循環(huán)血液中的環(huán)狀RNA在消化系統(tǒng)腫瘤中的研究進(jìn)展①

楊立羊 張新軍③ 王慶領(lǐng) 苗 吉 （寧波市北侖區(qū)人民醫(yī)院，寧波315826）

消化系統(tǒng)腫瘤嚴(yán)重威脅全球人類生存健康。據(jù)最新全球研究報告顯示，全球發(fā)病率最高的10種腫瘤中消化系統(tǒng)腫瘤占據(jù)5 種，分別為結(jié)腸癌、胃癌、肝癌、直腸癌、食管癌，死亡率最高的10 種腫瘤中消化系統(tǒng)腫瘤占據(jù)6 種，分別為胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、食管癌、胰腺癌、直腸癌，并且消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢［1］。目前，用于消化系統(tǒng)腫瘤的診斷及預(yù)后評估的常用方法包括內(nèi)鏡檢查、腫瘤標(biāo)志物（CEA、CA199、AFP 等）檢測、影像學(xué)檢查等，由于侵入性、敏感性和特異性較低，它們在臨床應(yīng)用中存在一定的局限性［2-3］。因此尋找侵入性小，敏感性及特異性高的檢測方法用于消化系統(tǒng)腫瘤的早期診斷及預(yù)后評估非常重要。

環(huán)狀 RNA（circular RNAs，circRNAs）由線性前體mRNA 反剪接產(chǎn)生，是一種沒有游離3'-5'末端的共價閉環(huán)結(jié)構(gòu)的RNA 分子，具有數(shù)量多、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、高度保守、特異表達(dá)等特性［4］。它能通過充當(dāng)mi-RNA 分子海綿、調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄及剪接、參與蛋白質(zhì)的翻譯等參與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移及腫瘤進(jìn)展等病理過程［5-7］。近幾年來，研究發(fā)現(xiàn)人類血液中存在成千上萬的circRNAs，并且它們高度穩(wěn)定，能夠抵抗高溫、極端酸堿度以及長期冷凍貯藏等惡劣條件［8-9］。以上發(fā)現(xiàn)表明了circRNAs 具有作為腫瘤循環(huán)生物標(biāo)志物的潛力。本文就循環(huán)血液中circRNAs 的來源以及其在消化系統(tǒng)腫瘤中的臨床價值進(jìn)行總結(jié)，旨在為消化系統(tǒng)腫瘤的診斷及預(yù)后提供新的非侵入性生物標(biāo)志物，為其治療靶點(diǎn)的選擇提供參考。

1 循環(huán)血液中circRNAs的來源

對于循環(huán)血液中circRNAs 來源的猜測主要來自以下幾個方面：①外泌體是主要來源：外泌體是由細(xì)胞產(chǎn)生、脫落進(jìn)入體液循環(huán)的囊泡，它可攜帶circRNAs 等多種分子進(jìn)入血液循環(huán)，通過在血液中轉(zhuǎn)移這些分子參與細(xì)胞間的通訊，進(jìn)而影響腫瘤的生物活性，如增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移、免疫調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的生成和血管生成的刺激［10-11］；②組織或細(xì)胞的損傷、壞死或凋亡被動釋放RNA：正常情況下，細(xì)胞內(nèi)的ncRNAs 不易進(jìn)入循環(huán)，但在組織損傷或細(xì)胞壞死時會發(fā)生，破損細(xì)胞和組織的被動泄漏是一個不需要能量的過程。在腫瘤轉(zhuǎn)移或慢性炎癥的情況下，原發(fā)部位的組織或細(xì)胞可能破裂，釋放細(xì)胞內(nèi)的ncRNAs 進(jìn)入循環(huán)［12］。某些血細(xì)胞（如血小板和單核細(xì)胞）也可通過這種被動方式釋放RNA進(jìn)入循環(huán)，因為它們的半衰期相對較短；③細(xì)胞主動釋放RNA：細(xì)胞直接釋放無外泌體包被的RNA ，其方式與釋放某些激素和細(xì)胞因子類似，首先將RNA 裝入細(xì)胞內(nèi)的小的分泌囊泡或顆粒中，然后通過分泌囊泡或顆粒與細(xì)胞膜融合，將RNA 釋放到循環(huán)中。與激素和細(xì)胞因子的分泌類似，這種分泌方式可在有或無細(xì)胞刺激的情況下發(fā)生［13-14］；④其他來源：治療干預(yù)也可能導(dǎo)致循環(huán)核酸的存在［15］。

