儲(chǔ)存血細(xì)胞中非編碼RNA研究進(jìn)展*

苑召虎 魏亞明

輸血醫(yī)學(xué)已經(jīng)成為臨床醫(yī)學(xué)中不可或缺的重要組成部分，保障患者安全、有效、合理和經(jīng)濟(jì)的用血是臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血治療技術(shù)水平的重要體現(xiàn)。成分輸血是臨床輸血治療主要標(biāo)志[1]。臨床上，紅細(xì)胞輸注的主要目的是為了提高血液中的氧合血紅蛋白含量，血紅蛋白與從肺部吸入的氧氣結(jié)合，運(yùn)送到身體各個(gè)器官組織，從而改善機(jī)體缺氧狀態(tài)。血小板成分輸注在臨床治療上被廣泛應(yīng)用于治療血小板減少或血小板功能障礙相關(guān)疾病，血小板通過(guò)內(nèi)皮下組織的膠原纖維結(jié)合蛋白以及凝血酶等激活后，發(fā)生變形、釋放和聚集等一系列反應(yīng)，起到初期止血的作用。

血液離開機(jī)體在體外儲(chǔ)存過(guò)程中會(huì)發(fā)生一系列生理生化、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能變化，稱為“儲(chǔ)存損傷”。研究顯示，儲(chǔ)存紅細(xì)胞的生化、形態(tài)學(xué)和組學(xué)特征在大約14天后發(fā)生了明顯的變化，血液流變學(xué)指標(biāo)發(fā)生明顯改變，血液粘度和聚集性增高，紅細(xì)胞變形能力下降，通過(guò)毛細(xì)血管時(shí)容易遭到破壞從而加重局部缺血。紅細(xì)胞的體外儲(chǔ)存損傷除引起紅細(xì)胞直接破壞外，還可促進(jìn)紅細(xì)胞自殺性程序性死亡，即衰亡（eryptosis）[2]。研究顯示儲(chǔ)存損傷可促進(jìn)受者血液中1/4以上儲(chǔ)存紅細(xì)胞在輸注24 h后迅速清除[3]。我們及他人的研究顯示，一氧化氮（NO）可有效改善紅細(xì)胞變形能力，血液粘度下降，使血流阻力減少，血流流速增加，改善了血液流變特性，增加了血液攜氧和運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力[4，5]。與紅細(xì)胞相似，血小板在保存期間也會(huì)發(fā)生形狀和生物化學(xué)變化，這些變化包括血小板圓盤狀消失，形態(tài)由雙面凸形向球形轉(zhuǎn)變、樹枝突起及偽足生成，導(dǎo)致血小板膜糖蛋白的改變。血小板保存過(guò)程中的代謝導(dǎo)致耗氧增加，使乳酸大量堆積、酸度升高、pH下降，進(jìn)而導(dǎo)致血小板活化、血小板顆粒分泌并釋放出內(nèi)容物，其“活化”的形態(tài)學(xué)變化還常伴有凋亡，進(jìn)而導(dǎo)致其體外功能的變化，如粘附和聚集等，反映了血小板在儲(chǔ)存期間完整性和功能的喪失[6]。

