免疫分析法測(cè)定食品中四環(huán)素類藥物殘留

李依孜，韓宣怡

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)理工學(xué)院，河北滄州 061000）

隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，獸藥殘留問(wèn)題得到了越來(lái)越多的關(guān)注。其中四環(huán)素類藥物價(jià)格便宜、抗菌效果好，常用于預(yù)防或治療畜禽等的腸道感染[1]。合理的使用藥物可以使畜禽的患病概率和飼養(yǎng)成本降低。但在用藥過(guò)程中，部分養(yǎng)殖人員相關(guān)知識(shí)儲(chǔ)備不足，過(guò)量使用藥物，或未經(jīng)過(guò)一定周期使藥物完全排出，使生產(chǎn)的食品中存留藥物或者其代謝產(chǎn)物。

四環(huán)素類藥物的普遍使用給養(yǎng)殖者提供了很多的便利，但也可能會(huì)產(chǎn)生獸藥殘留問(wèn)題。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的攝入，在體內(nèi)不斷蓄積。過(guò)多的抗菌藥物作用于人體甚至有致癌、致畸、致突變的危害，尤其對(duì)發(fā)育不完全的嬰幼兒有極大的危害。四環(huán)素類藥物遍布體內(nèi)各處，極易在牙齒和身體骨骼處沉積，與鈣元素發(fā)生反應(yīng)，生成難溶物質(zhì)，不利于青少年的發(fā)育，還會(huì)導(dǎo)致牙齒發(fā)生不可逆的染色，且可對(duì)肝臟造成損害。

1 免疫分析法測(cè)定

目前，測(cè)定動(dòng)物性食品中的四環(huán)素類藥物有很多種不同的方法，如微生物檢測(cè)法、免疫分析法、儀器分析法等。其中儀器分析法雖然具有較高的準(zhǔn)確度，但儀器價(jià)格昂貴，對(duì)操作人員要求較高，并且檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，因此其應(yīng)用受到了限制。微生物法樣品前處理以及操作步驟簡(jiǎn)單，但需要二次確證，常用于定性分析。而免疫分析法是以抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)作為基礎(chǔ)的一種綜合性檢驗(yàn)技術(shù)。這種方法具有敏感性高、特異性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，當(dāng)樣品中抗菌藥物殘留量大于10 μg/kg時(shí)即可使用，廣泛應(yīng)用于四環(huán)素類藥物的定性和定量分析。

1.1 酶聯(lián)免疫吸附法

ELISA法即酶聯(lián)免疫吸附法，結(jié)合了酶的催化作用和抗原抗體的特異性免疫作用，通過(guò)抗原或抗體與樣品中的物質(zhì)結(jié)合，使待測(cè)物質(zhì)與酶連接，底物和酶發(fā)生反應(yīng)后會(huì)產(chǎn)生顏色反應(yīng)，能通過(guò)發(fā)生顏色變化的時(shí)間來(lái)計(jì)算樣品中抗菌性藥物的含量[2]。用此方法測(cè)定樣品中的青霉素、頭孢類等藥物殘留時(shí)還需要對(duì)樣品進(jìn)行處理才能實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)。該檢驗(yàn)方法有準(zhǔn)確度好、檢測(cè)速度快、靈敏度高且適用于大批量樣品檢驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，可以很好的進(jìn)行四環(huán)素類抗菌藥物的檢驗(yàn)。

陳妙瑞[3]對(duì)豬肉、豬肝、牛肉、牛肝、魚肉進(jìn)行了檢驗(yàn)和分析，通過(guò)ELISA法測(cè)定了其中的四環(huán)素類抗菌藥物，發(fā)現(xiàn)通過(guò)此方法對(duì)四環(huán)素類抗菌藥物進(jìn)行檢驗(yàn)，有用時(shí)短、操作容易、效率高的特點(diǎn)。在試驗(yàn)中準(zhǔn)備了40份樣品，從樣品的前處理到完全做完檢測(cè)僅用時(shí)4 h，并且其檢測(cè)限滿足了最高殘留量的標(biāo)準(zhǔn)，這一方法適合基層實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)。

1.2 放射免疫法

放射免疫法（RIA）是發(fā)明時(shí)間較早的一種免疫分析技術(shù)，它的原理是利用樣品中未被標(biāo)記的抗原和經(jīng)過(guò)放射性同位素標(biāo)記的抗原同抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)，再通過(guò)檢測(cè)最終產(chǎn)物中放射性標(biāo)記強(qiáng)度來(lái)計(jì)算原本的樣品中含有多少抗原。這種方法的特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，但易產(chǎn)生放射性污染，因而大大限制了其應(yīng)用[4]。

