牛桂鋒
(山東省諸城市畜牧業(yè)發(fā)展中心 山東濰坊 262200)
奶牛乳房炎是目前危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)的最重要疾病之一,根據(jù)奶牛乳房炎的臨床表現(xiàn)可將其分為臨床型乳房炎和隱性型乳房炎,引起奶牛乳房炎的病原很多,其中最主要的病因是病原微生物感染。能夠引起奶牛乳房炎的病原微生物有140多種,其中主要包括球菌、桿菌、真菌、支原體和病毒等,根據(jù)病原微生物的來(lái)源和傳播途徑等,可將這些病原微生物分為環(huán)境性微生物和傳染性微生物兩種。除了這些病原微生物以外,環(huán)境衛(wèi)生條件差、飼料營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)失衡及粗暴養(yǎng)殖同樣也是奶牛乳房炎的重要誘因。
奶牛乳房炎的頻繁發(fā)生不僅會(huì)阻礙奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,同樣也會(huì)對(duì)消費(fèi)者的健康造成影響,如何能夠快速準(zhǔn)確的診斷奶牛乳房炎并有效的治療及預(yù)防該病一直是研究人員研究的重點(diǎn),本文從乳房炎的流行情況、不同類(lèi)型的診斷方法及常用疫苗的免疫效果及存在的問(wèn)題進(jìn)行了綜合講解,以期為后續(xù)相關(guān)制劑的研發(fā)及飼養(yǎng)人員的合理選擇提供參考和指導(dǎo)。
據(jù)報(bào)道,奶牛乳房炎在全球主要的奶牛養(yǎng)殖區(qū)都是廣泛流行的,國(guó)外地區(qū)的奶牛乳房炎平均發(fā)病率為25%~60%,美國(guó)的奶牛乳房炎發(fā)病率較高,可達(dá)50%;而在歐洲的牛奶主要產(chǎn)區(qū)如丹麥、芬蘭、瑞士、法國(guó)等,臨床型奶牛乳房炎的發(fā)病率在16%左右,在我國(guó)的重要鄰國(guó)俄羅斯,乳房炎的發(fā)病率可達(dá)38%。與國(guó)外相比,我國(guó)奶牛乳房炎的發(fā)病情況更為嚴(yán)重,發(fā)病率通常為20%~75%,而在部分地區(qū)發(fā)病率甚至超過(guò)75%。由此可見(jiàn),如何及時(shí)準(zhǔn)確的診斷奶牛乳房炎并有效治療,同時(shí)對(duì)奶牛乳房炎進(jìn)行合理的免疫防護(hù),對(duì)降低我國(guó)奶牛乳房炎的發(fā)病率,促進(jìn)我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展是十分重要的[1]。
臨床型奶牛乳房炎具有明顯的臨床癥狀,因此較容易診斷。奶牛乳房炎的準(zhǔn)確診斷主要是針對(duì)隱性型奶牛乳房炎,傳統(tǒng)的診斷方法包括病原分離鑒定、乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)、乳汁pH值檢測(cè)、酶檢測(cè)、乳汁導(dǎo)電率檢測(cè)等,雖然能夠?qū)﹄[性型乳房炎進(jìn)行檢測(cè),但存在靈敏度不高、主觀判斷較多容易造成診斷誤差、不易于進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)等問(wèn)題。因此,本文主要是介紹診斷隱性型奶牛乳房炎的新的診斷方法[2]。
隨著分子生物學(xué)的大力發(fā)展,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)被廣泛的應(yīng)用于病原微生物的檢測(cè),而病原微生物感染是導(dǎo)致奶牛乳房炎的最主要原因。因此,有大量研究人員通過(guò)設(shè)計(jì)檢測(cè)誘導(dǎo)奶牛乳房炎發(fā)病的主要病原微生物(如金黃色葡萄球菌、乳源無(wú)乳鏈球菌等)的特異性檢測(cè)引物,進(jìn)而對(duì)隱性型奶牛乳房炎進(jìn)行檢測(cè)。該方法與傳統(tǒng)的病原分離鑒定相比,其靈敏度和特異性更高,且更適用于大批量的流行病學(xué)檢測(cè),但由于奶牛乳房炎通常是由多種病原微生物混合感染引起,因此研究人員又在單重PCR檢測(cè)的基礎(chǔ)上建立了多重PCR檢測(cè)方法。
