自噬的檢測方法及其在相關(guān)疾病中的研究進(jìn)展*

竇婷婷，金 玲，池宇欣，趙云利

(蚌埠醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，安徽 蚌埠 233000)

自噬是真核細(xì)胞特有的“自食”現(xiàn)象，也是細(xì)胞進(jìn)行自我保護(hù)的代謝途徑[1]，在多細(xì)胞生物遇到危險(xiǎn)時(shí)可進(jìn)行應(yīng)激與防御調(diào)控。自噬發(fā)生時(shí)，胞內(nèi)需降解的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)和部分胞質(zhì)被膜包裹形成自噬體，而后與溶酶體等結(jié)合形成自噬溶酶體并對包裹內(nèi)容物進(jìn)行降解與回收，實(shí)現(xiàn)物質(zhì)與細(xì)胞器的更新，維持胞內(nèi)物質(zhì)與能量供給的平衡[2]。自噬在維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著重要功能：在正常生理?xiàng)l件下，細(xì)胞通過較低水平的自噬持續(xù)維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)；而在細(xì)胞遇到能量供應(yīng)短缺、缺氧、雷帕霉素等因素的刺激時(shí)，啟動(dòng)自噬可以使細(xì)胞緩解代謝壓力，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[3]。適度的自噬對維持細(xì)胞物質(zhì)與能量的平衡是有益的，但過度的自我消化則會(huì)對細(xì)胞產(chǎn)生傷害，因此，自噬的調(diào)節(jié)有助于維持細(xì)胞的正常生理功能。為進(jìn)一步加深對自噬及其檢測方法的認(rèn)識(shí)，本文從自噬的基本過程、自噬的檢測方法及自噬的生物學(xué)功能等幾個(gè)方面對自噬進(jìn)行綜述。

1 自噬的基本過程

根據(jù)自噬發(fā)生時(shí)底物進(jìn)入溶酶體的途徑和特點(diǎn)，可以將自噬分為巨自噬、微自噬以及分子伴侶介導(dǎo)的自噬三種類型。其中巨自噬的特征最明顯，研究的也最為廣泛與深入。

巨自噬是細(xì)胞質(zhì)中的自噬底物被含有雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體包裹隔離，進(jìn)而將自噬底物運(yùn)送至溶酶體進(jìn)行降解的過程。巨自噬是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，包括底物的識(shí)別、自噬體的形成、自噬體與溶酶體的融合以及自噬溶酶體的降解四個(gè)不同的步驟[4],見圖1。

圖1 巨自噬的基本過程[4]

1.1底物的識(shí)別 自噬的底物可以是衰老損傷的細(xì)胞器和折疊合成錯(cuò)誤的蛋白質(zhì)，也可以是外來侵入細(xì)胞的細(xì)菌和病毒?；瘜W(xué)刺激或細(xì)胞成分的損傷與改變，如化學(xué)污染物、受損的線粒體和錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)等，都可被受體蛋白識(shí)別成為自噬底物。

1.2自噬體的形成 自噬體初始形成需要Ⅲ類磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)復(fù)合物來刺激吞噬膜的形成，且PI3K復(fù)合物能夠與自噬相關(guān)蛋白(autophagy-related,Atg)聯(lián)合將兩個(gè)相關(guān)聯(lián)的泛素樣結(jié)合系統(tǒng)Atg12-Atg5-Atg16和Atg8-PE(磷脂酰乙醇胺，phosphatidyl ethanolamine，PE)結(jié)合到吞噬泡中，促使吞噬泡膜進(jìn)一步延伸、彎曲至吞噬泡能夠?qū)⒆允傻孜锿耆⑿纬汕驙畹淖允尚◇w[5]。

1.3自噬體與溶酶體的融合 自噬體形成后，在微管蛋白的作用下，逐漸向溶酶體靠近，接著自噬體中的外層膜與溶酶體膜相融合，形成自噬溶酶體。其中，有些自噬體會(huì)先與核內(nèi)體結(jié)合形成自噬內(nèi)涵體[6]，然后再與溶酶體結(jié)合。這一融合過程依賴于溶酶體膜蛋白(Lysosomal-associated membrane protein 2,LAMP-2)和N-乙基馬來酰亞胺敏感因子附著蛋白受體(SolubleN-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor,SNARE)蛋白等多種因子的聯(lián)合作用[7]。