紅細(xì)胞和血小板都屬于無(wú)核細(xì)胞，但研究顯示在紅細(xì)胞及血小板胞漿中仍存有大量的非編碼RNA（Non-coding RNA，ncRNA），而且這些非編碼RNA對(duì)紅細(xì)胞和血小板的發(fā)育至關(guān)重要，這些非編碼RNA根據(jù)堿基長(zhǎng)度可以分為短鏈RNA［如微小RNA（MicroRNA，miRNA）、內(nèi)源性小干擾RNA（Small interfering RNA，siRNA）、與Pi蛋白相互作用 RNA（Piwi-interactiing RNA，Pi RNA）］、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long noncoding RNAs，lncRNA）以及與以上線性結(jié)構(gòu)不同的環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）等[7-10]。非編碼RNA是參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的小分子RNA，其本身并不編碼任何蛋白質(zhì)，只能通過(guò)逆向調(diào)節(jié)靶基因（mRNA）來(lái)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的合成與分解[11]。不同造血細(xì)胞中ncRNA存在不同的表達(dá)類型，以此可以區(qū)分不同的造血細(xì)胞系，且不同的ncRNA在造血細(xì)胞系的不同階段發(fā)揮的作用不同[12]。近年來(lái)，研究顯示在紅細(xì)胞或血小板在體外儲(chǔ)存過(guò)程中，ncRNA呈現(xiàn)不同表達(dá)狀態(tài)，有可能成為“儲(chǔ)存損傷”的標(biāo)志物[8-10]。雖然紅細(xì)胞、血小板仍存在體外低溫存儲(chǔ)的情況，如-80℃保存的冰凍血小板及冰凍甘油紅細(xì)胞等，但目前關(guān)于儲(chǔ)存血細(xì)胞中非編碼RNA的研究都集中在常規(guī)保存條件下（紅細(xì)胞在4±2℃保存，血小板在22±2℃保存）。

1 miRNA miRNA是一種內(nèi)源性、廣泛存在于真核生物中的單鏈小RNA。miRNA基因以單拷貝、多拷貝及基因簇的形式離散地分布在基因組中，其中70%～90%位于間隔區(qū)，其余位于內(nèi)含子或外顯子上。大多數(shù)miRNA基因在RNA聚合酶Ⅱ作用下轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生幾百至幾千個(gè)核苷酸的初級(jí)miRNA產(chǎn)物（pri-miRNA），在細(xì)胞核內(nèi)被RNaseⅢ內(nèi)切酶家族的Drosha酶切割成70個(gè)核糖核苷酸左右的發(fā)夾狀前體miRNA（pre-miRNA），pre-miRNA在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的作用下轉(zhuǎn)運(yùn)出核，然后經(jīng)Dicer酶切割成長(zhǎng)度約19～25個(gè)核苷酸的成熟miRNA[13,14]。miRNA在多種生命過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，其在特定的細(xì)胞或組織、時(shí)間、發(fā)育階段才會(huì)表達(dá)，提示它對(duì)組織的發(fā)育有著潛在的重要作用[7-9]。

