蘇黃瀉濁丸對UUO模型大鼠腎功能及可溶性CD146表達的影響

于 卓，陳 明，劉子洋，張佩青

(黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·黑龍江 哈爾濱 150036)

在全球范圍內(nèi)，慢性腎臟病(Chronic kidney disease,CKD)發(fā)病率呈快速增長趨勢，而且其預(yù)后差，醫(yī)療費用昂貴。CKD的高患病率和高病死率，增加了誘發(fā)心血管疾病及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的危險性，使之成為世界性的公共健康問題。目前國內(nèi)外對CKD尚無明確治愈的方法，最終需要腎臟替代治療，因此給整個社會及家庭帶來了沉重的經(jīng)濟負擔，迫使CKD患者積極尋求內(nèi)科治療。由此尋找早期CKD的診斷手段，延緩CKD的發(fā)展、推遲腎臟替代治療時間的有效方法則顯得尤為關(guān)鍵，值得醫(yī)學(xué)工作者進一步探討研究。蘇黃瀉濁丸為國醫(yī)大師張琪教授經(jīng)臨床經(jīng)驗方，該方芳香化濁、苦寒泄熱，能夠改善腎功能、延緩慢性腎臟病3、4期進展[1]。前期實驗研究證實蘇黃瀉濁丸能夠通過減少腎組織TGF-β1/p38MAPK和ILK、PINCH-1蛋白在腎間質(zhì)和腎小管的表達，延緩腎纖維化進程[2-3]。本課題通過觀察蘇黃瀉濁丸對單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)大鼠可溶性CD146表達的影響，探討蘇黃瀉濁丸抗腎間質(zhì)纖維化其他作用機理，報道如下。

1 實驗材料

1.1 藥物 蘇黃瀉濁丸：黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院生產(chǎn)，批號：黑藥制字 Z20090018，配成生藥濃度4 g/kg。尿毒清顆粒：由康臣藥業(yè)(內(nèi)蒙古)有限責任公司提供，批號：20140437，生藥濃度4 g/kg。

1.2 動物 70只成年清潔級雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量180～210 g，哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院動物實驗中心提供,生產(chǎn)許可證號：SCXK(黑)2006-010，于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院動物實驗中心適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.3 試劑 可溶性CD146 ELISA試劑盒：上海喬羽生物專業(yè)提供；大鼠血肌酐、尿素氮試劑盒：北京中生北控公司提供；大鼠尿微量蛋白試劑盒：北京中生北控公司提供。

1.4 儀器 日本Hitachi Limited公司全自動生化分析儀；德國蔡司光學(xué)顯微鏡.

2 方法

2.1 模型制備及分組給藥 70只雄性Wistar大鼠隨機分為正常組、假手術(shù)組、模型組、尿毒清組及蘇黃瀉濁丸組，每組14只。采用大鼠單側(cè)輸尿管梗阻方法(UUO)制備腎間質(zhì)纖維化模型[4]，并于術(shù)前禁食12 h，術(shù)后單籠飼養(yǎng)。術(shù)后第2天模型組死亡1只，假手術(shù)組麻醉過量死亡1只，其余大鼠術(shù)后恢復(fù)良好，基本行為無異常。按70 kg成人等效劑量尿毒清組予尿毒清1.81g/(kg·d)、蘇黃瀉濁丸組予蘇黃瀉濁丸1.58 g/(kg·d)灌胃，正常組、假手術(shù)組、模型組予等體積生理鹽水灌胃。從術(shù)后第1天開始給藥，每天上午灌胃1次，連續(xù)28 d。

2.2 觀察指標及測定方法

2.2.1 血、尿生化指標測定 造模第28天全自動生化儀檢測各組大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白。

2.2.2 血、尿sCD146測定 ELISA法測定，均根據(jù)試劑盒說明書進行測定。

2.2.3 腎組織病理學(xué)變化觀察 造模第28天處死大鼠，摘取腎臟。經(jīng)石蠟包埋后，切片、清洗、蒸餾水浸、沖洗等制備標本，顯微鏡下觀察。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠血清肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白檢測結(jié)果 見表1。