1.4自噬溶酶體的降解 大部分的Atg蛋白會(huì)與融合體分離，自噬溶酶體及自噬內(nèi)涵體內(nèi)的膜結(jié)構(gòu)及所包裹的底物在溶酶體腔的酸性環(huán)境下經(jīng)蛋白酶A、B及脂肪酶Atg15等作用降解釋放進(jìn)入再循環(huán)系統(tǒng)[8]。

2 自噬的檢測方法

2.1形態(tài)學(xué)檢測—透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,TEM)檢測 透射電鏡下觀察吞噬泡是目前最為直接和經(jīng)典的自噬檢測方法，通過TEM可以觀察處于不同階段的自噬體以及計(jì)數(shù)其數(shù)量從而判斷自噬的發(fā)生水平[9]。在透射電鏡下可以觀察到新月狀或杯狀的吞噬泡、具有雙層或多層膜包裹的液泡狀自噬小體，但具體觀察受實(shí)驗(yàn)者對于鏡下自噬體結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確判斷、觀察樣品的制備過程等的影響，因此會(huì)存在一些主觀上的偏差，通常與其他檢測方法結(jié)合使用。

2.2自噬相關(guān)蛋白-微管相關(guān)蛋白輕鏈3表達(dá)水平的檢測 微管相關(guān)蛋白輕鏈3(microtubule-associated protein light chain，LC3)是自噬體雙層膜上的標(biāo)志性蛋白[10]，其中水溶性的LC3-Ⅰ在經(jīng)過泛素化作用后能與PE結(jié)合轉(zhuǎn)化為脂溶性的LC3-Ⅱ。LC3-Ⅱ特異性定位于自噬體內(nèi)膜和自噬溶酶體膜上，在自噬體與溶酶體結(jié)合后LC3-Ⅱ才逐漸分離降解。因此，可使用LC3-Ⅱ的表達(dá)量或者LC3-Ⅱ與LC3-Ⅰ的比值來檢測自噬水平。

2.2.1綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)-LC3單熒光質(zhì)粒檢測法 正常生理狀態(tài)下，GFP-LC3結(jié)合蛋白分布于細(xì)胞質(zhì)中，自噬發(fā)生時(shí)，GFP-LC3結(jié)合蛋白移位到自噬體內(nèi)膜上表達(dá)出綠色熒光斑點(diǎn)[11]，一個(gè)自噬體就表現(xiàn)為一個(gè)斑點(diǎn)，因而通過GFP-LC3單熒光質(zhì)粒計(jì)數(shù)就可以評估自噬程度的高低。

2.2.2紅色熒光蛋白(red fluorescent protein,RFP)-GFP-LC3串聯(lián)熒光蛋白標(biāo)簽法 由于GFP熒光蛋白對酸敏感，在自噬小體與溶酶體結(jié)合后GFP熒光會(huì)淬滅從而給檢測帶來難度[12]，而RFP相對穩(wěn)定，因此可以采用RFP-GFP-LC3串聯(lián)熒光蛋白檢測自噬，即帶有雙標(biāo)熒光信號的RFP-GFP-LC3-Ⅱ串聯(lián)蛋白成功在細(xì)胞表達(dá)時(shí)，通過觀察不同顏色的熒光信號強(qiáng)度的變化就可以判斷出該細(xì)胞的自噬水平。

2.2.3GFP-LC3-RFP-LC3△G檢測法 在Atg4的作用下，GFP-LC3-RFP-LC3△G串聯(lián)熒光標(biāo)簽蛋白可被分割成GFP-LC3和RFP-LC3△G兩個(gè)部分。其中GFP-LC3可在自噬過程中降解，而RFP-LC3△G不能與PE結(jié)合，故不作為自噬的降解底物[13]。因此，可通過測量GFP/RFP信號的比值可以反映自噬活性，這一方法在酵母的自噬檢測中應(yīng)用較多。

