赤芍抗血栓物質(zhì)基礎(chǔ)及相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展

趙繼榮 ，楊濤，趙寧，馬同，李瑋農(nóng)，張立存，薛旭，郭培堯

1.甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000

血栓性疾?。╰hrombotic diseases，TD）是血液中異常物質(zhì)沉積于血管內(nèi)壁致血管狹窄甚至閉塞而引發(fā)的一種嚴(yán)重的循環(huán)系統(tǒng)疾病。靜脈血栓癥是較為常見(jiàn)的血栓性疾病。由血栓引發(fā)的心腦血管疾病已成為人類(lèi)主要的死亡原因，且其發(fā)病率逐年上升。中醫(yī)學(xué)將其歸屬于“血瘀證”范疇。目前，臨床用于預(yù)防和治療TD 的藥物主要包括抗凝血、溶血栓及抗血小板聚集3 類(lèi)藥物，而抑制血小板聚集是抗栓治療的主要預(yù)防手段[1]。目前，雖然阿司匹林、氯吡格雷等傳統(tǒng)抗血小板藥物及普拉格雷、替格瑞洛、利伐沙班等新型抗血小板藥物已在臨床廣泛使用，但越來(lái)越多的研究表明，一些患者對(duì)這些藥物反應(yīng)不敏感，或表現(xiàn)出一定的耐藥性。中草藥已在臨床實(shí)踐中使用數(shù)千年，適應(yīng)證廣泛，安全性高，赤芍是其中之一。本文從赤芍本草考證、抗血栓形成的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制3 個(gè)方面進(jìn)行綜述，為其臨床應(yīng)用及深入研究提供依據(jù)。

1 本草考證

赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactifloraPall 或川赤芍Paeonia veitchiiLynch 的干燥根，味苦、微寒，歸肝經(jīng)，具有清熱涼血、散瘀止痛功效[2]。梁代之前，芍藥并無(wú)赤白之分，統(tǒng)稱(chēng)為芍藥。芍藥一詞首見(jiàn)于《詩(shī)經(jīng).鄭風(fēng).溱洧》：“維士與女，伊其相謔，贈(zèng)之以勺?！盵3]芍藥用于醫(yī)學(xué)首見(jiàn)于《五十二病方》，用芍藥治療“烏喙中毒”“疽病”。隨后《神農(nóng)本草經(jīng)》對(duì)芍藥的性味功效主治及生境有所記載，認(rèn)為“芍藥，味苦、性平，有小毒。治邪氣腹痛、寒熱、疝瘕，除血痹，破堅(jiān)積，止痛、利小便、益氣。生川谷及丘陵”。東漢末年《傷寒雜病論》載藥215 種，其中常用芍藥配伍組方，使用頻率高達(dá)56 次，但后世對(duì)書(shū)中芍藥赤白之分及藥味之酸苦爭(zhēng)議頗多，大多認(rèn)為此處的芍藥包括白芍和赤芍2 種。丁寶剛等[4]考證芍藥相關(guān)文獻(xiàn)，最終認(rèn)為《傷寒論》所用芍藥以赤白芍同用的概率較大，性味以苦為主，功效以破瘀逐痹為用；而溫小華等[5]考證《傷寒雜病論》所用芍藥的類(lèi)別，認(rèn)為仲景方中芍藥當(dāng)為現(xiàn)代的赤芍。直至梁代陶弘景所撰《本草經(jīng)集注》依據(jù)產(chǎn)地及性狀將芍藥分為赤、白2 種[6]。清末民初則依據(jù)野生與栽培、生用與加工不同分為赤芍與白芍。此后臨床應(yīng)用芍藥多有赤白之分，品質(zhì)評(píng)價(jià)以條粗長(zhǎng)、外皮易脫落、斷面白色粉性大者為佳，功效以清熱涼血、散瘀止痛為主。