2 循環(huán)血液中的circRNAs 在消化系統(tǒng)腫瘤中的臨床作用

隨著生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，目前發(fā)現(xiàn)循環(huán)血液中的circRNAs 在腫瘤的早期診斷、預(yù)后評估以及藥物療效預(yù)測方面發(fā)揮著重要作用［16-17］。并且研究表明，在消化系統(tǒng)腫瘤診治中，血液中的circRNAs 將能為其提供非侵入性生物標(biāo)志物，并能在其治療靶點(diǎn)的選擇上提供參考（如表1）。

表1 循環(huán)血液中的環(huán)狀RNA在消化系統(tǒng)腫瘤中的作用Tab.1 Role of circRNAs from circulating blood in digestive system neoplasms

3 循環(huán)血液中的circRNAs與食管癌（esoph?agus cancer，EC）

EC 發(fā)病率及死亡率較高，90%的EC 為食管鱗癌（esophageal squamous carcinoma，ESCC）［43］。近年來，盡管在ESCC 治療方面取得了一定進(jìn)展，但患者預(yù)后仍較差，5 年總生存率僅為 20%~30%［44］。目前臨床上診斷ESCC 的血清學(xué)指標(biāo)敏感性和特異性較低。因此探索新的血清學(xué)標(biāo)志物用于EC 的診斷及預(yù)后是至關(guān)重要的。

3.1 診斷價值 WANG 等［18］在對比 87 例 ESCC 患者和53例健康人血漿中circ_SLC7A5的表達(dá)水平時發(fā)現(xiàn)，circ_SLC7A5 在ESCC 患者血漿中的表達(dá)水平明顯升高，建構(gòu)受試者工作特征（relative operating characteristic，ROC）曲線評估診斷價值顯示，ROC 曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.771 7，說明circ_SLC7A5對ESCC具有較好的早期診斷價值。

3.2 預(yù)后價值 血漿中的circ_SLC7A5 在ESCC 患者預(yù)后評估上也具有重要作用。研究顯示circ_SLC7A5 與 TNM 分期呈正相關(guān)，且 Kaplan-Meier生存分析和log-rank 檢驗結(jié)果顯示，與circ_SLC7A5表達(dá)水平較低的ESCC 患者相比，circ_SLC7A5 表達(dá)水平較高的ESCC 患者生存時間明顯縮短。另外單因素和多因素分析表明，circ_SLC7A5 表達(dá)水平和TNM分期均為ESCC患者總體生存率（overall survival，OS）的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)［18］。由此說明血漿中異常表達(dá)的circ_SLC7A5 對ESCC 具有較好的早期診斷及預(yù)后評估價值，有望成為非侵入性生物標(biāo)志物。

4 循環(huán)血液中的circRNAs 與胃癌（gastric cancer，GC）

GC的診治仍然是腫瘤學(xué)領(lǐng)域的一個挑戰(zhàn)，其生存率、治愈率低，復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差，且目前國內(nèi)對GC 的早期診斷率不高［45］。近年來，大量研究顯示，血液中異常表達(dá)的circRNAs 可能成為GC 診斷、進(jìn)程監(jiān)測及預(yù)后評估的特異標(biāo)志物，對GC 患者的診治及預(yù)后評估具有重要臨床意義。

4.1 診斷價值 GC 患者血漿中circ_0000520 的表達(dá)較正常人明顯下調(diào)，建構(gòu)ROC 曲線分析發(fā)現(xiàn)，其AUC 為0.896 7，敏感性及特異性分別為82.35%、84.44%。并且circ_0000520 表達(dá)水平在CEA 陽性患者中較低，但表達(dá)水平與其他臨床病理特征無關(guān)系［21］。說明血漿中 circ_0000520 對 GC 患者具有較好的診斷價值。circ_0000190 在GC 患者組織及血漿中表達(dá)下調(diào)。血漿中circ_0000190 表達(dá)水平與CEA 相關(guān)，CEA 陽性患者 circ_0000190 水平較高。分析血漿中circ_0000190 的診斷價值，提示AUC 為0.60，敏感性為0.414，特異性為0.875。并且組織和血漿中的circ_0000190 聯(lián)合診斷時，其敏感性和特異性明顯增加，分別為 0.712 和 0.750，AUC 增加到0.78，因此circ_0000190作為一種血液標(biāo)志物，可能提高GC 的診斷價值［22］。血漿中的circ_0001017和circ_0061276可以有效區(qū)分GC 患者與正常人群，構(gòu)建ROC 曲線分析發(fā)現(xiàn)，血漿circ_0001017、circ_0061276的AUC值分別為0.851、0.849，顯著高于組織中同類circRNAs 的診斷價值，并且血漿中這兩種circRNAs 聯(lián)合診斷時，AUC 升高至 0.912，此外，組織與血漿中的circRNAs 聯(lián)合診斷時，較單一組織circRNAs 的靈敏度及特異度增加，并且陽性預(yù)測值（relative positive predictive value，PPV）和陰性預(yù)測值（negative predictive value，NPV）明顯增加，顯著提高了診斷的準(zhǔn)確性［23］。