1.1 miRNA在體外儲(chǔ)存紅細(xì)胞中的表達(dá)及其在儲(chǔ)存損傷的作用：miRNA在造血過(guò)程中的重要作用早期已有報(bào)道，近期人們發(fā)現(xiàn)成熟紅細(xì)胞內(nèi)含有大量miRNA。2010年，MEGANATHAN KANNAN等首次提供了存儲(chǔ)紅細(xì)胞的miRNA差異圖譜，為識(shí)別新的儲(chǔ)存損傷的RBC生物標(biāo)志物開辟了新的途徑，提出了儲(chǔ)存紅細(xì)胞可能存在靶基因-miRNA調(diào)控途徑[1]。2015年，CHINTAMANI ATREYA通過(guò)在人有核紅細(xì)胞系過(guò)表達(dá)hsa-miR-196a，證實(shí)了hsamiR-196a對(duì)紅細(xì)胞衰亡和ATP消耗的保護(hù)作用[2]。隨后探索了AGO2-miRNA復(fù)合體在成熟紅細(xì)胞中的作用。我們通過(guò)基因芯片研究顯示，當(dāng)儲(chǔ)存20天紅細(xì)胞與新鮮組比較時(shí)，有109個(gè)miRNA在儲(chǔ)存過(guò)程中表達(dá)上調(diào)和102個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證的13個(gè)miRNAs中，miR-31-5p、miR-196a-5p、miR-203a、miR-654-3p，miR-3591-5p和miR-769-3p表達(dá)上升，let-7a-3p、miR-96-5p、miR-150-5p和miR-197-3p表達(dá)下降，具有明顯變化趨勢(shì)的miRNAs可以作為“儲(chǔ)存損傷”的生物學(xué)標(biāo)志物[15]。其中，miR-196a-5p、let-7a-3p、miR-96-5p、miR-150-5p、miR-145-3p和miR-197-3p被證實(shí)與RBC和血小板儲(chǔ)存過(guò)程中的凋亡信號(hào)通路有關(guān)，其中miR-196a-5p、miR-96-5p、miR-150-5p和miR-197-3p在紅細(xì)胞儲(chǔ)存0～20天時(shí)表現(xiàn)為上升趨勢(shì)，let-7a-3p和miR-145-3p在紅細(xì)胞整個(gè)儲(chǔ)存過(guò)程中均保持較低水平，let-7b可作為分期特異性紅細(xì)胞轉(zhuǎn)錄程序的關(guān)鍵調(diào)控因子，而miR-150-5p的下調(diào)是紅細(xì)胞生成所必需的；miR-96-5p在網(wǎng)織紅細(xì)胞中亦高表達(dá)，與Hb形成有關(guān)[16，17]。通過(guò)KEGG預(yù)測(cè)分析顯示，miR-203a、miR-654-3p和miR-31-5p表達(dá)上調(diào)調(diào)節(jié)CASP10表達(dá)下調(diào)；miR-203a和miR-196a-5p表達(dá)上調(diào)調(diào)節(jié)CASP8表達(dá)下調(diào)；miR-31-5p表達(dá)上調(diào)調(diào)節(jié)MAP3K14表達(dá)下調(diào)；miR-203a表達(dá)上調(diào)調(diào)節(jié)IL3表達(dá)下調(diào)；miR-203a、miR-654-3p、miR-3591-5p和miR-31-5p表達(dá)上調(diào)調(diào)節(jié)PPP3CA表達(dá)下調(diào)；miR-203a、miR-654-3p和miR-3591-5p表達(dá)上調(diào)調(diào)節(jié)ATM表達(dá)下調(diào)，從而抑制凋亡，延長(zhǎng)紅細(xì)胞儲(chǔ)存時(shí)間[5，17]。SARACHANA等學(xué)者分析發(fā)現(xiàn)了四種與紅細(xì)胞儲(chǔ)存損傷相關(guān)的mricoRNA，通過(guò)RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)這4個(gè)miRNA在第14天和第28天存在差異表達(dá)。生物信息學(xué)分析確定了這些miRNA的潛在靶點(diǎn)和生物學(xué)功能。在人紅細(xì)胞細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)hsa-miR-196a證實(shí)了它對(duì)細(xì)胞死亡和ATP丟失的保護(hù)作用[8]。

1.2 miRNA在體外儲(chǔ)存血小板中的表達(dá)及其在儲(chǔ)存損傷的作用：與紅細(xì)胞相似，血小板中亦含有大量的miRNA，這些miRNA表達(dá)量隨著血小板在體外保存時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)不同變化趨勢(shì)。在體外儲(chǔ)存血小板中miRNA表達(dá)量降低為主要趨勢(shì)，升高的miRNA數(shù)量遠(yuǎn)少于降低的miRNA，這些變化的miRNA可通過(guò)調(diào)控相應(yīng)的蛋白表達(dá)來(lái)影響血小板的聚集功能。如在血小板活化聚集通路中miR-223、miR-21、let-7b可通過(guò)相關(guān)的mRNA來(lái)調(diào)節(jié)血小板中蛋白表達(dá)，進(jìn)而影響血小板的聚集功能。血小板miRNA的靶基因還與血小板活化、脫粒、血小板源生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路及干細(xì)胞分化等相關(guān)。其中miR-223顯示了對(duì)P2Y12的調(diào)控、對(duì)血小板活化通路的影響，且具有易檢測(cè)的特征，具備成為首個(gè)血小板儲(chǔ)存損傷的生物學(xué)標(biāo)記的潛質(zhì)[18]。在人類中，估計(jì)約60%的蛋白編碼基因受miRNAs的調(diào)控，并被認(rèn)為參與了大部分的生理和病理過(guò)程。在血小板儲(chǔ)存條件下，miRNAs繼續(xù)發(fā)揮活性，血小板貯藏過(guò)程中與血小板表型相關(guān)的miRNA-mRNA表達(dá)可能發(fā)生改變。多種靶向預(yù)測(cè)顯示一個(gè)miRNAs可以靶向多個(gè)mRNA，大多數(shù)mRNA被多個(gè)miRNAs靶向，揭示了miRNA譜和血小板反應(yīng)性之間的聯(lián)系[19]。

