桔梅奇酵母液體制劑的制備及其在柑橘果實上的應用

陳力維，張鴻雁，鄧麗莉,2，曾凱芳,3

桔梅奇酵母液體制劑的制備及其在柑橘果實上的應用

陳力維1，張鴻雁1，鄧麗莉1,2，曾凱芳1,3※

（1. 西南大學食品科學學院，重慶 400715；2. 西南大學食品貯藏與物流研究中心，重慶 400715；3. 國家柑桔工程技術研究中心，重慶 400712）

桔梅奇酵母是分離自柑橘果園葉面的新種酵母，可有效控制柑橘果實采后青霉病、綠霉病和酸腐病，前景廣闊且可替代化學殺菌劑。但生物防治劑效果不穩(wěn)定、生防作用機制不明確等因素導致拮抗酵母商業(yè)化應用的成功率較低。因此開發(fā)貨架期較長且防治效果穩(wěn)定的拮抗酵母生物制劑是實現(xiàn)桔梅奇酵母商業(yè)化的關鍵。該研究以桔梅奇酵母為研究對象，制備以桔梅奇酵母為主要活性成分的液體制劑，并探究制劑對柑橘果實采后主要病害的控制效果。結(jié)果表明：經(jīng)單因素試驗和響應面優(yōu)化試驗得到的保護劑配方：海藻糖19.74%、谷氨酸鈉1.05%、吐溫80 4.24%、脯氨酸1.11%對酵母的保護效果最好，酵母存活率可從5.02%提高到54.96%。貯藏穩(wěn)定性試驗表明，當溫度低于10 ℃時，在貯藏30 d后酵母存活率仍大于60%，適當降低溫度有利于延長制劑的貨架期。離體試驗發(fā)現(xiàn)，與新鮮酵母相比，液體制劑對柑橘采后病原菌的抑制作用無顯著變化（>0.05），抑菌圈可達到12 mm以上。在柑橘果實上能夠有效控制柑橘果實采后青霉病、綠霉病、酸腐病和炭疽病，可將發(fā)病率降低25.00%～48.33%。綜上，對桔梅奇酵母進行制劑化處理后能夠有效保留其細胞活力和生防效力，以桔梅奇酵母為主要活性成分制備的液體制劑對柑橘采后病害具有良好的控制效果。

農(nóng)產(chǎn)品；采后病害；桔梅奇酵母；柑橘；生物防治

0 引 言

柑橘果實采后貯藏期間極易受病原菌侵染，造成產(chǎn)業(yè)重大經(jīng)濟損失。目前，主要通過使用化學殺菌劑來控制采后病害[1]。然而，化學殺菌劑易使病原菌產(chǎn)生抗性，且不易降解，同時對人體和環(huán)境造成危害，因此現(xiàn)階段，開發(fā)出一種能替代化學殺菌劑的安全且環(huán)保的控病方法迫在眉睫[2]。據(jù)報道，梅奇酵母屬菌株——核果梅奇酵母成功實現(xiàn)商業(yè)化應用，將其活菌體作為有效成分的產(chǎn)品Shemer是目前仍在生產(chǎn)銷售的BCAs產(chǎn)品[3]。桔梅奇酵母是本實驗室分離自柑橘果園葉面的新種酵母，前期研究結(jié)果表明其對柑橘果實采后綠霉病和酸腐病均有較好的控制效果[4-5]。

