血清7 種自身抗體檢測對肺癌的診斷價值

王耀娟， 高 菲， 于 亮， 馬 剛， 韓育寧， 張 錦， 張淑香

（1.寧夏醫(yī)科大學，銀川 750004； 2.寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院胸外科，銀川 750004； 3.寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學科，銀川 750004）

肺癌是威脅人類健康的重大疾病，2018 年全世界約有210 萬肺癌新發(fā)病例和180 萬死亡病例[1]，肺癌病死率高的主要原因為約60%的患者被確診時已經(jīng)處于中晚期，其5 年生存率僅為5%～20%[2]，因此，早期肺癌診斷變得至關(guān)重要。目前國際上推薦使用低劑量計算機斷層掃描（low-dose computed tomography，LDCT）對高?；颊哌M行篩查。LDCT 診斷肺癌的敏感度為93.8%，可使肺癌病死率下降20.3%，但LDCT 的特異性較差，假陽性率高達94.5%，這就導致部分良性病變患者遭受了不必要的胸部手術(shù)，喪失部分肺功能[3]。另外，肺結(jié)節(jié)在隨診過程中，重復CT 掃描增加了患者射線暴露及心理、經(jīng)濟負擔。因此，迫切需要找到能輔助LDCT 鑒別肺部良、惡性腫瘤的方法。有研究[4]發(fā)現(xiàn)，在CT 發(fā)現(xiàn)肺癌前5 年就能在患者血液中檢測到腫瘤相關(guān)自身抗體（tumor associated autoantibodies，TAABs）。Ren 等[5]篩選出了中國人群的7 種自身抗體（P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE），根據(jù)其研究結(jié)果，中國食品藥品監(jiān)督管理局批準7 種自身抗體檢測試劑盒上市，但其輔助肺癌診斷效能需要進一步探究，且本地區(qū)也缺乏此類相關(guān)報道。因此，本文探討7 種自身抗體對肺癌的診斷價值，以期為肺癌的鑒別診斷提供一定參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集 2019 年 10 月至 2020 年 10 月寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院收治的肺癌患者77 例（肺癌組），均經(jīng)病理學確診；同期收治肺部良性病變患者33 例（對照組）。肺癌組男性46 例，女性31 例，年齡 31～82 歲，平均年齡（59.57±10.78）歲；其中腺癌49 例，鱗癌18 例，小細胞癌10 例；根據(jù)2017年第8 版肺癌分期標準對肺癌組患者進行TNM分期，Ⅰ/Ⅱ期 39 例，Ⅲ/Ⅳ期 38 例；所有肺癌患者均為初診患者，診斷前未接受任何抗癌治療或手術(shù)治療。對照組男性17 例，女性16 例，年齡 36～75 歲，平均年齡（55.30±9.37）歲；其中 17例炎性假瘤，6 例結(jié)核瘤，2 例機化性肺炎，7 例錯構(gòu)瘤，1 例硬化性肺泡細胞瘤。本研究經(jīng)寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院倫理委員會批準，所有研究對象均知情同意。排除標準：（1）心、肝、腎重要器官的感染、內(nèi)分泌及有關(guān)的代謝疾病者；（2）自身免疫性疾病者；（3）其他系統(tǒng)腫瘤病史和家族史者。

1.2 樣本收集與保存

所有研究對象均在接受治療前空腹采集靜脈血4 mL，放入4 ℃恒溫離心機，以3000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心10 min 后，取血清并將其分裝到1.5 mL EP 管中，儲存在-80 ℃條件下備用。

1.3 檢測方法

本研究選購由杭州凱保羅生物科技有限公司生產(chǎn)的7 種自身抗體檢測試劑盒（P53、GAGE7、PGP9.5、CAGE、MAGEA1、SOX2、GBU4-5），通過酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）法，使用美國賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)的Varioskan Flash 多功能酶標儀，讀取酶標儀450 nm 的吸光度值，根據(jù)劑量-反應曲線計算納入對象血清樣本中7 種自身抗體濃度，嚴格依照試劑盒說明書要求進行操作。

1.4 檢測結(jié)果判讀

7 種自身抗體的參考截斷值是經(jīng)過大樣本、多中心臨床試驗[5]得到的，見表1。單個自身抗體檢測的濃度值如高于其參考截斷值，則判定為陽性。聯(lián)合檢測時，如7 種自身抗體任意1 種檢測為陽性，則判定7 種自身抗體聯(lián)合檢測為陽性。

表1 7 種自身抗體的參考截斷值（U·mL-1）

1.5 統(tǒng)計學方法

運用 SPSS 24.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以頻數(shù)和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗；若計量資料服從正態(tài)分布，用均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用獨立樣本t 檢驗。7 種自身抗體濃度不服從正態(tài)分布，但多個指標間存在相關(guān)性，組間差異比較采用多變量方差檢驗。根據(jù)7 種自身抗體濃度值繪制ROC 曲線。P≤0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床特征肺癌患者自身抗體聯(lián)合檢測陽性表達情況

不同年齡、性別、吸煙史、病理類型、臨床TNM 分期、病灶大小的肺癌組患者自身抗體聯(lián)合檢測陽性率差異均無統(tǒng)計學意義（P 均>0.05），見表2。

表2 不同臨床特征肺癌患者的自身抗體聯(lián)合檢測陽性表達情況［例（%）］

2.2 兩組患者7 種自身抗體水平比較

肺癌組患者的 P53、GAGE7 和 MAGEA1 自身抗體水平均高于對照組患者（P 均<0.05），兩組患者 PGP9.5、SOX2、GBU4-5 和 CAGE 自身抗體水平差異均無統(tǒng)計學意義（P 均>0.05），見表3。

