植物激素在大葉落地生根胎生苗無(wú)性繁殖過(guò)程中的作用

劉 華，鐘天秀

(1.青海省草原總站，青海 西寧 810008；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院草業(yè)科學(xué)系 廣東省草業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642)

落地生根(kalanchoedaigremontiana)，原產(chǎn)馬達(dá)加斯加，在我國(guó)主要分布在福建、臺(tái)灣、廣東、廣西、云南等地，喜溫暖潮濕的氣候，宜種植在排水良好的肥沃砂質(zhì)土壤上。落地生根在我國(guó)一直作為一種常見(jiàn)的中草藥，用于治療燙傷、急性中耳炎、熱性胃痛等。落地生根葉片寬大肥厚，在葉片周圍形成一圈類似蝴蝶的胎生苗，所以它也作為一種常見(jiàn)的園藝植物應(yīng)用在生活中。落地生根的胎生苗不僅具有園藝觀賞的價(jià)值，而且還是研究體細(xì)胞胚和器官繁殖的理想模型(H. et al. 2009)。我國(guó)目前對(duì)胎生苗的研究大部分集中對(duì)其形態(tài)解剖學(xué)進(jìn)行研究(尹秀玲等. 2005；袁強(qiáng) 等. 2006 )，對(duì)胎生苗產(chǎn)生的原因及影響因素的研究較少。國(guó)外對(duì)胎生苗產(chǎn)生的研究也存在爭(zhēng)議，Heide(Heide 1965)認(rèn)為生長(zhǎng)素強(qiáng)烈地抑制了落地生根葉片上胎生苗的產(chǎn)生。而其他實(shí)驗(yàn)卻認(rèn)為生長(zhǎng)素的抑制作用很弱或者幾乎不產(chǎn)生抑制作用(Karpoff 1982；Yazgan and Vardar 1977)。最近，Kulka(Kulka 2005)重新試驗(yàn)了各種植物激素對(duì)白姬之舞(Kalanchoemarnierianum)產(chǎn)生胎生苗的作用，認(rèn)為細(xì)胞分裂素是為維持胎生苗原基休眠的關(guān)鍵激素。白姬之舞是屬于脅迫誘導(dǎo)型產(chǎn)生胎生苗的物種之一，而大葉落地生根屬于半自發(fā)產(chǎn)生胎生苗的類型。目前還沒(méi)有研究探討過(guò)植物激素對(duì)大葉落地生根胎生苗的作用。

所以，本文以大葉落地生根為植物材料，對(duì)影響胎生苗產(chǎn)生的激素進(jìn)行了深入分析，探討激素對(duì)胎生苗產(chǎn)生過(guò)程所扮演的角色，為進(jìn)一步研究胎生苗提供理論依據(jù)和實(shí)踐支持。

1 材料和方法

1.1 植物材料的準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)中所用的植物材料均是由同一株大葉落地生根繁殖而成，將大葉落地生根葉片上長(zhǎng)出的胎生苗播種在裝有草炭、蛭石和沙(按4∶2∶1混合)的育苗盤(pán)中于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為14 h光照，10 h黑暗，光照度2 000 Lx。待胎生苗長(zhǎng)到約5 cm時(shí)，取材待用。另將一部分長(zhǎng)到約5 cm的落地生根幼苗，進(jìn)行干旱處理，獲得胎生苗。

1.2 植物激素的配置

2，4-D、6-BA、生長(zhǎng)素抑制劑TIBA(2，3，5-triiodobenzoic acid)、細(xì)胞分裂素抑制劑PR (purine riboside)、乙醇、DMSO(二甲基亞砜)等試劑均購(gòu)于科百奧公司。2，4-D溶于乙醇，配制為2 mg/mL的貯存液，放置于-20 ℃冰箱中待用。6-BA用DMSO溶解，配制為2 mg/mL的貯存液，放置于-20 ℃冰箱中待用。TIBA 在乙醇中溶解后，配制為10 μm/mL 的貯存液，放置于-20 ℃冰箱中待用。PR 溶于水后，配置為100 μm/mL的貯存液，放置于-20 ℃冰箱中待用。