由于外部環(huán)境因素的脅迫影響，常導致酵母活力下降甚至死亡。生物防治劑作為活菌制劑，開發(fā)制備的前提條件是確保酵母制劑能夠維持或接近鮮酵母的生活力[6]。液體制劑具有制備工藝簡單、生產(chǎn)成本低、使用方便等優(yōu)點，經(jīng)濟實用[7-8]。添加保護劑是提高酵母存活率的有效手段。糖類保護劑是常見的保護劑之一，其中二糖的保護作用普遍較好[9]。研究表明細胞內(nèi)源性化合物，如糖醇類、海藻糖等的積累可以提高菌體在脅迫環(huán)境下的耐受性[10-11]。微生物在環(huán)境脅迫作用下酵母細胞內(nèi)會積累大量活性氧，導致嚴重的氧化損傷[12]，抗氧化劑的加入可以有效保護菌體免受氧化脅迫影響。乳化劑可以有效防止溶液中不溶物質(zhì)的絮凝作用，可維持液體體系的穩(wěn)定性[13-14]。此外，拮抗酵母的生防效力也是生防制劑開發(fā)過程中需考慮的因素，拮抗微生物與其他化學物質(zhì)的聯(lián)合使用是提高生防效力、增強抗應激能力的有效途徑之一[15]，包括鈣離子、抗壞血酸、碳水化合物以及其他化學物質(zhì)[16-18]。脯氨酸是一種細胞保護劑，能夠誘導生物膜形成，提高細胞活力[19-20]。氯化鈣作為一種高效、安全的食品添加劑已被用于控制果實采后病害，Wang等[18]將氯化鈣與酵母聯(lián)合使用時發(fā)現(xiàn)能夠提高酵母生防效果。

本文以桔梅奇酵母為研究對象，將其制備成液態(tài)的生防制劑。通過添加保護劑以提高酵母菌懸液在貯藏過程的存活率，并研究了液體制劑的貯藏條件，及在離體條件下對柑橘果實采后病原菌的拮抗作用，最后在采后柑橘果實上進行實際應用，以期為柑橘生防制劑商業(yè)化提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 菌種與試劑

供試酵母菌：桔梅奇酵母（）由本實驗室篩選和保存的桔梅奇酵母FL01株系，并保藏于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保藏號為CICC NO.33213。

病原菌：青霉菌（）、綠霉菌（）、酸腐菌（）和炭疽菌（）為本實驗室保藏菌種。上述病原菌分別在PDA培養(yǎng)基上、4 ℃條件下保藏，每兩個月活化一次。

酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，YPD）：酵母浸粉10 g，葡萄糖20 g，蛋白胨20 g，瓊脂粉10 g，蒸餾水1 L。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（Potato Dextrose Medium，PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，1 L蒸餾水，121 ℃滅菌15 min。

海藻糖（分析純）購自上海泰坦科技股份有限公司；L-抗壞血酸、阿拉伯樹膠（均為分析純）購自重慶躍翔化工有限公司；乳糖、吐溫80、氯化鈣、谷氨酸鈉（均為分析純）購自重慶市鈦新化工有限公司；脯氨酸（分析純）購自重慶擇物生物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

BXM30R立式高壓滅菌鍋，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；SW-CJ-1F超凈工作臺，蘇凈集團安泰有限公司；DHP-9082電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海齊欣科學儀器有限公司；AvantiTM J-30I高速冷凍離心機，美國Beckman有限公司。

1.3 方法

1.3.1 保護劑及保護劑懸浮液的制備

試驗中所使用的保護劑包括：糖類保護劑，抗氧化劑，乳化劑，增效劑。所有保護劑按比例溶解到0.05 mol/L磷酸鹽緩沖溶液（Phosphate Buffered Solution，PBS）中以制備保護劑溶液，使得最后與酵母懸浮液混合后濃度與試驗方案中濃度一致。

1.3.2 保護劑的單因素試驗

根據(jù)微生物制劑的研究進展，本研究所選的四類保護劑是目前對維持微生物菌株活性保護效果較好的。試驗濃度結(jié)合了文獻報道以及本課題組前期研究結(jié)果。