2.2.4Western blot檢測法 Western blot檢測LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平是目前最為廣泛的檢測自噬流的方法。通常認(rèn)為在Western blot實(shí)驗(yàn)中檢測到LC3-Ⅱ的增多是LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化增多，代表了自噬流的活化；LC3-Ⅱ減少則代表自噬受到抑制[14]。

2.3自噬降解底物檢測

2.3.1p62結(jié)合LC3-Ⅱ蛋白翻轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)法 p62是選擇性自噬最重要的受體蛋白，能夠連接待降解的泛素化底物與LC3-Ⅱ蛋白[15]。p62結(jié)合泛素化底物蛋白進(jìn)入自噬小體，并與溶酶體結(jié)合形成自噬溶酶體，而后在溶酶體腔內(nèi)的酸性水解酶作用下降解。當(dāng)自噬流活化時(shí)，LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化，LC3-Ⅱ增多，p62水平下降，但自噬流受到抑制時(shí)p62含量上升，因此監(jiān)測p62蛋白的水平就可以反映出自噬水平。

2.3.2長壽命蛋白(longevity protein Sir2)檢測法 長壽命蛋白是可以被自噬降解的一類蛋白。真核細(xì)胞生物既可以通過蛋白酶體系統(tǒng)對短壽命蛋白進(jìn)行降解，也可通過自噬對長壽命蛋白和受損細(xì)胞器進(jìn)行降解。對長壽蛋白進(jìn)行同位素標(biāo)記，通過自噬降解蛋白產(chǎn)物的三氯乙酸-放射性同位素定量，進(jìn)而反映自噬水平[16]。

2.4自噬誘導(dǎo)劑的應(yīng)用

2.4.1雷帕霉素 哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)(mammalian target of rapamycin，mTOR)是自噬的重要調(diào)控因子，可通過抑制自噬復(fù)合物ULK-ATG13-FIP200形成，從而抑制自噬過程的激活[17]。mTOR與不同蛋白結(jié)合可形成mTORC1及mTORC2兩種復(fù)合物。另外，雷帕霉素還可以劑量依賴的方式激活Beclin-1基因表達(dá)，來增加自噬泡的形成。

2.4.23-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA) 研究證明3-MA選擇性的作用于3型PI3K，主要是通過抑制Beclin-1-Ptdlns 3KC3復(fù)合物的形成來抑制細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可溶性LC3-Ⅰ向可以與自噬體膜結(jié)合的LC3-Ⅱ形式轉(zhuǎn)化，從而抑制自噬體的形成來完成對自噬的阻斷[18]。

2.4.3二甲雙胍 二甲雙胍可通過不同的作用機(jī)制影響自噬的進(jìn)展，主要作用與抑制mTORC1有關(guān)。mTORC1參與腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated kinase,AMPK)的活化，AMPK通過激活Vps34復(fù)合物并磷酸化Beclin-1來誘導(dǎo)自噬[19]。當(dāng)細(xì)胞能量水平受限時(shí)，AMPK可直接磷酸化酵母ATG1的同源物(unc-51 like autophagy activating kinase 1,ULK1)，再磷酸化Beclin-1抑制mTORC1復(fù)合物來促進(jìn)自噬。

3 自噬在相關(guān)疾病中的研究進(jìn)展

細(xì)胞自噬的功能主要有兩個(gè)方面：一是細(xì)胞的自我存活機(jī)制，當(dāng)細(xì)胞處于脅迫狀態(tài)下時(shí)，可通過自噬將胞質(zhì)中部分底物進(jìn)行降解形成小分子物質(zhì)如氨基酸，核苷酸等，為細(xì)胞的存活和發(fā)展提供物質(zhì)基礎(chǔ)；另一方面，自噬可以清除細(xì)胞內(nèi)折疊錯(cuò)誤或變性的蛋白質(zhì)，衰老損傷的細(xì)胞器等，維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)[20]。

