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    哪些情況下需要做艾滋病耐藥檢測

    2021-11-22 18:19:02
    家庭醫(yī)學(xué)·下半月 2021年10期
    關(guān)鍵詞:毒株抗病毒艾滋病

    HIV耐藥是導(dǎo)致艾滋病抗病毒治療失敗的重要原因之一。在2020版《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》繼續(xù)包含艾滋病耐藥檢測的內(nèi)容,關(guān)于艾滋病耐藥檢測我們要了解的哪些內(nèi)容呢?

    什么是艾滋病耐藥

    也稱艾滋病病毒(HIV)耐藥,是指由HIV遺傳變異引起的、對抗病毒藥物抑制作用敏感性降低或不敏感的現(xiàn)象。其原因有以下兩點。

    (1)直接感染。 當(dāng)感染的毒株為HIV耐藥毒株時,即發(fā)生了原發(fā)性耐藥,也稱傳播性耐藥。

    (2)藥物選擇, HIV是一種復(fù)制速度快且極易變異的病毒,在沒有抗病毒藥物時,HIV耐藥突變株會隨機(jī)出現(xiàn),但沒有復(fù)制優(yōu)勢,不會在體內(nèi)積累;在抗病毒治療時,當(dāng)藥物濃度不足時,HIV復(fù)制不能被完全抑制,HIV耐藥突變株的復(fù)制優(yōu)勢會顯現(xiàn)出來,繼而耐藥突變株逐漸積累增多,從而產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥,也稱獲得性耐藥。

    艾滋病耐藥如何檢測

    (1)基因型檢測。通過測序或基因芯片雜交等方法,檢測HIV基因組中是否有耐藥相關(guān)突變?;蛐蜋z測通常使用測序法,其檢測流程以HIV的基因組RNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增目的基因片段,測序獲得HIV基因序列,與野生型序列進(jìn)行比對,判斷是否有耐藥相關(guān)基因突變,再通過耐藥數(shù)據(jù)庫的算法關(guān)聯(lián)耐藥程度。樣本類型可為血漿和干血斑。測序方法通常采用Sanger測序法,隨著測序技術(shù)的發(fā)展,也逐漸開始使用深度測序法。

    (2)表型檢測。又稱體外藥敏實驗,以50%抑制濃度(IC50)來表示,將待測毒株與野生型毒株的IC50比較,通過倍數(shù)改變來評估耐藥程度。待測病毒可為直接從感染者體內(nèi)PBMC中分離培養(yǎng)的病毒,也可為含感染者HIV基因的重組病毒。

    一般來說,基因型檢測的操作更簡單,而且檢測周期短,所以在臨床上使用得更多。但表型檢測針對復(fù)雜突變和新型藥物的耐藥檢測更有優(yōu)勢。

    基因型耐藥檢測結(jié)果如何看

    (1)耐藥突變的表示方法。耐藥突變是HIV基因核苷酸序列的變化,采用氨基酸的變化來表示。野毒株的氨基酸+氨基酸的位置+突變后的氨基酸,如K103N,是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的第103位氨基酸從賴氨酸(K)突變?yōu)樘於0罚∟)。

    (2)耐藥解釋系統(tǒng)。指具有耐藥程度算法的數(shù)據(jù)庫,通過算法可將耐藥突變結(jié)果轉(zhuǎn)換為耐藥程度。例如,在應(yīng)用較廣泛的Stanford HIVdb耐藥解釋系統(tǒng)中,K103N突變的耐藥程度為對奈韋拉平(NVP)和依非韋倫(EFV)高度耐藥。

    HIV耐藥檢測的注意事項

    (1)檢測時機(jī)。由于HIV極易突變,當(dāng)耐藥患者停藥或中斷治療時,體內(nèi)沒有抗病毒藥物時,野生株的復(fù)制優(yōu)勢顯現(xiàn)并逐漸積累,最后將檢測不出耐藥。因此耐藥檢測的最佳時機(jī)為患者正在抗病毒治療時,或中斷治療一個月內(nèi)。

    (2)警惕樣本間交叉污染。檢測過程中需要設(shè)置空白和陰性對照,并通過序列進(jìn)化樹分析,排除交叉污染。

    (3)未檢出耐藥突變時,不排除比例較低的耐藥毒株存在。這是因為當(dāng)耐藥毒株在個體內(nèi)病毒準(zhǔn)種中的比例低于10%~20%時,利用Sanger測序法通常檢測不到其存在。

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