表1 各組大鼠血清肌酐、尿素氮與尿微量白蛋白水平的比較

3.2 各組大鼠血、尿sCD146檢測結(jié)果 見表2。

表2 各組大鼠血、尿sCD146水平比較

3.3 各組大鼠腎組織病理學(xué)觀察 正常組大鼠腎組織未見異常。假手術(shù)組大鼠腎組織無顯著性變化，皮、髓質(zhì)分界較清，未見纖維化改變及腎小管處結(jié)晶沉積。模型組可見腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，但腎間質(zhì)有水腫，腎臟皮質(zhì)變薄，小管擴張，有管型生成，間質(zhì)纖維化變顯著，纖維細胞和膠原纖維明顯增多，炎癥細胞浸潤，皮髓質(zhì)不清。尿毒清顆粒組和蘇黃瀉濁丸組腎小管、間質(zhì)病理學(xué)改變較模型組病變程度明顯減輕。見圖1。

圖1 各組大鼠腎組織病理變化(HE，×400)

4 討論

腎間質(zhì)纖維化病因在傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)古代文獻中并沒有獨立記載，總結(jié)概括其原因大多為各種腎臟病日久遷延不愈，臟腑功能失調(diào)，復(fù)感外邪、情志不遂、勞逸失調(diào)等因素加重病情，最終發(fā)展成為“正虛邪實”之病證。先天稟賦不足、勞逸失調(diào)、情志不遂、飲食所傷、失治誤治等為內(nèi)因，外因主要是外感六淫傷腎，其多為急性腎臟病的病因，但大多時候誘發(fā)慢性腎臟病急性發(fā)作，引起慢性腎損害。此外，他臟及腎亦可發(fā)為慢性腎間質(zhì)纖維化。

蘇黃瀉濁丸為國醫(yī)大師張琪教授經(jīng)數(shù)十年臨床經(jīng)驗總結(jié)所得，用于治療慢性腎衰竭濕邪內(nèi)蘊，脾胃濕熱證，多用于慢性腎功能衰竭中、晚期，經(jīng)長期臨床應(yīng)用，療效良好[5]。本實驗結(jié)果可見蘇黃瀉濁組大鼠血肌酐、血尿素氮水平、尿微量白蛋白明顯低于模型組，效果優(yōu)于尿毒清組，證明該藥物能夠明顯延緩UUO模型大鼠腎間質(zhì)纖維化進展。

CD146是近些年發(fā)現(xiàn)的一種細胞黏附分子，是反映細胞內(nèi)皮功能的生物標志物[6]。CD146在介導(dǎo)細胞間黏附，調(diào)節(jié)細胞滲透性，促進內(nèi)皮細胞增殖以及參與細胞跨膜信號傳導(dǎo)等方面有著重要的作用[7-8]?？扇苄訡D146(sCD146)是CD146的可溶性形式,Bardin等[9]發(fā)現(xiàn)在慢性腎衰竭患者外周血及尿液中sCD146的表達異常增高，進一步表明CD146與腎小球內(nèi)皮細胞損傷的關(guān)系。外周血sCD146水平與腎功能及機體炎癥狀態(tài)密切相關(guān)，能較好地反映患者腎功能損傷、進展及嚴重程度[10-11]。本文檢測結(jié)果顯示模型組大鼠血、尿sCD146水平較正常組明顯升高，蘇黃瀉濁丸組和尿毒清組血、尿sCD146水平明顯降低，28 d時血sCD146蘇黃瀉濁丸組優(yōu)于尿毒清組(P<0.05)。

綜上所述，蘇黃瀉濁丸能夠改善UUO模型大鼠的腎功能；減輕UUO模型大鼠腎間質(zhì)纖維化，通過影響內(nèi)皮細胞相關(guān)細胞因子、受體及黏附分子表達，抑制局部炎癥反應(yīng)可能是其部分作用機制。