3.1細(xì)胞自噬與腫瘤的發(fā)生

3.1.1自噬與腫瘤的發(fā)生 自噬在腫瘤的發(fā)生中起到了促進(jìn)和抑制的雙重作用。在腫瘤細(xì)胞生長前期，自噬通過降解腫瘤細(xì)胞內(nèi)的受損細(xì)胞器或其他物質(zhì)，可為腫瘤細(xì)胞的持續(xù)分裂增殖提供大量的營養(yǎng)物質(zhì)，減少腫瘤細(xì)胞的凋亡和壞死而使其持續(xù)存在。研究表明，經(jīng)c-myc誘導(dǎo)的鼠淋巴瘤中，使用自噬抑制劑(如氯喹)抑制細(xì)胞自噬活性時(shí)，由p53或DNA烷化劑誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞死亡的有效性將增強(qiáng)，繼而使腫瘤細(xì)胞消亡[21]。另一方面自噬可以抑制細(xì)胞癌變，如Fu等[22]發(fā)現(xiàn)持續(xù)的應(yīng)激或自噬過度活化時(shí)，Beclin-1蛋白通過增強(qiáng)細(xì)胞自噬活性來抑制腫瘤的發(fā)生：Beclin-1基因敲除的小鼠，自噬活性降低，發(fā)生肺癌/肝癌或淋巴瘤的概率增加。依維莫司是一種雷帕霉素類似物，它可以通過阻止mTORC1的磷酸化來抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路。

3.1.2自噬與腫瘤的發(fā)展 自噬既能抑制早期腫瘤的發(fā)生又能促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，其功能的發(fā)揮不僅取決于遺傳因素，還與腫瘤的發(fā)展階段以及腫瘤的類型等因素有關(guān)。正常情況下，自噬會(huì)對代謝應(yīng)激損傷以及基因組的異常突變等起到一定的限制作用，從而抑制腫瘤的發(fā)生。研究表明，自噬相關(guān)ATG蛋白(如Beclin1)功能的喪失會(huì)增加腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[23]。自噬作用的轉(zhuǎn)變發(fā)生在原發(fā)性腫瘤形成后：自噬在應(yīng)對各種不良應(yīng)激時(shí)會(huì)為腫瘤細(xì)胞提供存活和快速增殖提供物質(zhì)和能量支持，從而促進(jìn)部分腫瘤的晚期增長。Liang等[24]發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌的上皮組織中Beclin1呈現(xiàn)低表達(dá)，而在正常細(xì)胞中表達(dá)明顯升高；人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Beclin1后，其成瘤性明顯降低，并且提高了腫瘤細(xì)胞的自噬程度。在癌細(xì)胞系中敲低或者刪除必需自噬基因的表達(dá)可以降低其存活率和腫瘤發(fā)生，從而確立自噬在促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的功能重要性。

3.2細(xì)胞自噬與神經(jīng)退行性疾病 研究表明，自噬異常與神經(jīng)退行性疾病之間密切相關(guān)。大多數(shù)神經(jīng)退行性疾病是以進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙為特征，主要是由于神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生了蛋白的錯(cuò)誤折疊或聚集而導(dǎo)致神經(jīng)元進(jìn)行性地?fù)p傷/變性和死亡，繼而影響機(jī)體運(yùn)動(dòng)功能的異常及學(xué)習(xí)功能的障礙。神經(jīng)退行性疾病的產(chǎn)生常伴有細(xì)胞自噬水平的下降，而激活的自噬可以通過清除神經(jīng)元細(xì)胞中的異常蛋白從而阻礙與減緩神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生[25]。但過度激活的自噬通路又會(huì)導(dǎo)致胞內(nèi)聚集大量的自噬體和自噬溶酶體，使神經(jīng)元發(fā)生退化、變性甚至死亡。這類疾病主要包括帕金森病和阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)。