4.2 預(yù)后價值 Circ_002059 在GC 患者中表達(dá)下調(diào)，對GC 患者具有較高的診斷能力。此外，circ_002059 低表達(dá)與患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM 分期顯著相關(guān)，并且GC 患者術(shù)前、術(shù)后血漿中的circ_002059表達(dá)水平具有顯著性差異［24］。由此說明，circ_002059也是胃癌的預(yù)后因素。在GC 患者組織及血漿中，circ_0001017和circ_0061276表達(dá)均明顯下調(diào)，術(shù)后患者血漿中的兩種circRNAs 表達(dá)水平顯著升高，恢復(fù)至正常人水平，并且術(shù)后表達(dá)水平恢復(fù)組的GC患者，無論術(shù)前在何分期，均有較長時間的無病生存率（disease free survival，DFS）。此外，術(shù)后血漿中circ_0001017 表達(dá)水平恢復(fù)情況可以作為GC 患者DFS 的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。另外，組織及血漿中circ_0001017、circ_0061276 表達(dá)水平與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和腫瘤大小相關(guān)，血漿中circ_0001017 和circ_0061276 水平的降低與較高的總體死亡率和TNM III-IV期顯著相關(guān)，并且低表達(dá)組OS明顯低于高表達(dá)組。單變量分析和多變量分析顯示，血漿circ_0001017 和circ_0061276是GC患者OS的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)［23］。

4.3 治療靶點(diǎn) 血漿circ_0021087 不僅對GC 患者具有較好的診斷及預(yù)后評估價值，而且還能提供治療靶點(diǎn)。circ_0021087 在GC 的血液和細(xì)胞中顯著下調(diào)，下調(diào)的circ_0021087 促進(jìn)GC 細(xì)胞的增殖、遷移。通過對胃癌circ_0021087-miRNA-mRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的預(yù)測，確定了3種miRNA（miR-1286、miR-184和miR-450b-3p）及205 個靶基因，生物信息學(xué)分析顯示此調(diào)控網(wǎng)絡(luò)可能與GC 發(fā)展有關(guān)［25］。由此說明circ_0021087可能是GC的治療靶點(diǎn)。

5 循環(huán)血液中的circRNAs 與胰腺癌、膽管癌（cholangiocarcinoma，CCA）

胰腺導(dǎo)管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC）及CCA 是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，早期診斷難度大，發(fā)展迅速，侵襲轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，復(fù)發(fā)率及死亡率高［29，46］。因腫瘤對放化療敏感性差，目前手術(shù)治療是唯一可行的治療方式［47］。此外，近年來腫瘤發(fā)病率呈上升趨勢，因此迫切需要尋找合適的生物標(biāo)志物以及檢測對PDAC及CAA特殊的治療靶點(diǎn)。

5.1 診斷價值 研究發(fā)現(xiàn)circ_0000284 不僅在CCA 細(xì)胞、組織中表達(dá)上調(diào)，而且在患者血漿外泌體中表達(dá)也明顯上調(diào)。有趣的是，外泌體介導(dǎo)的circ_0000284 對周圍正常細(xì)胞具有促癌作用。進(jìn)一步的實驗探索了circ_0000284 的致癌機(jī)制，發(fā)現(xiàn)它可通過競爭性結(jié)合miR-637，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞抗原-6e（lymphocyte antigen-6e，LY6E）表達(dá)增加，進(jìn)而引起CAA 的發(fā)生發(fā)展［27］。由此說明，血漿外泌體 circ_0000284 可作為CCA 非侵襲性的診斷性標(biāo)志物，同時也能提供治療靶點(diǎn)。

