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    南京市部分地區(qū)禽流感免疫抗體水平分析

    2023-02-15 08:48:56劉峻池白夢茹于豐碩
    養(yǎng)殖與飼料 2023年2期
    關(guān)鍵詞:場點免疫抗體效價

    劉峻池,黃 鑫,楊 虹,白夢茹,于豐碩

    江蘇省南京市畜牧獸醫(yī)站,南京 210012

    禽流感(avian influenza,AI)是由A 型流感病毒引起的人獸共患傳染病,根據(jù)其病毒致病力的不同,大體可分為高致病性禽流感(HPAI)、低致病性禽流感(LPAI)和非致病性禽流感[1-2]。高致病性禽流感的廣泛流行對養(yǎng)禽業(yè)的危害極重,被OIE 列為必須報告的動物傳染病和A 類傳染病,我國則將其列為一類動物疫病并實施強制免疫。高致病性禽流感病原主要為H5 亞型和H7 亞型,一旦感染家禽,發(fā)病率和死亡率均高,給養(yǎng)禽業(yè)造成重大損失[3-5]。疫苗免疫是防控禽流感的重要手段,目前,我國強制免疫的禽流感疫苗為重組禽流感病毒H5+H7 三價滅活疫苗(H5N1 Re-11 株+Re-12 株,H7N9 H7-Re3 株)[6-8]。

    1 材料與方法

    1.1 主要材料

    禽血清,采自江蘇南京19 個家禽養(yǎng)殖場點;1%紅細胞懸液,自行配制;禽流感病毒H5 亞型Re-11株血凝抑制試驗抗原(批號2020002)、禽流感病毒H5 亞型Re-12 株血凝抑制試驗抗原(批號2021002)、禽流感病毒H7 亞型H7-Re3 株血凝抑制試驗抗原(批號2021004)及陰陽性血清,購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

    1.2 樣品采集

    家禽側(cè)臥保定,展開翅膀,暴露翅靜脈,用酒精棉球擦拭靜脈處表皮。入針,使采血器針頭方向與靜脈一致,入針角度約為15°。緩慢抽取禽血3~5 mL,拔出針頭,套緊針帽,禽翅靜脈壓迫止血,將采血器活塞拉至最底部,掰去活塞軸,做好標記。

    1.3 雞紅細胞的采集

    采集3 只健康公雞血液于抗凝管中,方法同本文“1.2”,采集時將抗凝管充分顛倒,使雞血與抗凝劑混勻,標記備用。

    1.4 禽血清樣品的制備

    將裝有禽全血的采血器傾斜45°放入恒溫培養(yǎng)箱37 ℃靜置2 h,取出,再放入4 ℃冰箱靜置過夜,使血清充分析出。將血清轉(zhuǎn)移至無菌2 mL 離心管中,做好標記,備用。

    1.5 1%紅細胞懸液制備

    向抗凝血中加入PBS,顛倒混勻以充分洗滌紅細胞,1 000 r/min 室溫離心10 min,充分吸取上清。如此洗滌3 次后,用PBS 配成體積分數(shù)為1%的紅細胞懸液,備用。

    1.6 抗體效價的測定

    采用HA/HI 試驗對禽血樣本中的禽流感病毒抗體進行效價測定。血凝(HA)和血凝抑制(HI)試驗(微量法)按《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936—2020)進行。試驗結(jié)果按照《2022—2025 年江蘇省動物疫病監(jiān)測與流行病學調(diào)查工作方案》(蘇農(nóng)辦牧〔2022〕7 號)標準判定,即HI 抗體效價≥4 log2 為免疫合格個體,免疫合格個體數(shù)量占群體總數(shù)的70%(含)以上為免疫合格群體。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 各場點禽流感疫苗免疫情況

    本研究對各場點禽類別、飼養(yǎng)量、飼養(yǎng)模式、日齡及免疫情況進行了統(tǒng)計(表1),采集的血清樣本主要來自于雞,部分來自于鴨、鵝等水禽,所有養(yǎng)禽場均有H5+H7 三價滅活苗(H5N1 Re-11 株+Re-12 株,H7N9 H7-Re3 株)免疫史,疫苗品牌按使用率排序依次為乾元浩、大華農(nóng)、吉林冠界和哈藥集團。

