牛結核桿菌病的研究進展

郭志文，武帥

（1.呂梁市動物疫病預防控制中心 山西呂梁 033000；2.呂梁市飼料獸藥工作站 山西呂梁 033000）

1 病原

該病的病原為結核分支桿菌，該病原隸屬于分枝桿菌科分枝桿菌屬，為革蘭氏陽性小桿菌，抗酸染色試驗結果呈陽性。結核分支桿菌可在患病牛的組織和糞便中檢查到，常成團存在，不易被分離出來。其菌落形態(tài)呈無色透明的半球形，隨著培養(yǎng)時間的延長，可見菌落顏色變暗，呈現(xiàn)出乳頭樣外觀。結核分支桿菌對外界環(huán)境的刺激具有很強的抵抗性，正常條件下結核分支桿菌可在環(huán)境中存活1年左右，對結核分支桿菌最佳的培養(yǎng)溫度為38～40℃，63℃中可存活0.5h，結核分支桿菌對3%的甲醛消毒液敏感。

2 流行病學

盡管牛分枝桿菌可在環(huán)境中生存數(shù)月，但其主要通過感染牛產(chǎn)生的氣溶膠傳播。已有研究證實牛通過氣溶膠感染只需要不超過10個病原體，而經(jīng)口途徑感染則需要1,000萬個病原體。奶牛感染牛分枝桿菌的風險較高。這是因為在擠奶及冬季圈養(yǎng)時奶牛有較多相互密切接觸的機會。犢牛可以通過攝入被污染的牛奶發(fā)生感染，而攝入感染可能是該病傳播給豬和貓的途徑。牛分枝桿菌野生動物儲存宿主是一些國家的放牧牛發(fā)生感染的主要來源。這些野生宿主主要包括歐洲的獾、新西蘭的刷尾負鼠、非洲的岬水牛和其他反芻動物。野生或飼養(yǎng)的鹿都特別易感，并可能作為感染牛的儲存宿主。野生動物作為儲存宿主導致感染發(fā)生的相對重要性取決于若干因素，包括該動物是否是這個病原的維持宿主或偶爾感染的宿主、這種動物感染后的排菌量，以及與牛群的接觸程度等。澳大利亞野豬就是牛分枝桿菌的一個偶爾感染的宿主。如果它們不與感染的牛接觸，那么它們就不能維持這個細菌的感染。野豬經(jīng)口途徑感染，出現(xiàn)含有很少牛結核桿菌的小病灶，因而被視為牛群低風險的感染源。相比之下，獾則是牛分枝桿菌的維持宿主，病變主要發(fā)生在獾的肺部，并導致感染性氣溶膠的產(chǎn)生。此外，在獾患病晚期其與牛群的接觸有所增加，因為此時的獾在白天會表現(xiàn)出接近放牧牛群的異常行為。

3 致病機理

牛分枝桿菌的毒力涉及它在宿主巨噬細胞的生存和復制的能力。該菌特異性的毒素尚未發(fā)現(xiàn)，其毒力是許多致病因素協(xié)同作用的結果。這該種分枝桿菌通過呼吸道進入宿主體內(nèi)后，被巨噬細胞和樹突細胞吞噬。分枝桿菌被樹突細胞吞噬后被帶到附近的淋巴結。宿主對這種細菌感染的初始分反應是非特異性的，是由分枝桿菌細胞壁中的蠟質(zhì)和脂質(zhì)引發(fā)的。該菌干擾吞噬體-溶酶體融合作用，使其在巨噬細胞的吞噬體中存活下來，這可能是通過延緩吞噬體成熟，以及使溶酶體消化失敗實現(xiàn)的。死亡的巨噬細胞釋放出的細菌被周圍活的吞噬細胞所吞噬。吞噬了分枝桿菌的巨噬細胞的遷移可以引起這種感染在體內(nèi)的擴散。