2 物質(zhì)基礎(chǔ)研究

中藥化學(xué)組分復(fù)雜，其中具有藥理活性、能表達(dá)臨床療效的一個(gè)或多個(gè)化學(xué)成分稱(chēng)為物質(zhì)基礎(chǔ)，其對(duì)藥物發(fā)揮功效起著至關(guān)重要的作用。豐富的化學(xué)組分使中藥具有多靶點(diǎn)及整合調(diào)節(jié)的特色與優(yōu)勢(shì)。但大多中藥發(fā)揮功效的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚不明確，中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究對(duì)揭示中藥復(fù)方配伍的內(nèi)在規(guī)律及指導(dǎo)臨床應(yīng)用至關(guān)重要[7]。

赤芍化學(xué)組分極其復(fù)雜，大多為極性或半極性，采用不同的溶劑及方法可提取不同極性的化學(xué)組分；多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，赤芍中含有萜類(lèi)及其苷、黃酮及其苷、鞣質(zhì)類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、酚酸及其苷、糖類(lèi)、醇類(lèi)、酚類(lèi)、生物堿、微量元素等多種成分[8]。赤芍中各苷類(lèi)的總稱(chēng)為赤芍總苷（TPG），是其主要有效成分。復(fù)雜的化學(xué)成分決定赤芍功效豐富多樣，其在保肝、抗炎、抗腫瘤、保護(hù)心血管系統(tǒng)、抗血小板凝聚、抗血管生成、抗糖尿病等方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值[9]。

血栓性疾病（血瘀證）常治以活血化瘀，赤芍為常用活血化瘀類(lèi)中藥。王琳琳等[10]采用冰水刺激和注射腎上腺素方法造成大鼠血瘀證模型，使用TPG 進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)TPG 可降低血小板聚集率，延長(zhǎng)凝血時(shí)間，降低血液黏度，減少血栓生成。邱燦華等[11]通過(guò)電刺激建立大鼠血瘀證模型，靜脈注射TPG，發(fā)現(xiàn)TPG 具有較好的抗血栓作用。Xie 等[12]采用生物活性導(dǎo)向法分離鑒定赤芍中的化合物，并通過(guò)急性血瘀大鼠模型研究其抗血栓形成作用及其機(jī)制，發(fā)現(xiàn)芍藥苷、五沒(méi)食子酰葡萄糖、芍藥內(nèi)酯苷、原兒茶酸4 種化合物具有體外抗凝血活性。熱娜.卡斯木等[13]以新疆赤芍為研究對(duì)象，采用抗血小板聚集模型對(duì)其活性成分進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)兒茶素、芍藥苷、丹皮酚及沒(méi)食子酸具有抗血小板聚集活性，并發(fā)現(xiàn)其中沒(méi)食子酸抗血小板聚集能力最弱。

可見(jiàn)，赤芍中TPG、芍藥苷、五沒(méi)食子酰葡萄糖、芍藥內(nèi)酯苷、原兒茶酸、丹皮酚為赤芍發(fā)揮抗血栓功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

3 作用機(jī)制研究

血栓形成與血管內(nèi)皮損傷、血小板功能異常、血液流變學(xué)改變、凝血機(jī)制改變、纖溶系統(tǒng)等密切相關(guān)。赤芍活性成分TPG、芍藥苷、五沒(méi)食子酰葡萄糖、芍藥內(nèi)酯苷、原兒茶酸、丹皮酚等可延長(zhǎng)凝血酶原時(shí)間（PT）及部分凝血活酶時(shí)間（APTT），降低纖維蛋白原（FIB）濃度，抑制血小板聚集，改善血液流變學(xué)，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮活性物質(zhì)。