糖類保護劑：選擇海藻糖、乳糖作為保護劑進行單因素試驗，試驗濃度包含1%、5%、10%、15%、20%五個梯度；

抗氧化劑：選擇抗壞血酸、谷氨酸鈉作為抗氧化劑進行單因素試驗，試驗濃度包含0.05%、0.1%、0.5%、1%、2%五個梯度；

乳化劑：選擇吐溫80、阿拉伯樹膠作為乳化劑進行單因素試驗，試驗濃度包含2.5%、5%、7.5%、10%四個梯度；

增效劑：選擇脯氨酸、氯化鈣作為增效劑進行單因素試驗，試驗濃度包含0.5%、1%、2%、5%四個梯度。

以上單因素試驗以0.05 mol/L PBS緩沖溶液作為對照，于25 ℃條件下保存7 d后測定酵母存活率。試驗重復3次。

1.3.3 保護劑的Box-Behnken響應面優(yōu)化試驗

基于保護劑的單因素試驗結(jié)果，使用海藻糖、谷氨酸鈉、吐溫80、脯氨酸進行四因素四水平的Box-Behnken響應面優(yōu)化試驗，試驗因素水平如表1所示。

1.3.4 酵母存活率的測定

采用稀釋平板菌落計數(shù)法[21]，將稀釋到合適濃度的酵母涂布在YPD平板上，在28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。試驗重復3次。酵母存活率用酵母活菌數(shù)初始值（0）以及保存7 d后酵母活菌數(shù)（N）來表示，用如下公式計算酵母存活率：

存活率=（N/0）×100% （1）

表1 桔梅奇酵母液體保護劑Box-Behnken試驗因素水平表

1.3.5 貯藏期酵母存活率的測定

將酵母液體制劑分裝后，密封保存，分別在-20、4、10、18、25、37 ℃條件下貯藏。貯藏第0天酵母的菌落總數(shù)計為0。貯藏后酵母的菌落總數(shù)計為N。每隔15 d測定一次，根據(jù)式（1）計算存活率。

1.3.6 桔梅奇酵母液體制劑對柑橘果實采后主要病害病原菌的平板對峙試驗

參照Parafati等[22]的方法，取10L 1×108CFU/mL新鮮.菌懸液、1×108CFU/mL液體制劑稀釋液，均勻涂布在PDA平板的中軸線上，在中軸線兩側(cè)接種5L 5×105個/mL.、.、.孢子懸浮液或生長5 d的.-的菌餅，以只接種病原菌的平板作為對照，25 ℃培養(yǎng)8 d后記錄病原菌菌絲生長情況，以及色素圈大小。

1.3.7 桔梅奇酵母在柑橘果實傷口處的生長動態(tài)

用無菌打孔器在果實赤道部位等距打四個孔（深3 mm，直徑3 mm）。每個傷口處接種20L新鮮酵母或酵母液體制劑。待菌液吸收后，果實用聚乙烯薄膜袋（170 mm× 140 mm）單果包裝，放置于25 ℃、相對濕度85%～90%的環(huán)境條件下。每天取樣測定傷口處酵母細胞數(shù)量。結(jié)果以每個傷口組織鮮重中酵母細胞的數(shù)量來表示，單位為CFU/wound。

1.3.8 桔梅奇酵母液體制劑對柑橘果實采后主要病害的控制效果

果實傷口打孔方法同1.3.7。每個傷口接種20L如下處理液：無菌水；新鮮.（1×108CFU/mL）；液體制劑最優(yōu)配方保護劑；液體制劑稀釋液（1×108CFU/mL）。4 h后，再在每個孔接種10L、1×105個/mL的.或.，或10L、1×106個/mL的.-或.。每個處理3個平行，每個平行10個果實。待菌液吸收后，單果包裝，貯藏在25℃、相對濕度85%～90%的環(huán)境下。每天統(tǒng)計發(fā)病率（Disease Incidence，DI）和病斑直徑（Lesion Diameter，LD），計算公式如下

