xì)胞癌荷瘤小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，與單個(gè)治療組相比，Entinostat和抗PD-1治療的組合最有效的增強(qiáng)了腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。為了將這些觀察結(jié)果擴(kuò)展到其他小鼠模型，此團(tuán)隊(duì)使用肺癌荷瘤小鼠，用同樣的方法發(fā)現(xiàn)Entinostat和抗PD-1治療的組合導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)顯著減少。同時(shí)，為了檢查Entinostat對(duì)TME的作用，對(duì)各樣本進(jìn)行蛋白組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)Entinostat足以將TME的免疫特性改變?yōu)橐环N抗腫瘤狀態(tài)，這可能會(huì)使TME更好地響應(yīng)免疫治療干預(yù)措施。另外，Kim等[39]在CT26同基因小鼠中發(fā)現(xiàn)，HDAC抑制劑CG-745或抗PD-1單藥治療未顯示出腫瘤清除反應(yīng)，當(dāng)用CG-745和抗PD-1聯(lián)合治療時(shí)，CT26同基因小鼠顯示出有效的腫瘤生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，包括完全的腫瘤清除。為了解CG-745誘導(dǎo)小鼠免疫微環(huán)境的變化，隨機(jī)選擇小鼠并分離腫瘤組織，發(fā)現(xiàn)CG-745在同基因小鼠中增加浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞并減少M(fèi)DSC細(xì)胞,結(jié)果顯示，CG-745誘導(dǎo)的免疫微環(huán)境變化對(duì)抗PD-1等靶向藥物有益。

為了研究抗CTLA-4和HDACi聯(lián)合用藥的療效，Llopiz等[40]在皮下接種Hepa129細(xì)胞的肝癌小鼠中發(fā)現(xiàn)，belinostat單藥治療未顯示出任何體內(nèi)抗腫瘤作用，而抗CTLA-4明顯延遲了腫瘤生長(zhǎng)，當(dāng)與belinostat聯(lián)合應(yīng)用時(shí)這種作用更為明顯?？笴TLA-4聯(lián)合belinostat治療的小鼠30d存活率為100%，顯著高于僅用抗CTLA-4治療的75%。為了了解其背后的免疫機(jī)制，對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行免疫參數(shù)分析，抗CTLA-4聯(lián)合belinostat的抗腫瘤作用增強(qiáng)與M1巨噬細(xì)胞早期浸潤(rùn)增加和PD-L1上調(diào)有關(guān)。這些結(jié)果為檢測(cè)belinostat和抗CTLA-4增強(qiáng)肝癌患者的治療活性提供了依據(jù)。

以上研究證實(shí)HDACi和免疫檢查點(diǎn)阻斷療法聯(lián)合應(yīng)用的抗腫瘤效果，HDACi通過(guò)改善TME發(fā)揮與免疫檢查點(diǎn)阻斷療法聯(lián)合治療的協(xié)同作用。但是想要確定晚期腫瘤患者的療效、客觀緩解率和無(wú)進(jìn)展生存期，仍需要進(jìn)行HDACi聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法的I/II期臨床試驗(yàn)。

3.2 組蛋白甲基化修飾酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法

與組蛋白乙?；揎椣嗨?，組蛋白甲基化修飾可通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤的免疫原性來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答[41]。

以LSD1為代表的組蛋白甲基化修飾在腫瘤免疫治療中扮演了重要角色。Qin等[42]研究發(fā)現(xiàn)，在攜帶三陰性乳腺癌異種移植腫瘤的小鼠中，單獨(dú)使用抗PD-1抗體未能起到顯著的治療效果。但是，將LSD1抑制劑和PD-1抗體聯(lián)合使用能明顯抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移，這與異種移植腫瘤中Ki-67水平下降和CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)增加有關(guān)。另外，Sheng等[43]研究發(fā)現(xiàn)，僅用PD-1抑制劑對(duì)野生型B16腫瘤的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯影響；但是，在小鼠植入腫瘤后第14天，應(yīng)用PD-1抑制劑顯著降低了LSD1 KO B16腫瘤的生長(zhǎng)。此外，當(dāng)LSD1 KO或?qū)φ誃16腫瘤達(dá)到相同體積時(shí)，該課題組向小鼠施用了抗PD-1，以確保PD-1阻斷的作用不是由于LSD1 KO腫瘤生長(zhǎng)的動(dòng)力學(xué)延遲。在這兩種情況下，PD-1抑制劑對(duì)降低LSD1 KO腫瘤的生長(zhǎng)都具有深遠(yuǎn)的影響。可見(jiàn)，對(duì)于免疫原性較差的B16腫瘤而言，LSD1缺失可增強(qiáng)腫瘤的免疫原性并提高難治性小鼠黑色素瘤對(duì)抗PD-1治療的敏感性。LSD1抑制劑可能是免疫治療的有效輔助治療，LSD1抑制劑和抗PD-1之間存在協(xié)同作用，對(duì)免疫原性較差的腫瘤來(lái)說(shuō)是一種新型治療策略。