5.2 預(yù)后價值 血漿外泌體circ_PDE8A 表達(dá)水平在PDAC 患者中明顯升高，并且circ_PDE8A 的高表達(dá)與十二指腸侵犯、血管侵犯以及TNM 分期有關(guān)。生存分析顯示，外泌體circ_PDE8A 高表達(dá)與低生存率有關(guān)，多變量分析也表明，外泌體circ_PDE8A 高表達(dá)是OS 的獨(dú)立風(fēng)險因素［28］。因此，血漿外泌體circ_PDE8A 的高表達(dá)是個預(yù)后不良因素。研究發(fā)現(xiàn)circ_IARS 在轉(zhuǎn)移性胰腺癌患者的血漿外泌體中表達(dá)上調(diào)，并且circ_IARS 的高表達(dá)與腫瘤血管浸潤、肝轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM 分期有關(guān)。單因素及多因素生存分析顯示，circ_IARS 高表達(dá)是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素，并且生存曲線分析提示，circ_IARS 高表達(dá)組患者的生存時間明顯短于circ_IARS低表達(dá)組［29］。由此可見，血漿外泌體中異常表達(dá)的circ_IARS 是影響胰腺癌患者預(yù)后的一個主要因素。

5.3 治療靶點(diǎn) 血漿外泌體circ_PDE8A 與PDAC患者的腫瘤侵襲和進(jìn)展相關(guān)。上調(diào)circ_PDE8A 可促進(jìn)PDAC 細(xì)胞的遷移和侵襲，抑制circ_PDE8A 的表達(dá)過程則被阻斷。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)circ_PDE8A的促癌作用與circRNA-miRNA-mRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)有關(guān)，circ_PDE8A 通過海綿 miR-338 從而上調(diào)MACC1，進(jìn)而刺激MET 通路促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，另外ERK 通路也被證實與腫瘤侵襲有關(guān)［28］。因此，circ_PDE8A 可作為分子靶點(diǎn)用于胰腺癌的靶向治療。血管內(nèi)皮通透性的增加與腫瘤轉(zhuǎn)移及侵襲有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，血漿外泌體中表達(dá)上調(diào)的circ_IARS可增加血管內(nèi)皮的通透性，并且發(fā)現(xiàn)circ_IARS發(fā)揮這種效應(yīng)與其競爭性結(jié)合miR-122，下調(diào)miR-122的表達(dá)，增加下游靶基因RhoA 的表達(dá)和活性有關(guān)，而circ_IARS 表達(dá)受抑制時，此通路效應(yīng)則相應(yīng)被阻斷［29］。由此可見，血漿中circ_IARS/miR-122/RhoA通路可能為轉(zhuǎn)移性胰腺癌治療藥物的研發(fā)提供思路。

6 循環(huán)血液中的circRNAs與肝癌

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常見的原發(fā)性肝癌，也是世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡的主要原因。90%HCC的發(fā)生與慢性肝病和肝硬化有關(guān)［48］。盡管目前檢測方法廣泛應(yīng)用，但70%的HCC 患者在晚期才被確診［49］。因此，闡明 HCC 發(fā)生發(fā)展的生理病理機(jī)制，尋找有效的診斷和治療靶點(diǎn)是當(dāng)務(wù)之急。

6.1 診斷價值 研究發(fā)現(xiàn)，表達(dá)上調(diào)的circ_00-51443 可在G0/G1 期阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)HCC細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖。qRT-PCR 結(jié)果顯示，HCC 患者血漿外泌體中的circ_0051443表達(dá)水平明顯低于健康對照組。構(gòu)建ROC 曲線檢測血漿外泌體circ_0051443 區(qū)分HCC 患者與正常人的價值，提示AUC為0.808 9［30］。說明血漿外泌體circ_0051443具有較好的早期診斷價值。ZHANG 等［31］對 104 例HCC 患者、57 例肝硬化患者、44 例乙型肝炎患者和52例健康對照者的血漿circ_0001445表達(dá)水平分析時發(fā)現(xiàn)，HCC 患者血漿circ_0001445表達(dá)水平最低，肝硬化及乙型肝炎患者其次，并且circ_0001445 表達(dá)水平與血清AFP 水平相關(guān)，血清AFP< 20 μg/L HCC 患者的血漿circ_0001445表達(dá)水平顯著低于血清 AFP≥20 μg/L HCC 患者。構(gòu)建 ROC 曲線區(qū)分HCC患者與健康對照組，提示AUC為0.862，特異性和敏感性分別為94.2%和71.2%，此外，血漿circ_0001445 也可用于區(qū)分HCC 患者與肝硬化患者（AUC=0.672），和乙型肝炎患者（AUC=0.764）。其次，血漿circ_0001445 聯(lián)合AFP 診斷時，各對比組AUC 明顯增加，較單純使用血漿circ_0001445 或血清 AFP 診 斷 準(zhǔn) 確 性 更 高［31］。 因 此 ，血 漿 circ_0001445可能成為一種新的診斷HCC的生物標(biāo)志物。