DI=（傷口腐爛的數(shù)量/傷口數(shù)）×100% （2）

LD=（病斑橫向直徑+病斑縱向直徑）/2 （3）

1.4 數(shù)據(jù)分析

以上指標均取3個平行樣品，重復測定3次。Excel 2018統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，Design-Expert 8.0.6（Minneapolis，MN 55413）進行響應面優(yōu)化設計及分析，運用OriginPro 9.0.0（Northampton，MA 01060 USA）繪制圖表，應用SPSS 23.0（SPSS Inc.，Chicago，IL，USA）對數(shù)據(jù)進行差異顯著性分析和相關性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 保護劑的單因素篩選試驗

如圖1a所示，沒有添加保護劑時制劑中菌體存活率為5.02%，糖類保護劑加入后能夠提高酵母存活率，隨著海藻糖濃度的升高，酵母存活率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，其中，15%的海藻糖的保護效果較好，菌體存活率可達到11.37%。

抗氧化劑的篩選結(jié)果如圖1b所示，谷氨酸鈉的保護效果最好，隨著谷氨酸鈉濃度的升高，酵母存活率先上升后下降，1%的谷氨酸鈉對酵母的保護作用最好，菌體存活率最高可達10.36%。而高于1%的抗壞血酸促進酵母細胞死亡，使存活率低于對照組。

圖1c中結(jié)果表明，吐溫80對桔梅奇酵母的保護作用優(yōu)于阿拉伯樹膠，其存活率可達到40%左右。隨著加入吐溫80濃度的增加，當濃度大于5%時，繼續(xù)增加吐溫80濃度并未顯著提高酵母存活率。

如圖1d所示，隨著脯氨酸濃度的升高，酵母存活率先升高后降低，1%的脯氨酸對酵母細胞的保護最好，菌體存活率為9.69%。而氯化鈣的加入不利于酵母的存活，其原因可能是氯化鈣作為一種鹽溶液，酵母長期保存在該溶液中時，蛋白質(zhì)易發(fā)生變性，導致酵母死亡。

2.2 保護劑的響應面優(yōu)化試驗

根據(jù)單因素試驗結(jié)果，采用四因素三水平法進行進一步優(yōu)化，試驗設計及結(jié)果如表2所示。

利用Design Expert軟件對上述結(jié)果進行響應面分析，去掉不顯著因子，二次擬合得到多元二次方程如下

=59.39-4.37-4.29+7.65-7.15-7.85

-9.092-6.372-6.302-10.682（4）

式中為制劑中酵母存活率的預測值，、、、分別為編碼的自變量海藻糖、谷氨酸鈉、吐溫80、脯氨酸。

如表3所示，采用方差分析（ANOVA）檢驗顯著性水平，模擬二次多項模型，模型的值為8.75（<0.01）是極顯著的，失擬的值為5.55（=0.057）是不顯著的，因此模型有效。三維響應面圖和二維等高線圖能夠更直觀地反映方差分析結(jié)果。圖2a所示為海藻糖和脯氨酸對酵母存活率的影響，響應面對應的等高線圖為橢圓形，說明海藻糖和脯氨酸對酵母存活率有相互影響，且影響顯著（<0.05），圖2b和圖2c分別為谷氨酸鈉和脯氨酸、吐溫80和脯氨酸之間的相對互作用，均對酵母存活率的影響顯著。

利用Design Expert軟件對回歸方程進行分析，響應面優(yōu)化得到的最佳保護劑配方為：19.74%海藻糖、1.05%谷氨酸鈉、4.24%吐溫80、1.11%脯氨酸，液體制劑在25 ℃條件下保存7 d后桔梅奇酵母的存活率可達到53.75%。應用該保護劑配方，驗證結(jié)果，得到的液體制劑中酵母存活率為54.96%（=3），與預測值相近。與對照（5.02%）相比，經(jīng)響應面優(yōu)化后酵母存活率提高了49.94%。

表2 桔梅奇酵母液體保護劑Box-Behnken試驗設計及結(jié)果

注：1、1、1、1為、、、的編碼值。

Note:1,1,1,1are code of,,,.