KANNAN等學(xué)者通過(guò)膜陣列miRNA分析明確了血小板儲(chǔ)存凋亡相關(guān)的52個(gè)miRNA，研究顯示miR-150、miR-151、miR-152、miR-184、miR-188、miR-196a、miR-197和miR-202在血小板的體外儲(chǔ)存期間始終保持較高水平；Let-7b和miR-16在PLT存儲(chǔ)過(guò)程中表現(xiàn)出顯著增加的趨勢(shì)，而miR-7和miR-145表現(xiàn)出顯著下降的趨勢(shì)，并進(jìn)一步通過(guò)生物學(xué)信息預(yù)測(cè)出這四個(gè)miRNA潛在的靶mRNA，為血小板存儲(chǔ)相關(guān)病變的分子機(jī)制提供新的見解[7]。通過(guò)KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)及相關(guān)文獻(xiàn)推測(cè)miRNA與血小板活化聚集過(guò)程存在有調(diào)控關(guān)系，如let-7b影響GPⅢa從而影響血小板聚集過(guò)程，miR-223參與對(duì)P2Y12 mRNA表達(dá)的調(diào)控，從而影響P2Y12蛋白的合成，miR-21也可能作用于P2Y12[18]。此外，miR-326可下調(diào)抗凋亡基因Bcl-xL的表達(dá)外，進(jìn)而引起血小板凋亡[20]。與上述結(jié)果一致的是，在血小板儲(chǔ)存過(guò)程中miR-16靶基因的增加參與了凋亡。DAHIYA等還發(fā)現(xiàn)在儲(chǔ)存的血小板中，miR-570可與編碼mRNA的線粒體ATP酶亞基g（ATP5L）相互作用，因此，miR-570也可以作為存儲(chǔ)血小板質(zhì)量和活性的生物標(biāo)志物之一[21]。通過(guò)ApoE-/-小鼠模型研究顯示來(lái)源于小鼠血小板的miR-25-3p可通過(guò)NF-κB以減輕脂質(zhì)氧化[22]。miR-96可以作用于VAMP8相關(guān)的mRNA，VAMP8可通過(guò)影響ADP在血小板活化聚集通路中起作用，miRNA-96含量與VAMP8蛋白及其mRNA的含量呈反比，并且miRNA-96具有抑制VAMP8蛋白表達(dá)的作用，從而可降低血小板的活化能力[23]

2 長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）lncRNA是一種長(zhǎng)度大于200bp，不能編碼蛋白質(zhì)，具有重要調(diào)控功能的轉(zhuǎn)錄本。大量研究證實(shí)lncRNA可在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄、翻譯和蛋白修飾等四個(gè)水平調(diào)控基因的表達(dá)，在細(xì)胞分化、增殖、凋亡等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。lncRNAs在不同的組織，發(fā)育階段和生理情況下的表達(dá)也不同；有些是生命所必需的，有些只是特定的發(fā)育階段或生理功能所必需的。lncRNA與DNA、RNA及蛋白質(zhì)通過(guò)多種方式相互作用，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)或者是形成結(jié)構(gòu)域來(lái)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