    表1 各場點基本信息

    2.2 各場點禽流感抗體檢測情況

    對各場點禽血清的Re-11 抗體、Re-12 抗體及H7-Re3 抗體進行檢測,并對各場點的免疫合格率進行統(tǒng)計,結(jié)果見表2。300 份禽血Re-11 抗體合格率為98.3%,Re-12 抗體合格率為97.7%,H7-Re3 抗體合格率為94.3%;各場點Re-11、Re-12 抗體合格率均在70%以上,有2 個場點H7-Re3 抗體合格率不足70%。禽流感免疫抗體水平整體較高,但場點F、S 的H7-Re3 免疫效果不理想。

    表2 各場點抗體合格率

    2.3 各場點禽流感抗體水平分析

    對各場點禽血清禽流感抗體水平進行分析,并計算出抗體效價均值及變異系數(shù)(表3)。總體上各場點禽流感免疫抗體效價較高、均勻度良好,但場點F、S 的抗體效價偏低且均勻度較差。

    表3 各場點禽流感抗體效價均值及變異系數(shù)

    續(xù)表3

    3 討 論

    目前,疫苗免疫仍是我國養(yǎng)禽業(yè)防止禽流感暴發(fā)的主要措施,現(xiàn)階段使用的疫苗為重組禽流感病毒H5+H7 三價滅活苗(H5N1 Re-11 株+Re-12 株,H7N9 H7-Re3 株)。為主動監(jiān)測本地區(qū)禽流感免疫情況,本研究對來自江蘇南京19 個場點的300 份禽血進行抗體檢測并對抗體水平進行分析[9-11],以期為禽流感防控提供依據(jù)。

    3.1 南京市禽流感免疫抗體水平整體較高

    本研究中所選取的養(yǎng)禽場點在飼養(yǎng)規(guī)模上全面覆蓋了禽場和散戶,在養(yǎng)殖禽類別上兼顧了雞、鴨、鵝3 種主要禽類。從疫苗接種率上,所有的禽類養(yǎng)殖場點均提供了禽流感疫苗免疫信息,禽流感疫苗接種率達100%,充分反映出本地區(qū)禽流感免疫工作整體完成情況良好、各場點工作人員素質(zhì)較高。從抗體合格率看,總體上禽流感3 種抗體合格率均達90%以上,且大部分場點禽流感3 種毒株的抗體效價較高(8 log2 以上),可為禽流感Re-11株、Re-12 株及H7-Re3 株的感染提供免疫保護。從抗體均勻度看,整體上禽流感3 種抗體的變異系數(shù)均不超過0.3,表明抗體均勻度較高,達到了應(yīng)有的免疫效果。

    3.2 部分場點免疫效果不理想的原因

    分析發(fā)現(xiàn),場點F 和場點S 的H7-Re3 抗體合格率不足70%,理論上不能形成有效的群體保護,且這2 個場點的3 種抗體的變異系數(shù)均較高(>30%),抗體均勻度差,具有感染風險。通過查詢場點信息得知,場點F 最后1 次免疫距采樣時間間隔已超過180 d,推測長時間未補免是導致抗體水平下降的主要原因,可通過及時補免使雞群抗體恢復至高水平。場點S 主要飼養(yǎng)的禽類為鵝,該批鵝日齡較低,且采樣前21 d 才進行禽流感疫苗的免疫,推測該鵝群抗體水平較低的主要原因是免疫與采樣的時間間隔較短,鵝群尚未產(chǎn)生足夠多的抗體,可間隔一段時間再對該鵝群進行抗體監(jiān)測,若抗體水平仍較低則可能是免疫失敗,應(yīng)及時補免。

    3.3 H7 亞型與H5 亞型免疫抗體水平的比較

    在本研究中,對3 種抗體合格率計算發(fā)現(xiàn),各場點合格率不足70%的指標均為H7-Re3 抗體。因此,本研究將所有場點的全部3 種指標的抗體效價進行統(tǒng)計并計算平均值,結(jié)果發(fā)現(xiàn)除有2 個場點3種抗體效價均達到10 log2 外,其余場點的H7 亞型抗體水平均低于該場點H5 亞型抗體水平,占89.5%。此外,由于國標《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936—2020)中HA/HI 試驗所能測得的最高抗體效價為10 log2,由表3 可知許多場點的H5亞型抗體均值達10.00(即全部禽血樣本抗體效價均為10 log2),理論上H7 亞型抗體水平與H5 亞型差距更大。通過查閱疫苗說明書,未發(fā)現(xiàn)3 種毒株在疫苗中的含量有差別,且H5+H7 滅活苗為“一針三價”,理論上不存在單獨一價免疫失敗的可能,因此推測2 種H5 亞型疫苗株之間存在交叉保護。這提示我們以后在禽流感抗體監(jiān)測時要格外注意對H7 亞型的免疫抗體水平的監(jiān)測。

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