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    補陽還五湯對高脂血癥大鼠血液流變學和血小板聚集作用的影響

    2021-11-28 02:47:30卞敬琦張玉昆馮月男牛雯穎
    中國醫(yī)藥導報 2021年28期
    關鍵詞:血漿模型

    卞敬琦 張玉昆 馮月男 牛雯穎

    黑龍江中醫(yī)藥大學實驗實訓中心,黑龍江哈爾濱 150040

    近年來,心腦血管疾病逐年攀升,嚴重威脅人類健康。高脂血癥是心腦血管發(fā)病的主要誘因,主要表現為血中總膽固醇和/或甘油三酯過高。研究顯示,高脂血癥的發(fā)病與炎癥[1]、血管內皮功能障礙[2-3]和血小板活化所引起的血栓前狀態(tài)或高凝狀態(tài)的增強密切相關[4-5]。補陽還五湯具有補氣、活血、通絡之功效,主治中風之氣虛血瘀證。本課題組成功復制了高脂血癥大鼠,以補陽還五湯為探針,從血液流變學和血小板活化中的關鍵環(huán)節(jié)血小板的聚集作用兩方面進行研究,以期為高脂血癥等相關疾病提供新的研究思路與實驗依據[6-7]。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物

    50 只2.5 月齡雄性清潔級SD 大鼠,體重240 g左右,由哈爾濱醫(yī)科大學實驗動物中心提供[合格證號SCXK(黑)2016-001]。

    1.2 藥物、主要試劑與儀器

    補陽還五湯(黃芪120 g、歸尾6 g、赤芍5 g、地龍3 g、川芎3 g、桃仁3 g、紅花3 g);辛伐他汀片(哈藥集團三精明水藥業(yè)有限公司,批號:201706001,規(guī)格:10 mg);總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯、血栓素B2、血栓素A2、6-酮-前列腺素F1α、前列環(huán)素、環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷試劑盒(南京建成生物工程 研 究 所,批號:182022、180671、187831、20181126、20181126、20181126、20181126、20181126、20181126)。

    IMark 酶標儀(美國伯樂公司);LBY-N7500B 全自動血液流變儀(北京普利生儀器有限公司);甘油三酯L-16G 型高速臺式離心機(蘇州捷美電子有限公司);DZKW-D-1 水浴鍋(上海醫(yī)用分析儀器廠);HYQ-2121A 渦旋儀(北京市永光明醫(yī)療儀器廠);DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責任公司)。

    1.3 研究方法

    所有大鼠適應性喂養(yǎng)7 d 后,隨機選取10 只作為空白組喂食普通飼料,其余動物喂食高脂飼料,正常飲食、飲水。第4 周檢測動物血漿中甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量,三者均顯著升高視為造模成功[8-9]。將40 只成模大鼠按隨機數字表法分為模型組,補陽還五湯高、低劑量組,辛伐他汀對照組,每組10 只。補陽還五湯高、低劑量組給藥量分別為14.0 g/kg、3.5 g/kg;辛伐他汀組給藥量為0.004 g/kg??瞻捉M繼續(xù)伺以普通飼料,其他組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)。各給藥組灌服相應藥物,空白組和模型組灌服等體積蒸餾水,每日1 次,連續(xù)4 周。

    1.4 檢測指標

    1.4.1 取血 取血前禁食12 h 但不禁水,于末次給藥40 min后,腹腔注射5%的水合氯醛5 ml/kg 麻醉,腹主動脈采血,枸櫞酸鈉抗凝,測全血黏度,3000 r/min 離心10 min(離心半徑127 mm)得血漿,測血漿黏度、血脂、血小板聚集指標。

    1.4.2 血脂測定 按試劑盒說明書,利用全自動生化分析儀檢測血漿中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量。

    1.4.3 全血黏度和血漿黏度的測定方法 取抗凝血1 ml,用全自動血液流變儀進行全血黏度測定。取抗凝血1 ml,3000 r/min 離心10 min(離心半徑127 mm)取血漿,用全自動血液流變儀測定血漿黏度。

    1.4.4 血小板聚集指標檢測 按試劑盒說明書用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)分別檢測環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷、血栓素A2、血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α、前列環(huán)素各孔的光密度(optical density,OD)值,根據濃度和OD 值算出相應標準曲線的回歸方程,擬合模型選用logistic 曲線(四參數)。

    1.5 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件對所得數據進行分析,計量資料采用均數±標準差()表示,采用單因素方差分析,組間比較采用LSD-t 檢驗。以P <0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠血脂指標的影響

    與空白組比較,模型組血漿總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇的含量均顯著升高,差異有高度統(tǒng)計學意義(P <0.01);與模型組比較,補陽還五湯高、低劑量組血漿總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇的含量顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05 或P<0.01)。見表1。

    表1 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠血脂指標的影響()

    表1 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠血脂指標的影響()

    注:與空白組比較,aaP <0.01;與模型組比較,bP <0.05,bbP <0.01?!?”表示無數據

    2.2 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠全血黏度及血漿黏度的影響

    與空白組比較,模型組全血黏度、血漿黏度均顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05 或P <0.01);與模型組比較,補陽還五湯高劑量組在低、中切變率下全血黏度和血漿黏度均顯著降低,補陽還五湯低劑量組在各切變率下全血黏度和血漿黏度均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05 或P <0.01)。見表2。

