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    貝克曼庫爾特DXI800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀檢測雌二醇的性能驗證

    2021-11-17 06:49:30馮泓琳張紅星康金鎖
    檢驗醫(yī)學(xué)與臨床 2021年21期
    關(guān)鍵詞:貝克曼雌二醇精密度

    馮泓琳,鄧 鈁,張紅星,康金鎖

    1.云南省阜外心血管病醫(yī)院檢驗科,云南昆明 650000;2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院阜外醫(yī)院實驗診斷中心,北京 100037

    雌二醇水平檢測被廣泛應(yīng)用于卵巢腫瘤、先兆流產(chǎn)等疾病的輔助診斷及臨床治療監(jiān)測[1-2],隨著檢驗技術(shù)不斷發(fā)展,檢測雌二醇的方法越來越多,包括化學(xué)發(fā)光免疫分析法、放射免疫法、酶免疫測定法、酶聯(lián)免疫吸附試驗法、色譜法等,但化學(xué)發(fā)光免疫分析法因其自動化程度高、及時性強、靈敏度和特異度高等優(yōu)點,被臨床廣泛應(yīng)用[3]。由于激素類檢測試劑盒也有其劣勢,如靈敏度不能滿足臨床需求等,對于新型試劑盒,國內(nèi)外相關(guān)指南要求在試劑應(yīng)用于臨床之前,實驗室必須對檢測系統(tǒng)的主要分析性能進行評價[4-5]。ISO[6]強調(diào)未經(jīng)修改而常規(guī)使用已確認的檢驗程序前,應(yīng)經(jīng)過實驗室的獨立驗證。實驗室應(yīng)從制造商或方法開發(fā)者處獲得相關(guān)信息,以確定檢驗程序的性能特征。實驗室進行的獨立驗證,應(yīng)通過獲取客觀的證據(jù)證實檢驗程序的性能與其聲明相符。衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 420-2013[7]指出臨床實驗室應(yīng)對所用的檢驗方法或商品試劑盒進行驗證。根據(jù)CNAS-CL38[8]要求,性能驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括正確度、精密度和可報告范圍。本文將根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)頒布的EP系列文件,對貝克曼庫爾特DXI800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀檢測新一代雌二醇試劑盒的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍和攜帶污染率進行驗證和評價。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 根據(jù)CLSI系列文件要求收集云南省阜外心血管病醫(yī)院患者標本,所有標本離心后均無明顯溶血、脂血、黃疸等,符合實驗要求。按試劑說明書指示,標本在-20 ℃冰箱中最多可保存4周,有相關(guān)研究顯示在-20 ℃冰箱中保存7 d對雌二醇檢測結(jié)果無影響[9]。將標本分裝后于-20 ℃冰箱凍存并在7 d內(nèi)完成性能驗證實驗。

    1.2儀器與試劑 美國貝克曼庫爾特DXI800型全自動發(fā)光分析儀;新一代雌二醇原裝配套試劑(貨號B84493,批號966016);配套校準品(批號988951);美國Bio-Rad質(zhì)控品(貨號370,批號40371、40372、40373)。

    1.3方法

    1.3.1實驗準備 實驗前按廠商要求對貝克曼庫爾特DXI800進行保養(yǎng)維護,每日完成室內(nèi)質(zhì)控,結(jié)果均顯示合格,操作人員均規(guī)范培訓(xùn),熟練掌握儀器操作和了解整個實驗方案。

    1.3.2精密度驗證 根據(jù)EP15-A2[10]文件要求,配制低水平(260.11 pg/mL)、高水平(2 815.54 pg/mL)2個水平標本,2個水平已覆蓋健康人和患者水平,每個水平每天重復(fù)測定4次,連續(xù)5 d。根據(jù)CLIA′88和衛(wèi)生健康委員會室間質(zhì)量評價中雌二醇允許總誤差(TEa)為25%的要求,將驗證結(jié)果與CLIA′88規(guī)定的TEa進行比較,判斷其不精密度是否可以接受,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)<1/4TEa,總CV<1/3TEa[11-12],結(jié)果屬于臨床可接受水平,驗證通過。

    1.3.3正確度驗證 根據(jù)EP15-A2[10]和CLIA′88文件要求,本研究選擇偏倚評估的方法,選擇國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心2020年第二次內(nèi)分泌室間質(zhì)評的5份內(nèi)分泌室間質(zhì)評質(zhì)控品進行驗證,計算均值與室間質(zhì)評質(zhì)控品靶值的偏倚,偏倚<1/2TEa認為偏倚屬于臨床可接受水平,驗證通過。