1.3 實(shí)驗(yàn)處理

對(duì)大葉落地生根葉片、胎生苗進(jìn)行表面消毒，依次放入70%的酒精中30 S，2%的次氯酸鈉中10 min，并用無(wú)菌水清洗6次。葉片消毒完成之后，取其中一部分葉片切割成約為0.5 cm×0.5 cm的正方形小塊。將3種植物外植體材料(完整葉片、切割葉片、胎生苗)放入培養(yǎng)板中，培養(yǎng)板中含MS培養(yǎng)基(Murashige and Skoog，1962)、8 g/L的瓊脂、3 g/L的蔗糖及2 mg/L的2，4-D和6-BA或10 μm/L TIBA 以及250 μm/L PR。將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)條件同上。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)采用隨機(jī)設(shè)計(jì)，記錄不同處理下的胎生苗發(fā)生時(shí)間和發(fā)生數(shù)量，以及胎生苗的葉幅寬的變化情況。利用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05代表差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同類型外植體在不同處理情況下誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗的表型差異

圖1 不同類型大葉落地生根外植體在不同處理情況下誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗的表型

A)完整葉片在(1)MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型；(2)MS培養(yǎng)基附加2，4-D (2 mg/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型；(3)MS培養(yǎng)基附加 6-BA (2 mg/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型；(4)MS 培養(yǎng)基同時(shí)附加 2，4-D (2 mg/L) 和 6-BA (2 mg/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (5) MS 培養(yǎng)基附加 TIBA(10 μm/L) 誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (6)MS培養(yǎng)基附加 PR(10 μm/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (7)MS培養(yǎng)基同時(shí)附加 2，4-D 和 PR 誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (8) MS培養(yǎng)基同時(shí)附加 6-BA 和 TIBA 誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型。B)切割葉片在(1)MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型；(2)MS培養(yǎng)基附加2，4-D(2 mg/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型；(3)MS培養(yǎng)基附加 6-BA(2 mg/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型；(4)MS 培養(yǎng)基同時(shí)附加 2，4-D(2 mg/L) 和 6-BA(2 mg/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (5) MS 培養(yǎng)基附加 TIBA(10 μm/L) 誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (6)MS培養(yǎng)基附加 PR(10 μm/L)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (7)MS培養(yǎng)基同時(shí)附加 2，4-D 和 PR 誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型； (8) MS培養(yǎng)基同時(shí)附加 6-BA 和 TIBA 誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型。

通常情況下，胎生苗的發(fā)生部位是葉片邊緣的缺刻處，從葉片頂端向葉柄基部逐漸發(fā)生。生長(zhǎng)素(2，4-D)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗類似于愈傷組織，葉片發(fā)育不完全，許多葉片呈一個(gè)圓形，葉柄基部膨大，呈白色，出現(xiàn)類似愈傷組織白色透明的組織，僅有少量的能分化出根，大部分分化出的胎生苗就面臨著死亡。細(xì)胞分裂素(6-BA)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗，葉片與在對(duì)照中一樣，發(fā)育完整。同時(shí)添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗與只添加生長(zhǎng)素中的胎生苗生長(zhǎng)情況類似，胎生苗下部膨大，而且葉片發(fā)育不完整，這說(shuō)明在控制胎生苗表型上，細(xì)胞分裂素(6-BA)對(duì)生長(zhǎng)素(2，4-D)的拮抗作用不明顯。使用生長(zhǎng)素抑制劑(TIBA)對(duì)完整葉片上誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型沒(méi)有影響，但是使在切割葉片誘導(dǎo)的胎生苗表型出現(xiàn)葉片發(fā)育不完整和不對(duì)稱的情況，這說(shuō)明生長(zhǎng)素抑制劑在切割葉片中制約相當(dāng)一部分生長(zhǎng)素的作用。細(xì)胞分裂素抑制劑(PR)對(duì)完整葉片上誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗表型沒(méi)有影響，但是在切割葉片中，施用細(xì)胞分裂素抑制劑(PR)完全抑制了胎生苗的產(chǎn)生。同時(shí)使用生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素抑制劑，完整葉片上仍然能誘導(dǎo)胎生苗產(chǎn)生，而且不像單獨(dú)施用生長(zhǎng)素的胎生苗，這些胎生苗的發(fā)育情況較為完整。但是在切割葉片中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)胎生苗的產(chǎn)生。同時(shí)施用細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素抑制劑(TIBA)，在完整葉片和切割葉片上都能誘導(dǎo)產(chǎn)生發(fā)育完全的胎生苗。另外，我們把相同處理的落地生根放在黑暗情況下，發(fā)現(xiàn)沒(méi)有光照這個(gè)條件，所有外植體都死亡，不能誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗 (照片沒(méi)有展示)。由于不定芽產(chǎn)生比較一致，不定根產(chǎn)生的時(shí)間比較復(fù)雜，不定根不一定從時(shí)間最久的不定芽上最先發(fā)生，有時(shí)在時(shí)間短的不定芽上反而先長(zhǎng)出不定根。我們的研究集中在對(duì)不定芽發(fā)育影響的探討上，激素對(duì)胎生苗不定根產(chǎn)生及發(fā)育的影響將會(huì)在以后的研究中進(jìn)行敘述。