    表2 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠全血黏度及血漿黏度的影響()

    表2 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠全血黏度及血漿黏度的影響()

    注:與空白組比較,aP <0.05,aaP <0.01;與模型組比較,bP <0.05,bbP <0.01。“-”表示無數據

    2.3 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠血小板聚集作用指標的影響

    與空白組比較,模型組中6-酮-前列腺素F1α、前列環(huán)素含量顯著下降,血栓素B2、血栓素A2含量顯著上升,差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05);與模型組比較,補陽還五湯高、低劑量組血栓素B2、血栓素A2含量均顯著下降,前列環(huán)素含量均顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05)。見表3。

    表3 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2 的影響()

    表3 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2 的影響()

    注:與空白組比較,aP <0.05,aaP <0.01;與模型組比較,bP <0.05,bbP <0.01?!?”表示無數據

    與空白組比較,模型組中環(huán)磷酸鳥苷含量顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05);與模型組比較,補陽化五湯高劑量組可顯著降低環(huán)磷酸鳥苷含量,補陽化五湯低劑量組可顯著降低環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷含量,差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05)。見表4。

    表4 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷的影響()

    表4 補陽還五湯對高脂血癥模型大鼠環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷的影響()

    注:與空白組比較,aP <0.05;與模型組比較,bP <0.05。“-”表示無數據

    3 討論

    研究顯示血脂代謝在冠狀動脈疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。若患者出現血脂異常,則心腦血管疾病的發(fā)生風險將相應升高[10]。本實驗結果顯示,高脂血癥模型大鼠血漿總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量顯著升高,提示本模型符合血脂對于高脂血癥診斷的客觀標準。與模型組比較,補陽還五湯可有效降低總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量,提示補陽還五湯對于高脂血癥具有顯著治療效果。

    全血黏度和血漿黏度是衡量血液黏滯程度的重要指標,在血栓性疾病的預防、診斷、治療方面起著重要作用[11-13]。本實驗中,與空白組比較,模型組全血黏度和血漿黏度顯著升高,提示高脂血癥模型大鼠存在血液流變學異常。與模型組比較,補陽還五湯低劑量組可顯著降低高脂血癥模型大鼠的全血黏度及血漿黏度。

    血小板聚集反應是血小板活化的關鍵環(huán)節(jié),也是高脂血癥及血栓形成的重要誘因之一[14]。血栓素A2是血小板釋放的活性物質,具有強烈的聚集血小板和縮血管作用[15-16]。血栓素B2與6-酮-前列腺素F1α是血栓素A2與前列環(huán)素的代謝產物[17-18]。在正常狀態(tài)下,血栓素A2-前列環(huán)素是處于平衡狀態(tài),但二者性質不穩(wěn)定。而其代謝產物血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α性質穩(wěn)定,測定后其的含量即可代表血栓素A2與前列環(huán)素的水平。血栓素B2具有強烈的縮血管、促血小板聚集及誘導血栓形成作用。檢測血栓素B2含量,可直觀反映體內瘀血情況。6-酮-前列腺素F1α具有抗血小板聚集和強烈的擴血管作用。6-酮-前列腺素F1α含量降低,提示血瘀證加重。血液中血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的失衡狀態(tài)會加速血小板黏附和聚集,形成血栓[19]。環(huán)磷酸腺苷和環(huán)磷酸鳥苷是細胞內信號傳遞的第二信使,各種誘導劑需要通過第二信使作用使血小板聚集[20-22]。血栓素A2可降低血小板中的環(huán)磷酸腺苷濃度促進血小板聚集。前列環(huán)素可增加血小板中的環(huán)磷酸腺苷濃度,并抑制血小板聚集和血管舒張。本研究發(fā)現,與空白組比較,模型組6-酮-前列腺素F1α、前列環(huán)素含量顯著下降,血栓素A2、血栓素B2含量顯著上升,血栓素A2和前列環(huán)素之間的平衡狀態(tài)被打破,血小板發(fā)生聚集。給予藥物干預后,與模型組比較,補陽還五湯高低劑量組中血栓素A2、血栓素B2含量均顯著下降,前列環(huán)素含量顯著升高。

    中醫(yī)認為高脂血癥屬本虛標實之證,本虛指肝、脾、腎三臟俱虛,標實指痰、濕、濁、瘀[23-24]。補陽化五湯中黃芪補氣固表;當歸補血活血;桃仁、紅花、赤芍活血化瘀、散瘀止痛;現代藥理學研究顯示,補陽還五湯中的當歸、桃仁、紅花能顯著延遲血栓形成[25-28],當歸、川芎能改善血小板聚集,川芎中川芎嗪可提高血小板內環(huán)磷酸腺苷水平,抑制血栓素A2合成酶活性;當歸中阿魏酸鈉也能抑制血栓素A2合成酶活性,從而達到抑制血小板聚集的作用。紅花中含有的紅花黃色素能降低血液黏度,預防血小板聚集,并且對已經聚集的血小板有顯著的解聚作用[29]。綜上,補陽還五湯降血脂的作用機制可能是通過改善血液流變學和抗血小板聚集作用共同實現的。

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