6.2 預(yù)后價值 外泌體circPTGR1 能促進(jìn)HCC 細(xì)胞的侵襲及遷移，與HCC 患者預(yù)后不良有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，circPTGR1 在HCC 不同臨床分期中的表達(dá)差異顯著，表達(dá)水平隨著TNM 分期進(jìn)展而升高。生存分析顯示，circPTGR1 水平低的患者生存率高于cir‐cPTGR1 水平高的患者，提示circPTGR1 低表達(dá)的HCC 患者預(yù)后優(yōu)于circPTGR1 高表達(dá)的HCC 患者［32］。研究發(fā)現(xiàn)circ_100338 在轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞及其分泌的外泌體中均為高表達(dá)，并且circ_100338表達(dá)水平與HCC 細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。術(shù)后患者血清外泌體circ_100338 的變化可以早期預(yù)測HCC 的肺轉(zhuǎn)移，且敏感性高于AFP。此外，在接受根治性肝切除術(shù)的HCC 患者血清中，外泌體circ_100338 的持續(xù)高表達(dá)可能是肺轉(zhuǎn)移和生存不良的風(fēng)險指標(biāo)［33］。

6.3 治療靶點(diǎn) 體內(nèi)外實驗表明外泌體circ_0051443可顯著抑制HCC增殖，進(jìn)一步研究顯示，這種抑制作用可能通過上調(diào)BAK1 表達(dá)實現(xiàn)。BAK1是miR-331-3p 的潛在靶基因，miR-331-3p 模擬物能降低BAK1表達(dá)，然而上調(diào)的外泌體circ_0051443能顯著抑制這種作用。由此說明，circ_0051443 可以通過海綿miR-331-3p 進(jìn)而調(diào)控BAK1 表達(dá)，抑制HCC 進(jìn)展［30］。提示 circ_0051443 可能是 HCC 治療的一個關(guān)鍵靶點(diǎn)。circPTGR1 在HCC 中表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，外泌體circPTGR1 可通過circPT‐GR1-mir449a-MET 通路促進(jìn)HCC 的遷移和轉(zhuǎn)移。circPTGR1 的表達(dá)水平與MET 水平呈正相關(guān)，與miR449a 呈負(fù)相關(guān)，另外，miR449a 的高表達(dá)，可導(dǎo)致MET 水平降低，而miR449a 表達(dá)受抑制，能使MET 水平升高，此外，敲低circPTGR1 可逆轉(zhuǎn)miR449a水平的降低和MET表達(dá)水平的升高［32］。由此說明，circPTGR1-mir449a-MET 是促進(jìn) HCC 進(jìn)展的關(guān)鍵，circPTGR1可能是HCC治療的靶點(diǎn)。

7 循環(huán)血液中的circRNAs 與結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）

CRC 是世界上最常見的癌癥之一，發(fā)病率位居第三，死亡率位居第二［1］。導(dǎo)致CRC 生存率較低的主要原因是缺乏合適的早期診斷方法，以及不能采取及時有效的治療方式。因此，找到理想的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)是提高CRC生存率的重要突破口。