2.2 以完整葉片作為外植體在不同處理情況下誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗的時(shí)間和數(shù)量差異

圖2 以大葉落地生根完整葉片作為外植體在不同處理情況下誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗的時(shí)間和數(shù)量差異

A)不同處理?xiàng)l件下，以大葉落地生根完整葉片為外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗的時(shí)間差異。B)不同處理?xiàng)l件下，以大葉落地生根完整葉片為外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗的數(shù)量差異。

6-BA和2，4-D都對(duì)胎生苗的產(chǎn)生有抑制作用。其中，使用2，4-D后，胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間推遲2.8 h；2，4-D對(duì)胎生苗產(chǎn)生的抑制作用不太明顯，使用TIBA后，胎生苗產(chǎn)生時(shí)間推遲2.4 h，對(duì)胎生苗產(chǎn)生時(shí)間的影響不是很大，說(shuō)明生長(zhǎng)素可能在控制胎生苗產(chǎn)生這個(gè)過(guò)程中沒(méi)有起到主要的作用。使用6-BA后，胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間推遲13.2 h。PR處理的胎生苗產(chǎn)生時(shí)間提前2.4 h。說(shuō)明在胎生苗產(chǎn)生過(guò)程中，細(xì)胞分裂素起到了一個(gè)相對(duì)重要的作用。同時(shí)添加2，4-D和PR，胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間推遲10.8 h；與單獨(dú)施用2，4-D相比，對(duì)胎生苗產(chǎn)生時(shí)間的抑制增加了8 h。說(shuō)明完整葉片中細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素存在著拮抗作用，在抑制細(xì)胞分裂素的運(yùn)輸后，生長(zhǎng)素就完全的表現(xiàn)出對(duì)胎生苗產(chǎn)生的抑制作用。同時(shí)施用6-BA和TIBA，胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間推遲14.4 h；與單獨(dú)施用6-BA相比，對(duì)胎生苗產(chǎn)生時(shí)間的抑制增加了1.2 h。說(shuō)明在完整葉片中，生長(zhǎng)素對(duì)胎生苗產(chǎn)生影響不太，細(xì)胞分裂素決定著胎生苗產(chǎn)生的時(shí)間。同時(shí)施用2，4-D和6-BA，胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間推遲了9.2 h，與單獨(dú)施用6-BA和2，4-D比較，對(duì)胎生苗的抑制的作用介于單獨(dú)施用細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素之間。這說(shuō)明在完整葉片中細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素存在著拮抗作用，同時(shí)細(xì)胞分裂素在控制胎生苗產(chǎn)生的過(guò)程中起決定性作用。

PR處理的外植體，胎生苗產(chǎn)生所需的時(shí)間最短，在圖2B中，在2～5 d這段時(shí)間內(nèi)，用PR處理產(chǎn)生的胎生苗是最多的。TIBA處理外植體產(chǎn)生的胎生苗總數(shù)，在6～11 d這段時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生的胎生苗數(shù)最多。這說(shuō)明了在完整葉片中，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素對(duì)胎生苗的誘導(dǎo)產(chǎn)生都存在抑制作用，在施用對(duì)應(yīng)的抑制劑PR、TIBA后，胎生苗的產(chǎn)生不再受到抑制，胎生苗的數(shù)量也得到了提高。使用6-BA處理和6-BA、TIBA處理的外植體胎生苗產(chǎn)生所需的時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，所以，所得到的胎生苗總數(shù)相對(duì)較少。

2.3 以切割葉片作為外植體在不同處理情況下誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗的時(shí)間和數(shù)量差異