周浩等[5]根據(jù)GB14963—2003中的要求通過(guò)RIA法對(duì)蜂蜜中殘留的四環(huán)素類抗菌藥物進(jìn)行了檢測(cè)，并用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS）法對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確。而且經(jīng)其研究證明RIA法應(yīng)用時(shí)，磺胺類藥物、紅霉素、鏈霉素等抗菌藥物都對(duì)四環(huán)素類藥物的檢測(cè)無(wú)影響。

1.3 熒光免疫分析法

熒光免疫分析法（FIA）的原理是對(duì)抗原或抗體用熒光物質(zhì)標(biāo)記，然后使其與相應(yīng)的抗體或抗原特異性結(jié)合，再通過(guò)熒光顯微鏡觀察或用紫外線進(jìn)行照射，根據(jù)最終產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度來(lái)判斷原樣品中的含量[6]。這種檢測(cè)方法可以對(duì)多種抗菌性藥物、重金屬、生物毒素等進(jìn)行分析，且具有較高的靈敏度和較強(qiáng)的抗干擾能力。

李研東等[7]對(duì)FIA法進(jìn)行了應(yīng)用，在實(shí)驗(yàn)中對(duì)豬肉、雞肉、魚肉、蝦肉進(jìn)行了檢測(cè)，對(duì)此方法對(duì)藥物檢測(cè)的準(zhǔn)確度、特異性、檢出限等多種性能進(jìn)行了研究，分析發(fā)現(xiàn)FIA法可用于多種不同種藥物的同時(shí)檢測(cè)。而且在實(shí)驗(yàn)中還比較了FIA法、ELISA法和LC-MS法，證明了FIA法具有很好的準(zhǔn)確度和靈敏度。

1.4 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析（GICL）法綜合了膠體金標(biāo)記技術(shù)和抗原抗體的特異性結(jié)合來(lái)對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)[8]，其原理是用膠體金納米材料作為抗體標(biāo)記物，在特定的反應(yīng)膜區(qū)域與抗體（或抗原）形成紫紅色的物質(zhì)。它的操作簡(jiǎn)單、直觀，可以進(jìn)行定性檢測(cè)或半定量檢測(cè)。聶雯瑩等[9]通過(guò)膠體金免疫層析法對(duì)牛奶中的四環(huán)素類藥物的殘留量進(jìn)行檢測(cè)。他們研制出的試紙條除檢測(cè)四環(huán)素類藥物殘留外還可以檢測(cè)β-內(nèi)酰胺類藥物，有特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，且其檢測(cè)時(shí)間短，僅需3～5 min，可以滿足對(duì)檢測(cè)四環(huán)素類藥物的 要求。

1.5 電化學(xué)免疫法

電化學(xué)免疫法結(jié)合了電化學(xué)技術(shù)和免疫分析技術(shù)，可以對(duì)四環(huán)素殘留進(jìn)行快速檢測(cè)。它的原理是使用電化學(xué)試劑對(duì)抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記，如果樣品中含有四環(huán)素及其代謝產(chǎn)物時(shí)，能發(fā)生特異性結(jié)合，結(jié)合后的電化學(xué)信號(hào)不同于先前，并可以將這種變化通過(guò)儀器的放大指示器顯示。該檢測(cè)方法不僅具有電化學(xué)分析法靈敏度高的特點(diǎn)還有免疫分析法特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，并且不會(huì)產(chǎn)生放射性污染，操作簡(jiǎn)單。

鄭舒[10]研究了一種電化學(xué)免疫傳感器，使用這一儀器對(duì)牛奶中的四環(huán)素殘留進(jìn)行檢測(cè)，其工作電極為五氧化二鈮。最后使用ELISA對(duì)這一方法進(jìn)行了驗(yàn)證，證明了此方法的準(zhǔn)確性，適用于檢測(cè)四環(huán)素殘留。

2 結(jié)語(yǔ)

食品中殘留四環(huán)素類藥物有流動(dòng)性強(qiáng)、不穩(wěn)定的特點(diǎn)，危害消費(fèi)者身體健康。然而，目前用于檢測(cè)食品中四環(huán)素類抗菌藥物的方法，多數(shù)存在樣品前處理復(fù)雜、不適合短時(shí)的現(xiàn)場(chǎng)篩查等缺點(diǎn)。隨著監(jiān)管部門對(duì)獸藥濫用的問(wèn)題的重視、監(jiān)控體系的完善，發(fā)展可視化現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)食品中四環(huán)素類藥物殘留的方法是必然的發(fā)展趨勢(shì)。因此，在食品安全檢測(cè)中免疫分析技術(shù)將越來(lái)越受到人們的重視，為我國(guó)的食品安全檢測(cè)提供更合適的方法。