7.1 診斷價值 與健康對照組相比，CRC 患者血漿 中 3 種 circRNAs（circ_CCDC66、circ_ABCC1 和circ_STIL）的水平明顯降低。ROC 曲線分析顯示，3 種 circRNA 組合面板的 AUC 值為 0.780，診斷價值高于CEA 和CA199。將3種circRNA 與CEA、CA199聯(lián)合應(yīng)用時，可提高CRC 的診斷能力，AUC 提升為0.855。此外，在CRC 癌前病變患者血漿中，circ_CCDC66 和circ_ABCC1 水平降低，術(shù)后血漿circ_CCDC66 水平明顯升高。另外，這3 種circRNA組合面板提高了診斷CEA 和CA199 陰性CRC 的能力［36］。PAN 等［38］對CRC 患者、良性的腸道疾?。╞e‐nign intestinal diseases，BIDs）患者以及健康人血清外泌體中circ_0004771 水平分析時發(fā)現(xiàn)，CRC 患者血清外泌體circ_0004771 表達(dá)明顯上調(diào)，其術(shù)后表達(dá)明顯降低。并且發(fā)現(xiàn)circ_0004771 具有很高的早期診斷價值，在區(qū)分早期CRC 患者及各分期CRC 患者與健康人時AUC 分別為0.86、0.88，并且敏感性及特異性較好。此外，對于良性病變與早期CRC 也具有良好的鑒別能力，AUC 為0.81，敏感性為81.43%，特異性為74.29%，說明circ_0004771 有望成為循環(huán)腫瘤標(biāo)志物用于CRC 早期診斷。CRC 血漿中 circ_0082182、circ_0000370 明顯上調(diào)，而 circ_0035445 表達(dá)下調(diào)，與其在組織及細(xì)胞中的表達(dá)方式相同。在診斷價值方面，circ_0000370 的AUC 最高，為 0.8152，circ_0082182 、circ_0035445 的 AUC分別為0.7371、0.7028。當(dāng)三者聯(lián)合時AUC 增加至0.8347，突出了它們作為一組早期診斷CRC 標(biāo)志物的優(yōu)越性［39］。

7.2 預(yù)后價值 血漿circ_ABCC1 除了具有診斷價值以外，它還與CRC 預(yù)后有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)血漿circ_ABCC1 表達(dá)水平與腫瘤的增殖和進(jìn)展有關(guān)，血漿circ_ABCC1 低表達(dá)與腫瘤TNM 分期晚、腫瘤數(shù)目多以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)［36］。外泌體circ_0004771 在CRC 患者血清中的表達(dá)升高是由腫瘤引起的。循環(huán)外泌體circ_0004771 的表達(dá)水平與患者TNM 分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，circ_0004771高表達(dá)預(yù)示著CRC 患者預(yù)后不良［38］。血漿中異常表達(dá)的circ_0082182、circ_0000370 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，而circ_0035445 表達(dá)與TNM 分期密切相關(guān)。此外，circ_0082182和circ_0035445表達(dá)水平在術(shù)前、術(shù)后存在顯著性差異［39］。說明血漿中這3 種異常表達(dá)的circRNAs與CRC患者預(yù)后有關(guān)。

7.3 治療靶點(diǎn) 研究發(fā)現(xiàn)circ_ABCC1在CRC外泌體中表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)CRC 的發(fā)生及轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，這種促癌作用與Wnt/β-catenin 通路的激活有關(guān)，提示 circ_ABCC1 可能是 CRC 治療的靶點(diǎn)［37］。circVAPA 在組織及血漿中表達(dá)均上調(diào)，ROC 曲線提示其具有較高的診斷價值，此外，研究發(fā)現(xiàn)circVA‐PA的促癌作用可能與其海綿作用有關(guān)，它能與致癌通路相關(guān)的miR-101 結(jié)合，miR-101 過表達(dá)與circ-VAPA 沉默具有類似的抑癌作用，circVAPA 過表達(dá)引起的促癌作用可通過上調(diào)miR-101 表達(dá)來逆轉(zhuǎn)［40］。說明circVAPA可能成為CRC的治療靶點(diǎn)。

8 總結(jié)與展望

血液是臨床診斷中最常用的標(biāo)本，因其具有簡單、快速、無侵襲性等優(yōu)點(diǎn)，許多研究關(guān)注于循環(huán)生物標(biāo)志物的識別。circRNA 具有特殊的結(jié)構(gòu)和特性，有望成為新的生物學(xué)標(biāo)志物，目前已在消化系統(tǒng)腫瘤患者血液中檢測到了不少circRNAs 穩(wěn)定存在，并與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)，這為消化系統(tǒng)腫瘤早期診斷和預(yù)后評估提供非侵入性生物標(biāo)志物，為靶向治療提供精準(zhǔn)靶點(diǎn)。但目前研究處于初級階段，許多問題有待解決，例如血液中circRNAs 來源較廣，無法明確檢測到circRNAs 是否為來源于腫瘤，實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性有待驗證；其次血液標(biāo)本的質(zhì)量受諸多因素影響，需要排除（飲食、運(yùn)動等）外界因素引起circRNAs 含量的異常；此外，有些消化系統(tǒng)腫瘤的作用機(jī)制仍不明確，需進(jìn)一步探索。本課題組相信通過臨床醫(yī)務(wù)人員以及科研人員的不斷努力，未來有望將circRNAs 作為非侵入性生物標(biāo)志物用于腫瘤臨床，以及為腫瘤提供精準(zhǔn)的治療。