圖3 以落地生根切割葉片作為外植體在不同處理情況下誘導(dǎo)產(chǎn)生胎生苗的時(shí)間和數(shù)量差異

與在以大葉落地生根完整葉片為外植體不同，以大葉落地生根切割葉片為外植體，施用6-BA使胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間提前了3.1 h。說(shuō)明在切割葉片中，細(xì)胞分裂素對(duì)胎生苗的產(chǎn)生起到了促進(jìn)作用。而且用細(xì)胞分裂素抑制劑PR處理的切割葉片，胎生苗完全受到抑制。說(shuō)明在切割葉片中，細(xì)胞分裂素對(duì)誘導(dǎo)胎生苗產(chǎn)生是至關(guān)重要的，并且有利于胎生苗的產(chǎn)生。 施用2，4-D進(jìn)行處理，對(duì)胎生苗產(chǎn)生時(shí)間影響不大，但是施用生長(zhǎng)素抑制劑TIBA的處理，胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間推遲了9.3 h。這些結(jié)果說(shuō)明在切割葉片中，生長(zhǎng)素對(duì)胎生苗產(chǎn)生有一個(gè)正向的影響。同時(shí)用2，4-D和PR處理切割葉片，不能誘導(dǎo)胎生苗產(chǎn)生，說(shuō)明2，4-D不能挽救無(wú)細(xì)胞分裂素的情況。同時(shí)用6-BA和TIBA處理，胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間推遲4 h。與單獨(dú)施用TIBA相比，6-BA促進(jìn)了胎生苗的產(chǎn)生；與單獨(dú)施用6-BA相比，TIBA的加入使得胎生苗的產(chǎn)生受到抑制，這說(shuō)明在切割葉片誘導(dǎo)胎生苗產(chǎn)生的過(guò)程中，生長(zhǎng)素起到了一個(gè)不可忽視的作用，抑制生長(zhǎng)素的運(yùn)輸后，胎生苗的產(chǎn)生也受到抑制。

6-BA促進(jìn)切割葉片中胎生苗的產(chǎn)生，因此6-BA處理過(guò)的切割葉片產(chǎn)生的胎生苗總數(shù)是最多的。2，4-D處理的切割葉片，誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗總數(shù)比對(duì)照多。細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素都誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的胎生苗，說(shuō)明在切割葉片中，這兩種激素都起到了促進(jìn)胎生苗產(chǎn)生的作用。與同時(shí)用6-BA和2，4-D處理的切割葉片相比，生長(zhǎng)素抑制劑處理誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗總數(shù)相對(duì)較少，說(shuō)明胎生苗的長(zhǎng)期發(fā)育過(guò)程中，兩種激素的共同作用有利于胎生苗的發(fā)育。

2.4 不同處理對(duì)胎生苗發(fā)育的影響

在0～5 d，凡是添加6-BA處理的胎生苗葉片直徑大于其他處理的。其中，同時(shí)用2，4-D和PR處理后的胎生育，葉片直徑是最小的。在6～11 d，相對(duì)于對(duì)照，單獨(dú)用6-BA處理后的胎生苗葉片直徑稍大于對(duì)照；同時(shí)用6-BA和TIBA處理的胎生苗葉片直徑稍小于對(duì)照。同時(shí)添加2，4-D和PR處理的胎生苗葉片直徑是最小的。在11～17 d，對(duì)照的胎生苗葉片直徑是最大的。6-BA、6-BA+TIBA處理的胎生苗葉片直徑大小相似，小于對(duì)照的胎生苗直徑。2，4-D+PR處理的胎生苗葉片直徑在整個(gè)發(fā)育階段一直是最小的。而且，單獨(dú)用PR處理的胎生苗葉片直徑在整個(gè)發(fā)育階段，也是一直落后于其他處理。

圖4 胎生苗在不同處理下的葉片直徑生長(zhǎng)變化情況

3 討論

在完整葉片中，2，4-D和6-BA都表現(xiàn)出抑制胎生苗產(chǎn)生的作用，施用生長(zhǎng)素抑制劑TIBA能略微緩解這種抑制作用，而施用細(xì)胞分裂素PR抑制劑能完全阻礙這種抑制，并能促進(jìn)胎生苗的產(chǎn)生。而在切割葉片中，6-BA表型出促進(jìn)胎生苗產(chǎn)生的作用，而2，4-D作用不明顯。相應(yīng)地，施用生長(zhǎng)素抑制劑TIBA，抑制了胎生苗產(chǎn)生。特別是施用細(xì)胞分裂素抑制劑PR完全地阻止胎生苗的產(chǎn)生。不同外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生的胎生苗總數(shù)也與胎生苗產(chǎn)生時(shí)間呈現(xiàn)類似的趨勢(shì)。在不同的外植體中，相同濃度的兩種激素表現(xiàn)出的作用完全不同，甚至相反。某些研究認(rèn)為，由于培養(yǎng)基中的蔗糖與細(xì)胞分裂素存在拮抗作用(Kulka 2005；Hartig and Beck 2010；Rolland，Baena-Gonzalez，and Sheen 2006；Moore et al，2003)，所以高濃度的蔗糖(3%)會(huì)阻礙細(xì)胞分裂素的作用，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同，但低濃度的蔗糖(0.3%)則不會(huì)對(duì)細(xì)胞分裂素產(chǎn)生拮抗作用。本實(shí)驗(yàn)中，所有實(shí)驗(yàn)都是在含低濃度蔗糖(0.3%)的培養(yǎng)基上進(jìn)行的，而且培養(yǎng)的條件完全一致，因此，我們推測(cè)相同濃度的激素表現(xiàn)出不同作用的原因可能是由于切割葉片破壞了葉片中存儲(chǔ)的植物激素的平衡和運(yùn)輸，也有可能是破壞了葉片中信號(hào)傳導(dǎo)途徑。

