子宮內膜癌組織中ALDH1、ER、PR表達及臨床意義

邱 爽 劉永利 葛 艷 高立永 張 蓓

1.徐州醫(yī)科大學附屬徐州市立醫(yī)院(221000)；2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院

子宮內膜癌(EC)是一種惡性程度高的女性生殖道腫瘤，在圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性較為多見[1-2]，其發(fā)生機制目前尚未明確，相關研究表明子宮內膜癌的發(fā)生與內源性及外源性雌激素長期刺激關系密切[3-4]。多項研究表明[5]，乙醛脫氫酶1(ALDH1)作為腫瘤干細胞的標志物之一，可預測多種類型癌癥生存預后。本文就雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)及ALDH1在子宮內膜病變組織中表達特征進行分析，探究診斷子宮內膜癌價值，為臨床治療及預后提高參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本研究在徐州醫(yī)科大學附屬徐州市立醫(yī)院和徐州市中心醫(yī)院進行，收集2018年12月-2020年6月因子宮內膜疾病收治入院患者共計104例，根據(jù)常規(guī)病理診斷：正常增殖期子宮內膜18例(A組)，子宮內膜不典型增生20例(B組)，子宮內膜癌66例(C組)?；颊吣挲g(53.3±5.9)歲(31～75歲)。國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟FIGO分期為Ⅰ期41例、Ⅱ期18例、Ⅲ期7例；組織分化類型為高分化21例、中分化27例、低分化18例；浸潤深度為無子宮肌層浸潤10例、浸潤淺肌層者40例，深肌層或漿膜浸潤16例；無淋巴結轉移40例，有淋巴結轉移26例。所有患者術前血常規(guī)、血凝分析、肝腎功能、心電圖均正常。

1.2 免疫組化實驗

1.2.1試劑免疫組化抗體ER(Servibio GB11843)、PR(Servibio GB11262)、ALDH1(abcam ab134188)；兔二步法檢測試劑盒(中杉金橋)、DAB顯色試劑盒(中杉金橋)。

1.2.2方法子宮內膜組織用10%甲醛固定24h后使用石蠟包埋，以4μm切片行免疫組織化學染色。取4μm切片在65℃恒溫烤箱中烘烤過夜，放二甲苯中依次脫蠟,將脫蠟后切片在100%、90%、80%、70%酒精中進行梯度水化各2min，蒸餾水中沖洗；將切片放入檸檬酸鈉-EDTA修復液中煮沸、修復；冷卻后用磷酸緩沖液(PBS)清洗切片，把切片放入濕盒中滴加FBS封閉1h，封閉完成后清洗切片，滴加按比例稀釋的一抗，包括ALDH1、ER和PR 3個抗體，4℃孵育過夜；PBS沖洗3次后，滴加按比例稀釋的二抗，室溫放置2h，PBS沖洗3次，滴加按比例稀釋的DAB顯色試劑至切片顯色，顯微鏡下觀察后放入PBS終止顯色；蘇木素染核后用樹膠封片，光學顯微鏡下采集圖像。

1.2.3結果判定ER、PR在細胞核內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，ALDH1在細胞質內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。觀察切片，并進行染色評分，按照染色深度分為4級：無染色0分、弱染色1分，中度染色2分，強染色3分。根據(jù)染色細胞百分比：未見0分，≤25% 1分，25%～50% 2分，≥50% 3分。將染色深度和染色密度分數(shù)相加得到總分，總分≤2分為陰性，>2分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 不同子宮內膜組織中ER、PR、ALDH1表達

ALDH1在A組和B組中表達率均很低，在C組表達率較高(P<0.05)。ER、PR在A組、B組、C組中的陽性表達率逐漸下降(P<0.05)。見表1。

表1 各組內膜組織中ER、PR、 ALDH1表達陽性情況比較[例(%)]

2.2 子宮內膜癌組織中ER、PR、ALDH1表達

隨著病理分期越晚、分化程度越差、肌層浸潤越深者，子宮內膜癌組織中ER、PR表達越低，ALDH1表達越高 (P<0.05)。但ER、PR、ALDH1與患者淋巴結是否轉移、是否肥胖、是否絕經(jīng)均未見差異(P>0.05)，見表2。

表2 子宮內膜癌組織中ER、PR、ALDH1陽性表達與臨床病理特征關系(%)