2.1 lncRNA在體外儲(chǔ)存紅細(xì)胞中的表達(dá)及其在儲(chǔ)存損傷的作用：截至投稿，關(guān)于lncRNA在RBC中功能的研究，更多的集中在紅系祖細(xì)胞的分化、白細(xì)胞激活和DNA修復(fù)上，與紅細(xì)胞儲(chǔ)存損傷相關(guān)研究尚處于早期階段；早期丁楠等學(xué)者通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)獲得轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，從臍帶血造血干細(xì)胞到無(wú)核成熟的紅細(xì)胞共六個(gè)階段（即HSC、P2、P3、P4、P5和無(wú)核RBC六個(gè)階段）中研究發(fā)現(xiàn)了1 034個(gè)已知lncRNAs，明確了35 090對(duì)lncRNAs-基因潛在的互作關(guān)系，綜合分析表明lncRNA可參與調(diào)控紅細(xì)胞的成熟，特別是與血紅蛋白代謝、對(duì)氧反應(yīng)性和DNA損傷的有關(guān)[24]。JUAN等學(xué)者通過(guò)全基因組分析發(fā)現(xiàn)了多種在紅細(xì)胞生成過(guò)程中動(dòng)態(tài)表達(dá)及顯示表觀遺傳調(diào)控的lncRNAs，這些lncRNAs可被關(guān)鍵的紅細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子GATA1、TAL1或KLF1靶向控制，這些lncRNA的耗盡可嚴(yán)重?fù)p害紅細(xì)胞的成熟，抑制紅細(xì)胞體積的減小及去核過(guò)程[25]，如lncRNA shlnc-EC6可通過(guò)Rac1/PIP5K信號(hào)通路調(diào)節(jié)小鼠胚胎成熟紅細(xì)胞的去核[24]。

2.2 lncRNA在體外儲(chǔ)存血小板中的表達(dá)及其在儲(chǔ)存損傷的作用：早期我們通過(guò)芯片研究顯示在人血小板儲(chǔ)存過(guò)程中有大量的lncRNA表達(dá)發(fā)生改變，第5天與第2天相比，有162種lncRNA表達(dá)發(fā)生了變化，升高的有4種，降低的有158種；第8天與第2天相比，有691種lncRNA發(fā)生變化，表達(dá)升高的有20種，降低的有671種；第8天與第5天相比，有246種lncRNA發(fā)生變化，有2種表達(dá)升高，244種表達(dá)降低，分析表明部分變化的lncRNA與血小板聚集、血小板激活、內(nèi)吞等生理過(guò)程相關(guān)。KEGG功能分析顯示lnc-WBSCR16-3∶6、lnc-CHD1L-1∶10、lnc-EWSR1-2∶1及l(fā)nc-PIM2-1∶1與內(nèi)吞途徑高度相關(guān)。血小板激活也在KEGG分析統(tǒng)計(jì)中被高度富集，血小板儲(chǔ)存損傷發(fā)生時(shí)，血小板首先發(fā)生激活，釋放出一系列炎癥因子，同時(shí)伴隨著血小板凋亡的發(fā)生，其生理功能和存活率顯著下降。KEGG分析表明lnc-FAM75A7-2∶5、lnc-MARCH6-2∶1、lnc-TMEM86B-2和lnc-TOMM22-1∶1在血小板激活中具有重要的意義，為進(jìn)一步探究血小板儲(chǔ)存損傷機(jī)制提供了新的靶點(diǎn)[26]。cis調(diào)控分析得出lncRNA-mRNA可能的相互調(diào)節(jié)關(guān)系如下：lnc-USP39-1調(diào)控VAMP8的表達(dá)；lnc-TMEM86B-2調(diào)控GP6的表達(dá)；lnc-MAPK13-3調(diào)控MAPK14的表達(dá)；lnc-FOXS1-2調(diào)控BCL2L1的表達(dá)；lnc-CAPN2-1調(diào)控CAPN2的表達(dá)等等，這些調(diào)控關(guān)系與血小板的激活或凋亡有著密不可分的聯(lián)系[27-29]。研究顯示血小板lncRNA表達(dá)量隨著血小板儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而呈不同的變化趨勢(shì)，下調(diào)的lncRNA數(shù)量較多，且下調(diào)幅度更明顯，lncRNA的表達(dá)隨著血小板生理狀態(tài)的變化而改變，部分變化的lncRNA與血小板生理功能相關(guān)，并且在血小板儲(chǔ)存損傷中發(fā)揮作用[26]。