3.1 抗凝

PT、APTT、凝血酶時(shí)間（TT）、FIB 臨床用于反映人體凝血功能。王琳琳等[10]研究發(fā)現(xiàn)，TPG 能延長(zhǎng)PT、APTT，并可顯著降低血小板及紅細(xì)胞聚集能力，同時(shí)可增強(qiáng)紅細(xì)胞變形能力，降低血液黏度，發(fā)揮抗凝作用。熱娜.卡斯木等[13]研究發(fā)現(xiàn)，赤芍具有明顯的抗血小板聚集能力，其中以乙酸乙酯組分活性最為顯著。徐先祥等[14]將TPG 分別按18.8、37.5、75 mg/kg劑量給予小鼠尾靜脈注射，發(fā)現(xiàn)TPG 明顯延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間，延長(zhǎng)動(dòng)脈血栓形成，縮短尾血栓長(zhǎng)度比值。伍章保等[15]采用凝固法研究TPG 抗凝血作用的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)TPG 能延長(zhǎng)凝血時(shí)間、PT 和TT，顯著降低大鼠外源性凝血因子Ⅱ、Ⅴ和內(nèi)源性凝血因子Ⅸ的活性，同時(shí)能降低抗凝血酶Ⅲ活性。孫大軍等[16]采用體外血栓法及建立血瘀模型方法研究發(fā)現(xiàn)，TPG 能縮短體外血栓長(zhǎng)度、降低體外血栓的濕重和干重，降低血小板聚集率、延長(zhǎng)凝血時(shí)間。

可見(jiàn)，赤芍具有抗凝作用，赤芍不僅可延長(zhǎng)APTT、TT、PT，而且能降低紅細(xì)胞及血小板聚集能力，增強(qiáng)紅細(xì)胞變形，同時(shí)降低部分外源性及內(nèi)源性凝血因子的活性，從而發(fā)揮散瘀功效。

3.2 調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮活性物質(zhì)

血管內(nèi)皮細(xì)胞（VECs）是血液與血管壁之間的分界細(xì)胞，具有物質(zhì)交換、分泌和屏障的功能，在抗炎、抗血栓、調(diào)節(jié)血管張力等方面具有重要的生物學(xué)意義[17]。內(nèi)皮功能障礙在血栓形成過(guò)程中發(fā)揮著舉足輕重的作用，血瘀證與VECs 分泌的血管活血因子相關(guān)?！堆鲎C中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)》[18]將一氧化氮（NO）和內(nèi)皮素（ET）-1 水平作為血瘀證的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。ET 和NO 是一對(duì)相互拮抗的生物活性因子，ET-1 具有強(qiáng)烈的收縮血管作用，而NO 具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、改變細(xì)胞黏附性作用[19]。內(nèi)源性NO 是內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管舒張因子。NO 在維持血管暢通方面發(fā)揮著重要的作用，內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）所產(chǎn)生的NO 可控制血管張力，且能與內(nèi)皮前列腺素結(jié)合，抑制血小板與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用[20]。蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（PDI）在血栓形成中起重要作用，內(nèi)皮細(xì)胞表面硫醇異構(gòu)酶活性和PDI 依賴(lài)性凝血酶的生成受NO 控制，Bekendam 等[21]研究發(fā)現(xiàn)，NO 對(duì)PDI 活性的抑制可抗血栓形成。另外，NO可從多方面抑制血小板活性，NO 與可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶（cGMP）的血紅素部分結(jié)合上調(diào)其活性，導(dǎo)致血小板cGMP 胞漿水平升高，cGMP 激活蛋白激酶G，蛋白激酶G 磷酸化多種底物，抑制血小板反應(yīng)。NO還通過(guò)cGMP 非依賴(lài)性途徑阻斷血小板反應(yīng)性，從而降低血小板聚集率。

eNOS 的激活促進(jìn)NO 的持續(xù)釋放。Jin 等[22]研究發(fā)現(xiàn)，赤芍乙醇提取物可激活K（Ca）和K（ATP）通道并抑制 L 型 Ca2+通道，通過(guò)內(nèi)皮依賴(lài)性和Akt/SOCE-eNOS-cGMP 介導(dǎo)的通路松弛血管平滑肌。Xie 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，赤芍提取物中芍藥苷、五沒(méi)食子酰葡萄糖、芍藥內(nèi)酯苷、原兒茶酸對(duì)血管內(nèi)皮具有保護(hù)作用，可通過(guò)下調(diào)ET、上調(diào)eNOS 調(diào)節(jié)血管平滑肌張力。樂(lè)娜等[23]研究發(fā)現(xiàn)，赤芍有效成分芍藥苷可能通過(guò)調(diào)節(jié)ET-1、NO 的釋放保護(hù)血管內(nèi)皮功能，從而改善血瘀證狀態(tài)。史海霞等[24]研究發(fā)現(xiàn)，赤芍95%乙醇提取物可能通過(guò)激活A(yù)kt-eNOS-NO 信號(hào)通路而增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞NO 的合成和分泌，從而發(fā)揮其內(nèi)皮依賴(lài)性舒張血管的作用。賈敏等[25]發(fā)現(xiàn)，10-4～10-3g/L TPG 對(duì)用K+、苯腎上腺素及5-羥色胺預(yù)收縮的血管均有顯著舒張作用，并且其舒血管作用具有部分內(nèi)皮依賴(lài)性。