2.3 子宮內膜癌中ER、PR、ALDH1相關性

Person相關分析顯示，子宮內膜癌組織中ALDH1的表達與ER(γ=-0.61)及PR(γ=-0.57)表達存在負相關， ER與PR表達存在正相關(γ=0.99)(均P<0.05)。

2.4 ER、PR、ALDH1對子宮內膜癌的診斷價值

ROC曲線分析顯示，ALDH1診斷子宮內膜癌有一定準確性，ER、PR診斷準確性較低。以ROC曲線靠左上方約登指數(shù)的最大切點作為最佳臨界值，該點診斷敏感度、特異度見表3。

表3 各指標對子宮內膜癌的診斷價值

3 討論

由于子宮內膜癌目前已經(jīng)成為嚴重影響女性健康的三大腫瘤之一，所以有越來越多的研究人員將研究集中于一些分子標志物與子宮內膜癌的發(fā)生發(fā)展及預后的關系，為子宮內膜癌的診斷、治療以及判斷預后提供新思路[6-10]。子宮內膜癌的發(fā)病研究中，目前一致認為與患者雌、孕激素密切相關[10]。在子宮內膜的周期性變化中，雌激素和孕激素的周期性變化是最主要原因。本研究，子宮內膜癌組織中ER、PR陽性率低于正常子宮內膜組織表達，且陽性表達率與肌層浸潤深度、病理分期及細胞分化程度呈負相關。與徐珂等[11]研究結論相同。有學者發(fā)現(xiàn)ER、PR在子宮內膜組織中陽性是良好預后的表現(xiàn)，其表達率與5年生存率呈正相關[12]。這些研究能夠幫助人們認識子宮內膜癌的發(fā)病機制，指導后續(xù)治療藥物選擇及預測患者結局[13]。本文行ROC曲線分析顯示，ER、PR診斷子宮內膜癌的價值一般，推測可能與本研究選用抗體、樣本數(shù)及樣本區(qū)域局限性有關。

ALDH1對多種器官的正常發(fā)育和同源性非常重要，同時在胚胎形成過程中至關重要；是肝臟中一種重要的解毒酶，也表達在腎臟以及造血原細胞中，在干細胞的正常分化中發(fā)揮關鍵作用[14]。多個學者對ALDH1蛋白的表達及位置進行研究后發(fā)現(xiàn)，其表達水平與視黃醛表達有密切聯(lián)系。視黃醛也稱維生素A醛，其合成初期 ALDH1蛋白發(fā)揮一定作用，而視黃酸在維持機體正常發(fā)育和穩(wěn)態(tài)同時抑制細胞生長，對腫瘤細胞凋亡有促進作用，所以ALDH1可能通過視黃醛參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[15]。本研究子宮內膜癌組織中ALDH1的陽性率高于正常的宮內膜組織，與周彤等[16]研究結果一致；且子宮內膜不典型增生組織中ALDH1表達低于子宮內膜癌組織。行ROC曲線分析顯示，ALDH1診斷子宮內膜癌的敏感度、特異度均尚可，提示可將ALDH1作為一種簡便、無創(chuàng)的子宮內膜癌早期診斷標志物。本研究發(fā)現(xiàn)，正常子宮內膜組織和不典型增生組織中ALDH1的陽性表達率差異不大，可能與實驗選用抗體、實驗樣本數(shù)和實驗樣本區(qū)域局限性有關。

最近研究發(fā)現(xiàn)在子宮內膜癌的病程中雌激素含量會隨著腫瘤的發(fā)展而發(fā)生變化，敲除ALDH1基因后抑制了腫瘤細胞增長[17-20]。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中ALDH1含量隨之增高，從而抑制細胞凋亡。本研究證實ER、PR與ALDH1表達呈負相關，推測在子宮內膜癌中ALDH1與ER、PR的平衡關系會對子宮內膜癌的發(fā)生發(fā)展及病程、預后等產(chǎn)生影響，但3者在凋亡通路上如何相互制衡、相互作用尚需在細胞水平上進行研究才有可能得到明確的答案。

綜上所述，子宮內膜癌組織中ALDH1的陽性率異常升高，且隨著病理分期、深淺肌層浸潤及細胞分化程度增加而升高，ALDH1有望成為一種腫瘤干細胞標志物預測子宮內膜癌預后。ALDH1和ER、PR可能成為評估子宮內膜癌早期診斷、術前病理分期、靶向治療方案制定以及預后的有效指標。