    1.3.4線性范圍驗證 根據(jù)EP6-A[13]和WS/T 408-2012[14]文件要求,推薦驗證實驗采用4~6個水平,本實驗選擇覆蓋儀器說明書標識線性范圍(15~5 200 pg/mL)的高水平(5 032.31 pg/mL)、低水平(31.26 pg/mL)標本各一份,將高水平和低水平按0∶4、1∶3、2∶2、3∶1、4∶0的比例配制成5個水平,每個水平測定2次。以X表示理論值,Y表示實測值,用直線回歸方程對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計,得直線回歸方程Y=bX+a,計算r,得到的線性范圍與廠家聲明的比較,在線性范圍內(nèi)且b在1.00±0.03范圍,r≥0.990,每個水平的實測值與理論值的偏差≤1/2TEa為通過。

    1.3.5臨床可報告范圍驗證 根據(jù)EP6-A[13]和CNAS-GL037[15]文件要求,選擇高水平(水平超過廠家標識的線性范圍上限值)標本。將高水平(9 801.22 pg/mL)標本用生理鹽水稀釋到水平接近線性范圍的上1/3區(qū)域內(nèi),記錄稀釋倍數(shù),重復(fù)測定3次,記錄原始數(shù)據(jù),計算回收率(R),R=測定值/理論值×100%,R可接受范圍為90%~110%,可接受范圍內(nèi)最大的稀釋倍數(shù)為超過線性范圍上限標本的最大稀釋倍數(shù)。臨床可報告范圍下限為線性范圍下限,可報告范圍上限為線性范圍上限×最大稀釋倍數(shù)。

    1.3.6攜帶污染率驗證 根據(jù)EP10-A2[16]文件要求,選擇高水平(2 558.73 pg/mL)和低水平(22.14 pg/mL)標本各一份,依次測高水平標本3次(H1、H2、H3)、低水平標本3次(L1、L2、L3),計算試驗結(jié)果以公式攜帶污染率=|(L1-L3)|/|(H3-L3)|×100%計算。

    1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用Excel2010和SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān),以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1精密度驗證 低水平、高水平標本雌二醇的批內(nèi)CV分別為2.3%、5.5%,均<1/4TEa(6.25%),總CV分別為4.5%、6.2%,均<1/3TEa(8.33%),驗證通過,結(jié)果見表1。

    表1 精密度驗證結(jié)果

    2.2正確度驗證 臨檢中心室間質(zhì)評質(zhì)控品檢測結(jié)果均值與靶值之間的偏倚在-1.55%~11.48%,均<1/2TEa(12.5%),驗證通過,結(jié)果見表2。

    表2 正確度驗證結(jié)果

    2.3線性范圍驗證 線性范圍驗證5個不同比例稀釋水平測定結(jié)果顯示,測定均值與理論值的直線方程為Y=0.981X-25.592,b=0.981,r=0.997,P<0.05,滿足要求(b在1.00±0.03范圍內(nèi),相關(guān)系數(shù)r≥0.990);最大稀釋偏差絕對值在1.56%~11.88%,均<1/2TEa(12.5%)。結(jié)果見表3,散點圖見圖1。本研究驗證的線性范圍為26.87~5 089.79 pg/mL,與廠家聲明的范圍(15~5 200 pg/mL)接近,驗證通過。

    圖1 雌二醇線性范圍線性結(jié)果

    表3 5個系列水平雌二醇檢測結(jié)果

    2.4臨床可報告范圍驗證 將高水平(9 801.22 pg/mL)標本用生理鹽水稀釋2倍、4倍、5倍、6倍后,各重復(fù)檢測3次取均值,計算R,R在90%~110%為合格,結(jié)果見表4。其中只有2倍稀釋后結(jié)果(100.34%)合格,故雌二醇臨床可報告范圍為26.87~10 179.58 pg/mL。