3 環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）circRNA是一類新的共價(jià)閉合單鏈RNA，通過(guò)特殊的選擇性剪切，由外顯子或內(nèi)含子衍生而來(lái)。circRNA的主要生物學(xué)功能有miRNA sponge、調(diào)控蛋白結(jié)合、調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄、編碼功能。由于沒(méi)有游離的ploy(A)末端，環(huán)狀RNA對(duì)RNA核酸外切酶和脫支酶存在一定的抗性，無(wú)論在細(xì)胞核中還是在細(xì)胞質(zhì)中都可穩(wěn)定存在[3]。

3.1 circRNA在體外儲(chǔ)存紅細(xì)胞中的表達(dá)及其在儲(chǔ)存損傷的作用：研究顯示有核細(xì)胞的circRNA豐度約占細(xì)胞總mRNA的2%～4%，在無(wú)核的血小板和紅細(xì)胞這一比例更高，已經(jīng)證實(shí)多個(gè)circRNA比人類紅細(xì)胞中的相對(duì)應(yīng)線性mRNA高出50到1 000倍。在造血系統(tǒng)中，通過(guò)RNA-seq分析鑒定出造血細(xì)胞表達(dá)的55 187個(gè)環(huán)狀RNA，數(shù)據(jù)顯示顯著的細(xì)胞類型特異性和非編碼轉(zhuǎn)錄本在造血過(guò)程中的潛在調(diào)控作用。在所有造血細(xì)胞中，血小板和紅細(xì)胞含有的circRNA數(shù)量最多，并且circRNA的類型和數(shù)量在成熟過(guò)程中發(fā)生變化[4，5]。紅細(xì)胞及血小板沒(méi)有細(xì)胞核，它們需要使用RNA來(lái)維持其功能，對(duì)環(huán)境因素作出反應(yīng)，或通過(guò)微囊泡向其他細(xì)胞傳遞信號(hào)[6，7]。紅細(xì)胞中circRNA豐度高，穩(wěn)定性好，可作為紅細(xì)胞儲(chǔ)存損傷的標(biāo)志物，此外，circRNA在紅細(xì)胞代謝和儲(chǔ)存病變中也起著重要調(diào)控作用。

早期我們通過(guò)高通量測(cè)序分析在儲(chǔ)存紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了2 586個(gè)已知的和6 216個(gè)新發(fā)現(xiàn)的circRNA，儲(chǔ)存紅細(xì)胞中存在100多種表達(dá)差異的circRNA，其中下調(diào)的circRNA數(shù)量較多，且下調(diào)幅度比升高幅度更大。mireap、miranda、targetscan和mirTarBase預(yù)測(cè)顯示有多個(gè)circRNA可靶向作用于miRNA和mRNA，如通過(guò)CirRNA-miRNA-mRNA分析得出：hsa_circ_00007470的兩個(gè)靶miRNA，即hsamiR-155-5p與hsa-miR-6827-5p的靶蛋白是MRP4。hsa_circ_00007470和其靶miRNA都起著調(diào)控MRP4的作用。hsa_circ_00007470或許能通過(guò)解除miRNA對(duì)MRP4的抑制作用通過(guò)ATP代謝改善紅細(xì)胞變形能力。生物信息學(xué)分析顯示這些變化的circRNA主要與泛素介導(dǎo)的蛋白水解、RNA降解、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、cAMP信號(hào)通路、紅細(xì)胞粘著連接、TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、AMPK信號(hào)通路及細(xì)胞周期中凋亡通路等生理過(guò)程相關(guān)。我們研究顯示circRNA.0007127可能通過(guò)吸附miR-513a-5p，促進(jìn)下游靶基因CASP8表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控紅細(xì)胞的細(xì)胞凋亡，這一過(guò)程類似于K-562氧化應(yīng)激反應(yīng)中的調(diào)控過(guò)程。在整個(gè)紅細(xì)胞儲(chǔ)存期，泛素介導(dǎo)的蛋白水解通路一直為變化最為顯著，其余通路的名稱及排名隨儲(chǔ)存時(shí)間發(fā)生變化，說(shuō)明circRNA的差異表達(dá)與紅細(xì)胞生理狀態(tài)改變有一定敏感性與相關(guān)性[30]。此外，JENNIFER F.DOSS等人分析發(fā)現(xiàn)miR-4732-3p可靶向作用于SMAD2和SMAD4，這兩種關(guān)鍵成分涉及TGF-β途徑與紅細(xì)胞生成有關(guān)[31]。