依據(jù)EZH2能夠調(diào)節(jié)H3K27的三甲基化抑制Th1型趨化因子CXCL9和CXCL10表達(dá)，從而減少效應(yīng)T細(xì)胞在腫瘤中的浸潤(rùn)，Dunn等[44]研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2抑制劑可以使H3K27的甲基化發(fā)生逆轉(zhuǎn)，進(jìn)一步促進(jìn)CXCL9和CXCL10的表達(dá)，增進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞向TME的浸潤(rùn)，以達(dá)到治療肺癌的目的。值得注意的是，T細(xì)胞浸潤(rùn)與黑色素瘤中EZH2-PRC2復(fù)合物活性的高選擇性有關(guān)。Zingg等[45]發(fā)現(xiàn)，在小鼠抗CTLA-4免疫治療中，腫瘤壞死因子α(TNF-α)的產(chǎn)生和T細(xì)胞的積累導(dǎo)致EZH2表達(dá)增加，從而抑制了自身的免疫原性，EZH2失活可逆轉(zhuǎn)這種耐藥性，并與抗CTLA-4協(xié)同抑制腫瘤的生長(zhǎng)。這些抗腫瘤效應(yīng)依賴于腫瘤內(nèi)積累產(chǎn)生的干擾素γ(IFN-γ)使浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞的黑色素瘤中PD-1表達(dá)顯著下降。因此，EZH2在T細(xì)胞靶向免疫治療中起著控制黑色素瘤逃逸的分子開(kāi)關(guān)的作用。

在TME分泌體刺激下，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞中的miR-26a升高會(huì)抑制EZH2的表達(dá)，從而損害細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)功能，這表明miR-26a-EZH2軸是一個(gè)新的靶點(diǎn)，可以提高基于CTLA的腫瘤免疫治療的效果[46]。EZH2因在TME中發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)功能，在腫瘤免疫治療中產(chǎn)生重要作用[47]，相關(guān)的臨床試驗(yàn)報(bào)道較少，需要進(jìn)一步研究闡述其具體機(jī)制。因此，靶向EZH2聯(lián)合免疫治療的抗腫瘤療法面臨著新的挑戰(zhàn)，值得進(jìn)一步深入研究。

3.3 組蛋白泛素化酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法

目前，泛素連接酶Cbl-b作為Cbl蛋白家族中的成員，已被確定為免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，在腫瘤免疫治療中以Cbl-b為靶點(diǎn)，可以參與CTLA-4在內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)[48]。Peer等[49]研究發(fā)現(xiàn)，Cbl-b缺失能夠延遲黑色素瘤小鼠模型的腫瘤生長(zhǎng)并延長(zhǎng)生存期。此外，在Cbl-b缺失的黑色素瘤小鼠中阻斷CTLA-4后可顯著提高這些作用。因此，進(jìn)一步表明Cbl-b可能是有用的臨床靶標(biāo)，靶向沉默Cbl-b或抑制Cbl-b活性聯(lián)合CTLA-4阻斷治療可能是一種潛在的腫瘤治療策略。

此外，研究發(fā)現(xiàn)I型干擾素受體IFNAR1的水平受IFNAR1泛素化E3連接酶的控制，IFNAR1在人類(lèi)結(jié)直腸癌和結(jié)直腸癌的小鼠中發(fā)生下調(diào)，這是CTL發(fā)生免疫耐受的重要因素[50]。Meng等[51]研究表明，E3連接酶F盒蛋白38(Fbxo38)能夠調(diào)節(jié)PD-1的表達(dá)，并且通過(guò)泛素化-蛋白酶體途徑使其降解。在T細(xì)胞中條件性敲除Fbxo38不會(huì)影響T細(xì)胞受體和CD28信號(hào)傳導(dǎo)，但是由于腫瘤浸潤(rùn)T細(xì)胞中PD-1的含量較高，導(dǎo)致小鼠腫瘤生長(zhǎng)持續(xù)加快，然而，IL-2提升了Fbxo38轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而下調(diào)PD-1的表達(dá)水平增強(qiáng)抗腫瘤活性。

以上研究表明，E3與免疫檢查點(diǎn)有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系，參與調(diào)節(jié)腫瘤免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)，但是目前組蛋白泛素化處于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)階段，尚未有研制成熟的抑制劑批準(zhǔn)上市應(yīng)用于臨床治療。

4 總結(jié)和展望

目前，在臨床診療中，針對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑途徑的免疫療法已在多種類(lèi)型的腫瘤中取得了巨大成功。但是，由于腫瘤和個(gè)體免疫系統(tǒng)的異質(zhì)性，包括PD-1/PD-L1在內(nèi)的單抗在許多惡性腫瘤中仍然顯示出較慢的響應(yīng)速度，嚴(yán)重困擾著腫瘤患者。

眾多研究已證實(shí)，組蛋白修飾酶抑制劑與免疫檢查點(diǎn)阻斷療法聯(lián)合應(yīng)用存在協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)，甚至提高腫瘤患者對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑的反應(yīng)率，可在很大程度上提升抗腫瘤效果。但是，當(dāng)前組蛋白修飾酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法的研究處于細(xì)胞和動(dòng)物等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究水平，尚未應(yīng)用于臨床研究。因此，需要我們從基礎(chǔ)研究中進(jìn)一步探索二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腫瘤影響的機(jī)制，加強(qiáng)臨床研究以期達(dá)到更好的治療效果。相信在不久的將來(lái)，組蛋白修飾酶抑制劑聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)阻斷療法將會(huì)給廣大腫瘤患者帶來(lái)福音。