表3 二次多項模型的方差分析

注：“**”表示差異極顯著（<0.01）；“*”表示差異顯著（<0.05）。

Note: “**”means difference was very significant (< 0.01); “*” means difference was significant (< 0.05).

2.3 不同溫度條件下桔梅奇酵母液體制劑貯藏穩(wěn)定性試驗

不同溫度條件下，液體制劑貯藏過程中酵母存活率的變化情況如圖3所示。在貯藏過程中，酵母存活率均有不同程度的下降，隨著貯藏溫度的降低，酵母存活率下降幅度減緩。在貯藏30 d后，制劑在18和25 ℃貯藏后，酵母幾乎全部死亡，而溫度低于10 ℃時，酵母存活率仍大于60%，降低貯藏溫度有利于維持酵母活性，延長液體制劑貨架期。當溫度為-20 ℃時，制劑的貨架期可以達到90 d以上。

2.4 桔梅奇酵母液體制劑對柑橘果實采后主要病害病原菌的平板對峙試驗

如圖4a所示，液體制劑中的酵母與新鮮酵母對.、.、.-的菌絲生長均存在不同程度的抑制效果，能夠產(chǎn)生較明顯的抑菌圈，且抑菌圈大小大于12 mm，與新鮮酵母相比，液體制劑分別和這三種病原菌共培養(yǎng)時產(chǎn)生的抑菌圈大小均無顯著性差異，酵母對.菌絲生長無顯著抑制作用。

當酵母分別與四種病原菌共培養(yǎng)時，酵母均可產(chǎn)生紅色色素帶，其寬度如圖4b所示，其中，與新鮮酵母相比，液體制劑中的酵母與.共培養(yǎng)時產(chǎn)生了更寬的色素帶，說明液體制劑保護劑可促進此時的酵母產(chǎn)生更多色素。液體制劑中的酵母與其余三種病原菌共培養(yǎng)時色素帶與新鮮酵母相比無顯著性差異。

2.5 桔梅奇酵母在柑橘果實傷口處的生長動態(tài)

在25 ℃條件下，液體制劑中的桔梅奇酵母及新鮮酵母在果實傷口處的生長動態(tài)如圖5所示。酵母在果實傷口處的動態(tài)變化呈現(xiàn)先急速增加，后緩慢下降的趨勢。接種后0～1 d內(nèi)，酵母數(shù)量迅速增加，接種后第3天酵母數(shù)量達到最大值，9.00×106CFU。接種第6天后，酵母數(shù)量略有下降。與新鮮酵母相比，液體制劑中的酵母在果實傷口處數(shù)量無顯著差異。

2.6 桔梅奇酵母液體制劑對柑橘果實采后主要病害的控制效果

在圖6、圖7所示貯藏過程中，接種酵母后，可有效降低果實綠霉病、青霉病、酸腐病及炭疽病的發(fā)病率，液體制劑處理的柑橘果實發(fā)病率與新鮮酵母處理組的無顯著差異，二者均低于對照組，且與之存在顯著性差異（<0.05）。液體制劑處理后，四種病害的病斑直徑與新鮮酵母處理組相比均無顯著性差異，且都顯著低于對照組（<0.05），可使發(fā)病率降低25.00%～48.33%。

以上結(jié)果顯示，進行制劑化處理后能夠有效保留桔梅奇酵母的細胞活力和生防效力，能夠有效抑制柑橘果實中綠霉病、青霉病、酸腐病及炭疽病的發(fā)生和發(fā)展。