3.2 circRNA在體外儲(chǔ)存血小板中的表達(dá)及其在儲(chǔ)存損傷的作用：目前，關(guān)于circRNA在紅細(xì)胞儲(chǔ)存損傷中的研究尚處于早期階段。MASS等人研究顯示在儲(chǔ)存血小板中有3 324個(gè)circRNA表達(dá)。血小板雖然缺乏細(xì)胞核，但與其他組織相比，血小板中含有更多circRNA的表達(dá)。如在ACVR2A和SMARCA5中circRNA的表達(dá)顯著高于mRNA。circRNA在磷酸二酯酶PDE3A、PDE4D和PDE5A中表達(dá)也得到了驗(yàn)證，PDEs可水解cAMP和cGMP，控制血管舒張、心臟收縮和抑制血小板聚集[32]。此外，血小板還可將胞漿中circRNA血小板囊泡（微囊泡和外泌體）釋放到體外發(fā)揮作用[33]。

4 其他非編碼RNA 紅細(xì)胞和血小板中除含有大量的miRNA、lncRNA及circRNA外，亦含有部分siRNA及PiRNA。SiRNA是一類雙鏈RNA分子，長(zhǎng)度為20～5個(gè)堿基對(duì)，它可干擾表達(dá)與其互補(bǔ)的核苷酸序列的mRNA，從而防止翻譯，目前體外過(guò)表達(dá)的siRNA常用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，但是目前仍未見有內(nèi)源性siRNA在體外儲(chǔ)存紅細(xì)胞及血小板中相關(guān)作用的報(bào)道[7-10]。PiRNA是一類含有24～31個(gè)核苷酸殘基的非編碼RNA，可通過(guò)結(jié)合argonaute蛋白的PIWI亞家族發(fā)揮作用，具有維持基因組穩(wěn)定以及調(diào)節(jié)表觀遺傳學(xué)、生殖干細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育等功能，但目前尚未見有在體外儲(chǔ)存紅細(xì)胞及血小板中作用的相關(guān)報(bào)道[7-10]。

5 展望 通過(guò)對(duì)ncRNA功能的闡述，使我們明確非編碼RNA調(diào)控血細(xì)胞存儲(chǔ)損傷中的重要作用，同時(shí)，也揭示了非編碼RNAs很可能成為血細(xì)胞儲(chǔ)存期間的重要調(diào)節(jié)因子。對(duì)ncRNAs的功能以及它們之間、它們和mRNA及DNA之間的相互作用的研究，有利于進(jìn)一步明確ncRNA在血細(xì)胞存儲(chǔ)過(guò)程中調(diào)控機(jī)制，提高血細(xì)胞體外儲(chǔ)存的質(zhì)量，延長(zhǎng)體外儲(chǔ)存時(shí)間，進(jìn)而改善患者輸血療效。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突