4 臨床癥狀

感染的牛只有的在疾病晚期才出現(xiàn)臨床癥狀，且有廣泛病變的牛仍可能表現(xiàn)為健康狀態(tài)。隨著病情的發(fā)展，身體損耗癥狀可能會變得明顯。在肺結核晚期，動物可能最終發(fā)展為咳嗽和間歇性發(fā)熱。受感染的乳腺組織部分可能會出現(xiàn)明顯硬化，并伴有乳前淋巴結腫大。在該病早期階段，尸檢可能難以觀察到一些微小病變。這些病變主要由改變了的巨噬細胞即上皮樣細胞聚集而形成。由巨噬細胞融合形成的多核朗罕氏巨細胞也可能出現(xiàn)。在陳舊的病灶中，早期纖維性增生導致結核包樣結節(jié)的形成，其核心有一個干酪樣壞死區(qū)域（外觀與軟奶酪相似）。典型的結核性結節(jié)特征性的組織學外觀。

5 診斷程序

結核菌素試驗是標準的?；铙w檢驗程序。該檢測方法是基于結核菌素引起的遲發(fā)型超敏反應，也適用于豬和飼養(yǎng)的鹿的檢驗。牛在感染后30～50d通常能檢測到結核菌素的陽性反應。結核菌素是由分枝桿菌產(chǎn)生的，也稱為純蛋白衍生物。檢測時，進行PPD皮內(nèi)注射來檢測動物敏感性。結核菌素試驗主要有兩種方法：

1）PPD皮內(nèi)試驗，即在尾部皺褶處皮內(nèi)注射0.1mL牛PPD。72h后檢查注射部位，陽性反應的特點是出現(xiàn)硬塊或水腫隆起。

2）雙PPD比較皮內(nèi)試驗，即將0.1mL禽PPD和0.1mL牛PPD分別皮內(nèi)注射至頸部側(cè)面相距12cm的位點。使用游標卡尺分別測量結核菌素注射前和注射后72h注射部位的皮膚厚度。注射牛PPD部位的皮膚厚度超過注射禽PPD部位的皮膚厚度4mm或以上，即可認為發(fā)生了感染，這樣的牛被稱為陽性反應牛。結核菌素試驗中假陽性結果的發(fā)生可能是由于動物被不是牛分枝桿菌的分枝桿菌所致敏。在假陽性發(fā)生率較高的國家，人們更傾向于比較皮內(nèi)試驗，而不是單一皮內(nèi)試驗。

結核菌素試驗中假陰性結果也可能發(fā)生，其原因是：在牛產(chǎn)生針對結核菌素的遲發(fā)型超敏反應能力之前（在感染后30d內(nèi)）接受結核菌素測試，牛不發(fā)生此類超敏反應。有些感染牛結核分枝桿菌的牛對結核菌素不產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應，即所謂的“無反應性”，具體的機制尚不明確，這些?？赡苷幱诮Y核病進展期。注射結核菌素后可能出現(xiàn)短暫的脫敏現(xiàn)象，通常在60d內(nèi)恢復反應性。由于應激導致的免疫抑制，包括分娩后的初期或使用免疫抑制藥物，可能會導致結核菌素試驗出現(xiàn)假陰性。

6 牛分枝桿菌的分離要求

1）樣本的去污處理，以消除快速增長的污染的雜菌。磨碎的樣品用2%～4%的氫氧化鈉或5%的草酸處理30min，再用酸或堿進行中和。然后，離心棄去上清液，沉淀中含有濃縮的分枝桿菌，用于分離培養(yǎng)。

2）在無甘油、但含有0.4%丙酮酸鈉的改良羅氏培養(yǎng)基的斜面上，接種上述離心沉淀，在37℃有氧條件下培養(yǎng)8周。

3）分離株鑒定標準：生長速率和菌落形態(tài)特征，菌落涂片呈抗酸染色陽性，和細菌的生化特性。

7 加強環(huán)境管理

牛的飼養(yǎng)方式不管是采取室內(nèi)還是室外飼養(yǎng)，都要注意保持欄舍的干燥、干凈、通風、舒適，冬暖夏涼。欄舍內(nèi)的墊料應有30cm厚，最好離開地面5～10cm，墊料必須及時更換，注意做好消毒，最好天天消毒。冬季室外飼養(yǎng)的犢牛要注意防風，可用墊料草捆或飼料包裝袋做成擋風墻，有條件的牛場在犢牛出生后及時采用保溫燈，穿上棉馬甲等保暖。室內(nèi)飼養(yǎng)的犢牛既要保溫又要通風，防止室內(nèi)氨氣等污濁氣體濃度過高。夏季要注意防曬，及時搭建遮蔭網(wǎng)，增加飲水，防止中暑等。█