3 討 論

活體微生物易受到環(huán)境因素和加工過程的影響而失活，為實現(xiàn)活菌制劑中微生物較高的存活率，添加適宜的保護劑是一種可行的解決方案[2]。有研究表明海藻糖有助于菌體抵御因外界環(huán)境溫度變化引起的細胞膜損傷[23-25]。對糖類保護劑的篩選結(jié)果表明，海藻糖對.的保護效果最好。李僑飛[26]發(fā)現(xiàn)在液體制劑中，添加2.5%的海藻糖后對酵母的生長有明顯促進作用。唐飛等[27]在單獨使用海藻糖作為保護劑時可使海洋酵母存活率達到42%，而對照僅為3%。抗壞血酸、谷氨酸鈉是食品工業(yè)中常用的抗氧化劑。其中谷氨酸鈉可以通過抑制三酰甘油的氧化和自由基的形成來防止氧化帶來的細胞膜不可逆損傷，從而達到保護菌體的作用[28]。對抗氧化劑的篩選結(jié)果表明谷氨酸鈉對桔梅奇酵母的保護作用較好，Sun等[29-30]發(fā)現(xiàn)添加谷氨酸鈉可使干燥后的植物乳桿菌菌體存活率達到85.12%。吐溫80作為非離子型表面活性劑，可以吸附在菌體表面，改變菌體表面的親疏水性[30]。John等[31]的研究表明表面活性劑對苜蓿根瘤菌菌懸液的均勻懸浮和穩(wěn)定性起著重要作用。脯氨酸是一種細胞保護劑，能夠誘導生物膜形成，提高細胞活力[19-20]。我們對增效劑的篩選結(jié)果顯示，脯氨酸對.菌體的兼容性更好，不會對菌體造成不良影響，能夠維持酵母較高的存活率。有研究表明，單一保護劑微生物菌體的保護作用有限，保護劑的復配可進一步提高菌體存活率[32]。在本文中，經(jīng)過響應面優(yōu)化試驗后得到了.液體制劑保護劑的組成為海藻糖19.74%、谷氨酸鈉1.05%、吐溫80 4.24%、脯氨酸1.11%，可使酵母存活率提高至54.96%，這與吳鋒[32]的研究結(jié)果類似。

良好的貯藏穩(wěn)定性是制劑進行商業(yè)化應用的必要條件，較長的貨架期使制劑保持較高的經(jīng)濟價值。實現(xiàn)這一目標可以通過優(yōu)化配方、包裝以及存儲條件等途徑來實現(xiàn)[33]。從圖3發(fā)現(xiàn)降低貯藏溫度更有利于液體制劑的儲藏穩(wěn)定。Melin等[23]研究發(fā)現(xiàn)畢赤酵母液體制劑在4 ℃條件下細胞活力最高，而且在常溫和高溫下制劑保存時間更短。由于在液體狀態(tài)下，菌體更易受到氧化脅迫等作用導致制劑的貨架期相對較短，降低貯藏溫度、改變制劑配方是進一步提高菌體貯藏穩(wěn)定性的主要途徑。為了解液體制劑對柑橘果實采后主要病害的控制效果，在離體條件下，與新鮮酵母相比，液體制劑中的酵母分別與病原菌共培養(yǎng)時，抑菌圈和色素圈大小均無顯著性差異，說明制劑的主要活性成分沒有被破壞，仍可實現(xiàn)對柑橘采后病害的控制作用。在柑橘果實上，新鮮酵母對柑橘果實青、綠霉病，酸腐病和炭疽病均有顯著的控制效果，這與實驗室前期研究結(jié)果一致[5,34]，說明酵母在控制柑橘采后病害的巨大應用潛力。

4 結(jié) 論

通過對桔梅奇酵母液體制劑保護劑進行篩選和優(yōu)化，得到其最佳配方為海藻糖19.74%、谷氨酸鈉1.05%、吐溫80 4.24%、脯氨酸1.11%，在25 ℃條件下存放7 d后酵母存活率可從5.02%提高到54.96%。在10℃條件下貯藏30 d后，酵母存活率仍可達60%以上。將酵母進行制劑化處理后，在離體和在柑橘果實上均能夠有效保留桔梅奇酵母的細胞活力和生防效力，對柑橘綠霉病、青霉病、酸腐病和炭疽病有顯著控制效果。綜上，本試驗以桔梅奇酵母為主要活性成分制備的液體制劑對柑橘采后病害具有良好的控制效果，能夠應用于柑橘果實采后病害的生物防治。