本實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞分裂素和細(xì)胞分裂素抑制劑對(duì)完整葉片和切割葉片兩種外植體類型都相應(yīng)地產(chǎn)生明顯的抑制或者促進(jìn)作用，特別是在切割葉片中，施用細(xì)胞分裂素抑制劑PR完全地抑制了胎生苗的產(chǎn)生。其他一些學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞分裂素對(duì)胎生苗的作用可以分為兩條途徑，一條途徑，細(xì)胞分裂素直接抑制胎生苗的產(chǎn)生，使胎生苗原基保持休眠狀態(tài)。另一條途徑，細(xì)胞分裂素間接的刺激胎生苗原基的發(fā)育，這種情況在葉片出現(xiàn)傷口或者細(xì)胞分裂素運(yùn)輸受阻的情況下很明顯(Kulka 2005)。這個(gè)模型類似于Ferreira和Kieber(Ferreira et al. 2007)提出的鐘形模型，根中的細(xì)胞分裂素在高濃度時(shí)抑制根的生長(zhǎng)，在低濃度時(shí)促進(jìn)根的生長(zhǎng)。這兩個(gè)模型都能解釋細(xì)胞分裂素在完整葉片中抑制胎生苗產(chǎn)生，而在切割葉片中促進(jìn)胎生苗的產(chǎn)生，而我們認(rèn)為在胎生苗的產(chǎn)生過(guò)程中，細(xì)胞分類素直接作用胎生苗原基，處于調(diào)控途徑中的下游，而生長(zhǎng)素則處于上游。在這個(gè)過(guò)程中，推測(cè)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素存在拮抗作用，若其中一種激素過(guò)量會(huì)使另一種激素含量降低(Moubayidin，Di，and Sabatini 2009；Fukaki and Tasaka 2009；Shimizu-Sato，Tanaka，and Mori 2009；Hwang，Sheen，and Müller 2012；Staffan et al. ；Zhi et al. 2013；SU et al.，2011)，所以生長(zhǎng)素和生長(zhǎng)素抑制劑處理對(duì)完整葉片中胎生苗的產(chǎn)生時(shí)間和數(shù)量影響不大。

在胎生苗發(fā)育過(guò)程中，首先起作用的激素也是細(xì)胞分裂素，6-BA處理的胎生苗葉片直徑明顯大于其他處理。而細(xì)胞分裂素抑制劑處理的胎生苗，葉片直徑一直都是所有處理中較小的。接著，激素的作用逐漸減小，對(duì)照中的胎生苗直徑相對(duì)是最大的。所以，在胎生苗的發(fā)育過(guò)程中激素的作用不是一成不變的，6-BA在胎生苗發(fā)育前期刺激其生長(zhǎng)，但是在后期作用逐漸減小。雖然，細(xì)胞分裂素在胎生苗的產(chǎn)生和發(fā)育過(guò)程中起到了主要作用，但是仍然不能忽略生長(zhǎng)素的作用。在胎生苗總數(shù)中，2，4-D處理的總數(shù)在統(tǒng)計(jì)后期都不同于前期，說(shuō)明在胎生苗發(fā)育的后期生長(zhǎng)素的作用逐漸重要。

作者貢獻(xiàn)

劉華是本研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)者和實(shí)驗(yàn)研究的執(zhí)行人，完成數(shù)據(jù)分析，論文初稿的寫(xiě)作，參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和試驗(yàn)結(jié)果分析；鐘天秀是項(xiàng)目的構(gòu)思者及負(fù)責(zé)人，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)分析、論文寫(xiě)作與修改。全體作者都閱讀并同意最終的文本。

致謝

本研究由國(guó)家自然基金(31802116)和貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目(LH[2017]7027)共同資助。參與本研究的全體人員向資助方表示衷心感謝。