淀粉樣蛋白-β(amyloid-β,Aβ)是由淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)經(jīng)過β、γ分泌酶兩次剪切而形成[26]，其所致的神經(jīng)炎性斑是AD的主要病理學(xué)改變。一些研究表明上調(diào)自噬作用會(huì)降低Aβ的表達(dá)水平，但在自噬體中也可以產(chǎn)生Aβ。研究表明AD神經(jīng)元中堆積的自噬小體中含有早老蛋白-1(Presenilin-1,PS1)和APP，而其中的PS1是APP剪切形成Aβ所需的γ-分泌酶復(fù)合物的組成成分。敲除APP轉(zhuǎn)基因小鼠中的ATG7基因，出現(xiàn)Aβ分泌的減少，這一現(xiàn)象與自噬僅僅降解了Aβ相違背[27]。因此，自噬在AD中的作用一直存在爭議，這可能是因?yàn)樽允稍诩膊〉牟煌A段有著不同的作用，或者與自噬對淀粉樣蛋白生命周期不同步驟的影響有關(guān)。

3.3細(xì)胞自噬與免疫應(yīng)答 自噬可維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定，還可以保護(hù)細(xì)胞免受外來病原體的入侵。自噬最初被認(rèn)為是一種原始防御系統(tǒng)，可抵御入侵的微生物，同時(shí)也在多種先天和適應(yīng)性免疫途徑中發(fā)揮作用。自噬可以結(jié)合入侵到細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌和病毒形成自噬小體或者自噬內(nèi)涵體，并將其轉(zhuǎn)送至溶酶體進(jìn)行降解。此外，自噬還可以將外來病原體的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)至胞內(nèi)相關(guān)感受器上引發(fā)機(jī)體自身的免疫反應(yīng)。涉及自噬的主要免疫功能包括微生物降解/炎癥控制/淋巴細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和免疫介質(zhì)的分泌。自噬在先天免疫中可通過抑制炎癥體的激活來抑制炎癥，通過清除蛋白質(zhì)聚集體、降解異常的線粒體和直接消除炎癥體成分[28]。

3.3.1對病原體的反應(yīng) GROL[29]等的研究表明自噬可清除病原體，自噬能夠定向的將待降解的病原體運(yùn)送到溶酶體，如經(jīng)CD400刺激作用可使自噬蛋白Beclin1的表達(dá)量增加，并且能夠增強(qiáng)LC3的脂化作用。另一方面，有研究表明，病原體也會(huì)逃避自噬：小鼠在感染結(jié)核分枝桿菌后，自噬體中強(qiáng)毒株菌株可通過晚期核內(nèi)標(biāo)志物RAB7進(jìn)行補(bǔ)充，形成中間區(qū)的兩親體，而沒有被結(jié)核桿菌感染的細(xì)胞中的自噬體將會(huì)繼續(xù)成熟為自溶體。此外，病原體還可以利用自噬來增強(qiáng)自身復(fù)制：無包膜的病毒產(chǎn)生自噬時(shí)，通過激活A(yù)MPK依賴型信號傳導(dǎo)，干擾自噬膜的運(yùn)輸途徑，可轉(zhuǎn)運(yùn)到病毒復(fù)制位點(diǎn)。

3.3.2免疫應(yīng)答過程中的自噬調(diào)控 固有免疫與自噬研究表明，自噬可參與TLR、NLR、RLR信號通路等先天性免疫應(yīng)答。RIG-1樣受體(RLRs)可識(shí)別胞質(zhì)中的病毒dsRNA，通過NF-κB途徑，誘導(dǎo)產(chǎn)生大量干擾素及炎性細(xì)胞因子。Atg5和Atg12復(fù)合體可與RLR結(jié)合，從而抑制經(jīng)該通路活化抗病毒時(shí)干擾素的產(chǎn)生[30]；當(dāng)復(fù)合物所必需的Atg7缺失時(shí)也會(huì)促進(jìn)通路中干擾素的表達(dá)。適應(yīng)性免疫與自噬,細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白在與B細(xì)胞和T細(xì)胞的許多生理功能方面發(fā)揮重要作用。部分自噬相關(guān)蛋白，如Beclin1和Atg3，對T細(xì)胞的存活、發(fā)展及穩(wěn)態(tài)起到重要作用。自噬能夠維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體的穩(wěn)態(tài)，并能控制ROS的含量及功能，這都會(huì)直接影響T細(xì)胞的生存[31]。T細(xì)胞的活化選擇性的誘導(dǎo)自噬降解細(xì)胞中折疊錯(cuò)誤的蛋白質(zhì)及功能紊亂的細(xì)胞器等，為T細(xì)胞的活化提供了能量基礎(chǔ)。研究表明，Atg7敲除的Th細(xì)胞，經(jīng)活化后不再分泌IL-2且增值能力大幅降低，這可能與自噬缺陷所導(dǎo)致的能量代謝缺陷有關(guān)。