    表4 臨床可報告范圍結(jié)果

    2.5攜帶污染率驗證 本試驗攜帶污染率為0.14%,符合要求(<1.0%),驗證通過。

    3 討 論

    貝克曼庫爾特DXI800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀采用微粒子化學(xué)發(fā)光原理定量檢測標本,與傳統(tǒng)方法相比,具有準確度高、靈敏度高、穩(wěn)定性好、無放射污染、檢測速度快且操作簡單等優(yōu)點。雖然貝克曼庫爾特DXI800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀檢測系統(tǒng)采用配套的試劑和標準品,但是每個實驗室在水質(zhì)、電壓穩(wěn)定性、實驗室溫濕度和人員操作習(xí)慣等方面存在差異,實際分析性能與廠家提供的性能參數(shù)不一定一致。良好的儀器性能是保證結(jié)果可靠性的前提條件,GB/T 22576-2008[17]明確指出,臨床實驗室使用廠家已嚴格評估的檢驗方法或試劑盒之前,應(yīng)驗證相關(guān)分析性能以證實在本實驗室能達到廠家聲明的性能指標。有關(guān)性能驗證的文獻較多,定量檢測雌二醇的性能驗證還鮮有文獻報道,相關(guān)研究顯示,雌二醇性能驗證結(jié)果重復(fù)性好、正確度高、線性良好、靈敏度高,能滿足臨床實驗室工作需要[12,18]。目前關(guān)于貝克曼庫爾特DXI800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀對新一代雌二醇試劑盒性能驗證的相關(guān)文獻較少,因此本研究依據(jù)CLIA′88、ISO15189和CLSI等標準文件的相關(guān)要求對新一代雌二醇試劑盒進行了性能驗證。

    精密度是指測量程序在相同條件下,對同一標本進行多次測量所得結(jié)果之間的一致性,是表示測定結(jié)果中隨機誤差大小程度的指標[11]。精密度是反映儀器性能的首要指標,也是其他性能驗證評價的基礎(chǔ)。本研究根據(jù)EP15-A2文件驗證貝克曼庫爾特DXI800新一代雌二醇試劑盒精密度。結(jié)果顯示,低水平、高水平標本雌二醇的批內(nèi)CV分別為2.3%、5.5%,均<1/4TEa,總CV分別為4.5%、6.2%,均<1/3TEa,均符合要求。說明新一代雌二醇試劑盒精密度高,重復(fù)性好,隨機誤差較小,可達到臨床可接受水平。

    準確度是表示檢測結(jié)果是否可靠的重要指標之一。本研究根據(jù)EP15-A2[10]文件驗證結(jié)果顯示,臨檢中心室間質(zhì)評質(zhì)控品檢測結(jié)果均值與靶值之間的偏倚在-1.55%~11.48%,均<1/2TEa,符合要求。因此新一代雌二醇試劑盒準確度高,檢驗結(jié)果可靠。

    線性范圍代表儀器的檢測能力,關(guān)系到是否能為臨床提供可靠的數(shù)據(jù),線性范圍越寬表示廠家提供的試劑更適用于臨床[19]。本研究顯示,所驗證線性范圍與廠家標識范圍相近,在26.87~5 089.79 pg/mL內(nèi)雌二醇具有良好的線性關(guān)系(r>0.990,P<0.05),且最大稀釋偏差<1/2TEa,符合要求,但此線性范圍低值為26.87 pg/mL,略高于貝克曼庫爾特試劑說明書低值15 pg/mL,表明不同實驗室之間存在差異。臨床可報告范圍驗證顯示2倍稀釋后結(jié)果合格,因此雌二醇臨床可報告范圍為26.87~10 179.58 pg/mL。說明新一代雌二醇試劑盒線性范圍良好,可報告范圍較寬,可以滿足絕大部分臨床標本的測量需求。

    攜帶污染率是干擾檢測結(jié)果準確性的重要因素之一,是標本檢測前后受其他標本污染的情況。它是全自動化學(xué)發(fā)光分析儀內(nèi)上一個標本的殘留量相對于下一個標本的輸入量加上一個標本的殘留量的總體積比,它是一個常數(shù),不受前后兩個標本差值大小的影響[20-21]。本研究檢測數(shù)據(jù)通過公式攜帶污染率=|(L1-L3)|/|(H3-L3)|×100%計算,結(jié)果為0.14%,符合要求(<1.0%)。表示儀器運行時標本之間交叉污染影響較小。

    綜上所述,本研究依據(jù)CLIA′88、ISO15189和CLSI等相關(guān)文件,在貝克曼庫爾特DXI800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀上對新一代雌二醇試劑盒進行性能驗證,在每日嚴格把控質(zhì)量的情況下,儀器精密度高,準確度高,線性范圍良好,可報告范圍較寬,且攜帶污染率低,結(jié)果均符合實驗室質(zhì)量要求,能夠較好地滿足臨床需求。

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