表3 肺癌組與對照組患者7 種自身抗體水平的比較（U·mL-1）

2.3 兩組患者7 種自身抗體聯(lián)合檢測陽性率比較

肺癌組患者7 種自身抗體聯(lián)合檢測的陽性率高于對照組（χ2=9.351，P=0.002），見表 4。

表4 兩組患者7 種自身抗體聯(lián)合檢測陽性率比較

2.4 7 種自身抗體單獨及聯(lián)合檢測對肺癌的診斷效能

根據(jù)7 種自身抗體濃度進一步繪制ROC 曲線，單個自身抗體及7 種自身抗體聯(lián)合檢測ROC曲線下面積（AUC）均大于0.5，7 種自身抗體聯(lián)合檢測AUC 為0.795。單個自身抗體的靈敏度均較低，低于7 種自身抗體聯(lián)合診斷的靈敏度（49.35%）。單個自身抗體的特異度均高于85.00%，PGP9.5、GAGE7、MAGEA1 和 CAGE 的特異度可達100.00%，7 種自身抗體聯(lián)合診斷的特異度為81.82%，見圖 1、表 5。

表5 7 種自身抗體對肺癌的診斷效能

圖1 7 種自身抗體單獨及聯(lián)合診斷肺癌的ROC 曲線

3 討論

多項研究[6-7]發(fā)現(xiàn)，肺癌患者血清中存在TAABs，并且與其在健康人群中的水平存在差異。2012 年英國國家醫(yī)療服務體系（NH）使用Early－CDT?-Lung（P53、NYESO-1、GAGE、GBU4-5、SOX2、HuD 和 MAGEA4）在高危人群中初步得到血清7 種自身抗體的靈敏度達81%，特異度達91%[8]。

人類蛋白組學的研究[9-10]發(fā)現(xiàn)，多種自身抗體聯(lián)合檢測能夠使診斷準確性進一步提高，且可以有效輔助CT 診斷肺癌。英國一項研究[11]發(fā)現(xiàn)，肺癌患者血清中 P53、c-myc、HER2、NYESO-1、GAGE、MUG1 和 GBU4-5 單個自身抗體的靈敏度為5%～36%，特異度為96%～100%；7種自身抗體聯(lián)合診斷的靈敏度達76%，特異度達92%。由于人類肺癌基因的異質(zhì)性，國外研究中使用的自身抗體組合在中國人群中的篩查結(jié)果并不理想。Ren 等[5]對中國人群進行了另外7 種自身抗體（P53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE）的研究，發(fā)現(xiàn)肺癌患者7 種自身抗體濃度高于肺部良性疾病及健康人群，靈敏度為61%，特異度為90%。

本文使用了與Ren、周彩存等[5]研究相同的7 種自身抗體，結(jié)果表明，P53、GAGE7 和 MAGEA1抗體濃度水平在肺癌患者中均高于肺部良性病變患者，其余抗體無差異。采用相同的7 種自身抗體，Zhang 等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，P53、SOX2、GAGE7和MAGEA1 抗體濃度水平在肺癌患者中均高于肺部良性病變的患者，其余抗體無差異。Ren 等[5]的研究中僅發(fā)現(xiàn)肺癌組患者GAGE7 抗體水平與對照組無差異，其余6 種抗體水平均高于對照組。研究結(jié)果存在較大差異的主要原因可能與納入樣本量及研究人群的異質(zhì)性有關(guān)，也可能與研究對象的免疫狀態(tài)相關(guān)，免疫狀態(tài)低下的人群，其抗體水平達不到較高水平。

本研究中，單個自身抗體診斷肺癌的靈敏度均較低，可能原因為：肺癌的發(fā)病是由多個基因、多種機制同時作用的結(jié)果，不同靶抗原參與針對不同腫瘤的免疫反應，因此僅使用單個自身抗體診斷肺癌，存在局限性。7 種自身抗體聯(lián)合診斷肺癌的靈敏度為49.35%。Du 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，7 種自身抗體聯(lián)合診斷肺癌的靈敏度為56.53%。Wang 等[13]的研究中，7 種自身抗體聯(lián)合診斷的靈敏度為36.7%。上述研究結(jié)果表明，7 種自身抗體單獨或聯(lián)合診斷肺癌的靈敏度均偏低。

本研究結(jié)果顯示，7 種自身抗體檢測肺癌的特異度和陽性預測值均較高，PGP9.5、GAGE7、MAGEA1 和CAGE 的特異度可達100.00%。當CT 發(fā)現(xiàn)肺部異常結(jié)節(jié)時，如果抗體檢測呈陽性結(jié)果，則高度懷疑肺癌，從而可及時地進行臨床干預。7 種自身抗體陽性率與肺癌患者的臨床分期、病理學類型和病灶大小無關(guān)，這與Huo 等[14]的研究結(jié)果一致，可能原因為7 種自身抗體在肺癌發(fā)生早期就有升高，且穩(wěn)定存在于肺癌發(fā)展的整個過程中。

綜上所述，7 種自身抗體聯(lián)合診斷肺癌的靈敏度較低，特異性度較高，可作為CT 診斷肺癌的輔助手段。本研究中樣本量較少，因此需要大樣本量、多中心的研究進一步確定7 種自身抗體對肺癌的診斷價值。