3.4細(xì)胞自噬與細(xì)胞的分化和衰老 利用酵母菌/線蟲和小鼠等進(jìn)行的遺傳研究表明，在限制熱量/胰島功能喪失和其他保守的長壽模式中，ATG基因是延長壽命所必需的[32]。系統(tǒng)性自噬誘導(dǎo)對小鼠具有抗衰老作用，自噬能力增強(qiáng)的基因工程小鼠壽命延長且改善了健康狀況，例如胰島素敏感性增加以及與年齡相關(guān)的自發(fā)性腫瘤發(fā)生率的降低。自噬可以通過改善細(xì)胞器質(zhì)量控制體內(nèi)平衡/增強(qiáng)胰島素敏感性和促進(jìn)基因組穩(wěn)定性來防止衰老。ATG基因可能具有促進(jìn)壽命的自噬獨(dú)立效應(yīng)，例如，它們在分泌和胞吐中的作用可能有助于組織間效應(yīng)。

在線蟲/小鼠和哺乳動(dòng)物的一系列組織中，自噬基因表達(dá)和溶酶體功能會(huì)隨著年齡的增長而下降，導(dǎo)致自噬能力的年齡相關(guān)性下降[33]。這種與年齡相關(guān)的衰退可能有助于老年相關(guān)疾病的發(fā)展，如神經(jīng)退行性疾病和癌癥。自噬作用會(huì)隨著細(xì)胞的老化而減弱，同時(shí)，下降的自噬也會(huì)進(jìn)一步加速細(xì)胞的衰老。在秀麗線蟲的研究中發(fā)現(xiàn)，自噬相關(guān)基因Atg1和Atg6/Beclin1沉默的秀麗線蟲壽命顯著縮短，表明自噬的降低會(huì)促進(jìn)衰老的進(jìn)程。

3.5自噬與環(huán)境應(yīng)激 有實(shí)驗(yàn)研究表明，一些環(huán)境化學(xué)物質(zhì)，如重金屬和顆粒物等，會(huì)對自噬過程起干擾作用[34]。細(xì)胞自噬在某些情況下能幫助細(xì)胞抵抗不良的環(huán)境應(yīng)激，但不同的環(huán)境化學(xué)物質(zhì)對自噬途徑產(chǎn)生不同的影響，可能取決于其暴露的劑量、時(shí)間及作用的細(xì)胞類型等。如機(jī)體受到毒金屬鎘的刺激時(shí)，參與細(xì)胞能量生成途徑的蛋白質(zhì)會(huì)遭到破壞并引發(fā)活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成，而ROS的增加和mTOR系統(tǒng)的抑制會(huì)激活自噬。此外，鎘暴露還可降低Atg5和LC3的表達(dá)，長期暴露還可干擾自噬體的融合[35]。

4 展望

自噬作用的意義是多方面的，它與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死一樣，都是十分重要的生物學(xué)現(xiàn)象，參與細(xì)胞生物的生長、發(fā)育等多個(gè)過程，與人類多種疾病的發(fā)生發(fā)展存在著密切的關(guān)系。深入對自噬相關(guān)過程及機(jī)制的研究不僅會(huì)使我們對自噬這一現(xiàn)象有更深的認(rèn)識(shí)，也將會(huì)為我們認(rèn)識(shí)自噬相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展提供依據(jù)。