赤芍提取物通過(guò)調(diào)節(jié)eNOS 的活性，進(jìn)而調(diào)控VECs 分泌的血管舒張因子NO，而NO 不僅可維持血管通暢，保護(hù)血管內(nèi)皮，調(diào)節(jié)血管平滑肌張力，且可通過(guò)抑制PDI 活性抗血栓形成，并且NO 可抑制血小板活性、降低血小板聚集，從而發(fā)揮散瘀功效。

3.3 對(duì)血液流變學(xué)的影響

血液流變學(xué)與血流量、血壓及血管阻力有關(guān)。血液黏度常用檢測(cè)指標(biāo)包括全血黏度（WBV）、血漿黏度（PV）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）、紅細(xì)胞壓積（PCV）等。紅細(xì)胞、血小板、血漿會(huì)對(duì)WBV 產(chǎn)生影響。Xie等[12]研究發(fā)現(xiàn)，赤芍中乙醇提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、芍藥苷、五沒(méi)食子酰葡萄糖、芍藥內(nèi)酯苷、原兒茶酸均可顯著降低WBV、PV、ESR、PCV。邱燦華等[11]研究發(fā)現(xiàn)，TPG 能明顯降低全血高切、中切、低切黏度。樂(lè)娜等[23]研究發(fā)現(xiàn)，赤芍能降低血瘀證大鼠WBV、紅細(xì)胞最大凝集指數(shù)，升高紅細(xì)胞最大變形指數(shù)，從而降低血液凝固性及黏滯度，促進(jìn)血液流動(dòng)，減少血栓發(fā)生。

4 小結(jié)與展望

血栓性疾病目前臨床治療雖有多種西藥可用，但部分患者會(huì)出現(xiàn)耐藥性，或出現(xiàn)出血等嚴(yán)重并發(fā)癥。赤芍為傳統(tǒng)的活血化瘀藥之一，《注解傷寒論》提出“芍藥，白補(bǔ)而赤瀉，白收而赤散也”。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，赤芍中多種有效成分被發(fā)現(xiàn)并分離。赤芍抗血栓物質(zhì)基礎(chǔ)為其有效成分TPG、芍藥苷、五沒(méi)食子酰葡萄糖、芍藥內(nèi)酯苷、原兒茶酸、丹皮酚等。赤芍有效成分可通過(guò)延長(zhǎng)APTT、TT、PT，降低FIB 濃度，抑制血小板聚集，改善血液流變學(xué)，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮活性物質(zhì)等途徑抗血栓形成。

中藥具有多成分、多靶點(diǎn)、整合調(diào)節(jié)的特色與優(yōu)勢(shì)，但是中藥物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制不明確，需要結(jié)合現(xiàn)代科技手段，開(kāi)展中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制的研究，以期快速識(shí)別中藥有效成分、發(fā)現(xiàn)作用機(jī)理、揭示多個(gè)成分的協(xié)同作用，這不僅能為闡明中藥作用過(guò)程、配伍機(jī)制奠定基礎(chǔ)，并且有助于建立中藥藥性及功效與現(xiàn)代藥理作用及臨床療效之間的橋梁，從而將中藥創(chuàng)新過(guò)程與生物學(xué)、化學(xué)、信息學(xué)等多學(xué)科的成熟技術(shù)相融合，進(jìn)而提升中藥創(chuàng)新能力[26]，同時(shí)有助于疾病治療中新靶點(diǎn)、新機(jī)制和新物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)及中藥新藥的二次研發(fā)，對(duì)闡釋中藥傳統(tǒng)功效的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵具有深遠(yuǎn)意義。