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Preparation and application of liquid bioformulation ofon citrus fruits

Chen Liwei1, Zhang Hongyan1, Deng Lili1,2, Zeng Kaifang1,3※

(1.,,400715,; 2.,,400715,; 3.,400712,)

Antagonistic yeast has widely expected to replace chemical fungicides, serving as an effective biological agent to control postharvest diseases of citrus., a new species ofspp, isolated from citrus leaves and identified laboratory, was efficient to control postharvest green mold and sour rot caused byandon citrus fruit, indicating great application and development value. However, the unstable effect of biocontrol agents and the unclear mechanism of biocontrol have led to a low success rate of commercial application of antagonistic yeast. Therefore, it is highly urgent to develop the antagonistic yeast biological agents with long shelf life and stable control effect for the commercialization of. In this study, an attempt was made to explore the preparation of liquid bioformulation withas the main active ingredient. Single factor and response surface tests were carried out to optimize the formulation of the protective agent for liquid bioformulation. An in vitro and in vivo test was also conducted to further evaluate the control effect of formulation on the main postharvest diseases of citrus fruits, particularly for the application of liquid preparation. The results showed that four protective agents were screened via a single factor test, including trehalose, sodium glutamate, Tween 80, and proline. The formula of the protective agent was selected: trehalose 19.74%, sodium glutamate 1.05%, Tween 80 4.24%, proline 1.11%, where the best protective effect on, and the survival rate of yeast increased from 5.02% to 54.96%. The storage stability of liquid bioformulation showed that the survival rate ofwas still more than 60% after 30 days of storage when the temperature was lower than 10 ℃. More importantly, the shelf life of preparation reached more than 90 days, when the storage temperature was -20 ℃. As such, a relatively low storage temperature was beneficial to the longer shelf life of bioformulation. In vitro and fruit tests were carried out to verify the application effect of preparation. It was found that there was no significant change in the inhibitory effect of liquid bioformulation on postharvest pathogen and pigment production capacity of, compared with fresh yeast, where the inhibition zone reached more than 8 mm. There was also no significant difference in the number of fresh and liquid yeast at the fruit wound, both of which grew well at the wound. Fresh yeast performed remarkable control effects on blue and green mold, sour rot, and anthrax on citrus fruits, while liquid preparation presented no significant difference, compared with fresh yeast. Specifically, the formulation reduced the incidence of four citrus postharvest diseases by 25.00%-48.33%. Consequently, the preparation ofcan widely be expected to effectively retain cell viability and biocontrol efficacy. The liquid bioformulation withas the main active ingredient demonstrated an excellent control effect on postharvest citrus diseases. The finding can provide strong theoretical and practical support to the application ofin the biological control of postharvest citrus diseases.

Agricultural products; postharvest disease;; citrus; biological control

陳力維，張鴻雁，鄧麗莉，等. 桔梅奇酵母液體制劑的制備及其在柑橘果實上的應用[J]. 農(nóng)業(yè)工程學報，2021，37(18)：299-306.doi：10.11975/j.issn.1002-6819.2021.18.034 http://www.tcsae.org

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2021-05-29

2021-08-20

重慶市技術創(chuàng)新與應用發(fā)展專項重點項目（cstc2019jscx- dxwtBX0027）

陳力維，研究方向為農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程。Email：chenliwei013211@163.com

曾凱芳，博士，教授，博士生導師，研究方向為果蔬貯藏與物流保鮮。Email：zengkaifang@163.com

10.11975/j.issn.1002-6819.2021.18.034

TS255.3

A

1002-6819(2021)-18-0299-08