為了同時(shí)檢測(cè)能夠引起奶牛乳房炎的多種病原微生物,研究人員建立了多重PCR檢測(cè)方法,其中最常見(jiàn)的是檢測(cè)乳房鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌的四重PCR體系和檢測(cè)金黃色葡萄球菌、無(wú)乳鏈球菌和停乳鏈球菌的三重PCR檢測(cè)方法。多重PCR檢測(cè)方法克服了單重PCR僅能檢測(cè)單一病原的缺點(diǎn),但由于要同時(shí)檢測(cè)多種病原,所以需要對(duì)PCR的反應(yīng)體系和程序進(jìn)行最佳的優(yōu)化,也降低了檢測(cè)方法的靈敏度。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法是通過(guò)在傳統(tǒng)PCR檢測(cè)的基礎(chǔ)上加入了熒光染料或熒光探針,從而可以實(shí)時(shí)檢測(cè)樣品中的病原微生物含量,目前已有報(bào)道有單獨(dú)檢測(cè)金黃色葡萄球菌的熒光定量檢測(cè)方法及同時(shí)檢測(cè)金黃色葡萄球菌、乳房鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌的多種熒光定量檢測(cè)方法。熒光定量檢測(cè)方法較傳統(tǒng)的PCR檢測(cè)方法相比靈敏度更高、更適用于大規(guī)模的臨床樣品檢測(cè),同時(shí)可以對(duì)病原進(jìn)行定量檢測(cè),但由于成本高、技術(shù)復(fù)雜,很難在基層和養(yǎng)殖企業(yè)中進(jìn)行大規(guī)模推廣。
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是一種新型的體外等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)特異性核酸的檢測(cè)技術(shù),該方法通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)靶基因不同區(qū)域的引物,可在較短時(shí)間內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。且該檢測(cè)方法中可加入不同的指示劑,因此不需進(jìn)行核酸凝膠電泳便可觀察,臨床檢測(cè)上操作更為簡(jiǎn)單。目前有報(bào)道的有關(guān)于牛乳中金黃色葡萄球菌、乳鏈球菌和大腸桿菌的檢測(cè)方法。但由于該方法對(duì)引物設(shè)計(jì)要求較高,容易產(chǎn)生非特異型擴(kuò)增導(dǎo)致假陽(yáng)性,因此臨床應(yīng)用上還需進(jìn)一步改進(jìn)。
疫苗免疫一直是預(yù)防傳染性疾病的最常用方法之一,且近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的研究人員在奶牛乳房炎相關(guān)疫苗的研發(fā)方面取得了矚目的成果。目前,根據(jù)疫苗的成分可將奶牛乳房炎疫苗分為滅活苗、活苗、亞單位疫苗、載體疫苗和核酸疫苗[3]。
滅活疫苗主要是通過(guò)甲醛等滅活劑將細(xì)菌培養(yǎng)物滅活后加入適當(dāng)?shù)拿庖咦魟┲苽涞?,目前商品化的奶牛乳房炎滅活苗有主要針?duì)葡萄球菌、大腸桿菌和分枝桿菌的單價(jià)疫苗以及大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的二價(jià)疫苗。雖也有研究人員成功研發(fā)了鏈球菌奶牛乳房炎滅活疫苗,但由于該疫苗交叉免疫原性差,僅能夠抵抗同源鏈球菌的攻擊,因此該疫苗很難商品化。
弱毒或減毒疫苗主要是通過(guò)自然篩選或人工傳代致弱的方式,篩選出致病力弱或無(wú)致病能力的毒株進(jìn)而制備的疫苗,該疫苗能夠在動(dòng)物體內(nèi)增殖,因此無(wú)需加強(qiáng)免疫便可產(chǎn)生持久的保護(hù)力。目前,關(guān)于奶牛乳房炎弱毒疫苗的研究相對(duì)較少,僅有部分研究利用金黃色葡萄球菌減毒株制備了弱毒疫苗,并證明該疫苗能夠誘導(dǎo)牛奶產(chǎn)生特異性抗體,減輕奶牛乳房炎的臨床癥狀。
奶牛乳房炎亞單位疫苗指的是通過(guò)傳統(tǒng)方法分離純化或載體表達(dá)引起奶牛乳房炎的病原微生物的莢膜多糖、類(lèi)毒素、表面蛋白等物質(zhì),并混合適當(dāng)?shù)拿庖咦魟┧苽涞囊呙?。目前關(guān)于奶牛乳房炎亞單位疫苗的報(bào)道有利用金黃色葡萄球菌的莢膜多糖CP5和CP8以及無(wú)乳鏈球菌主要黏附蛋白Fb s、Lm b、Srr和Sip以及重組表達(dá)停乳鏈球菌的Gap C1蛋白及金黃色葡萄球菌的tlsdB和TRAP蛋白制備的,且動(dòng)物試驗(yàn)證明奶牛乳房炎亞單位疫苗能夠激活機(jī)體有效的免疫應(yīng)答,有很好的進(jìn)一步研發(fā)的潛在價(jià)值。
雖然到目前為止有多種檢測(cè)和診斷奶牛乳房炎的方法,但由于奶牛養(yǎng)殖戶(hù)的重視程度不高,隱性型奶牛乳房炎的發(fā)病情況被嚴(yán)重忽視,因此飼養(yǎng)人員應(yīng)合理的選擇適當(dāng)?shù)脑\斷方法,以及早診斷和發(fā)現(xiàn)隱性型奶牛乳房炎發(fā)病的病牛,及早治療降低損失。針對(duì)奶牛乳房炎的疫苗近年來(lái)也得到了大規(guī)模的發(fā)展,但目前常用的商品化疫苗仍然為傳統(tǒng)的滅活疫苗,新型疫苗的研發(fā)仍較多處于實(shí)驗(yàn)室階段,如何研發(fā)出針對(duì)臨床的高效的多價(jià)疫苗仍然是研發(fā)人員需要關(guān)注的重點(diǎn)之一。█