大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下p38MAPK對(duì)兔髕腱起止點(diǎn)微細(xì)結(jié)構(gòu)影響

陳一言，陸阿明，齊亞楠，王 琳*，劉云逸

髕腱病是髕腱反復(fù)承受不合理的負(fù)荷導(dǎo)致的退行性變，在籃、足、排等需要反復(fù)跳躍的項(xiàng)目中患病率可達(dá)34%[1]。目前還沒(méi)有針對(duì)髕腱病的完善有效的預(yù)防或治療措施出現(xiàn)，這種現(xiàn)狀與對(duì)其發(fā)生機(jī)制不了解有關(guān)，因此，完善髕腱病的發(fā)病機(jī)制非常重要。

肌腱部位的代謝決定了其對(duì)外力負(fù)荷的病理和生理適應(yīng)之間的均衡[2-4]，信號(hào)通路則在此時(shí)承擔(dān)橋梁的作用。p38促分裂原活化蛋白激酶（Mitogen-Activated Protein Kinase，MAPK）信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)信息傳遞的主要信號(hào)通路之一，外力負(fù)荷下p38MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路把外部刺激傳至細(xì)胞內(nèi)部，從而調(diào)節(jié)生理生化反應(yīng)[5-7]，應(yīng)力刺激會(huì)影響p38MAPK在肌細(xì)胞、腱細(xì)胞、骨與軟骨中的活躍程度[8]。

髕腱起于髕尖，止于脛骨結(jié)節(jié)，髕腱病患者觸診最痛點(diǎn)為腱起止點(diǎn)[9-10]，大多數(shù)針對(duì)髕腱與骨結(jié)合部的研究只涉及髕骨髕腱結(jié)合部（PPTJ）。即使在相同的干預(yù)條件下，髕腱中不同部位的變化也不盡相同[11]，缺乏脛骨髕腱結(jié)合部（TPTJ）的研究則無(wú)法全面了解腱病中腱止點(diǎn)的發(fā)病機(jī)制。雖然肌腱附著點(diǎn)的損傷是由于持續(xù)收縮的肌肉不斷牽拉附著點(diǎn)而引起的一種慢性損傷，但是一次不適宜運(yùn)動(dòng)引起的急性損傷有可能成為腱病的起始原因[12-13]。本文通過(guò)電刺激定量跳躍裝置使兔進(jìn)行一次性大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷，研究在p38MAPK信號(hào)通路被抑制前后兔PPTJ與TPTJ的適應(yīng)性變化有何不同，是否會(huì)使組織結(jié)構(gòu)分層相同的兩結(jié)合部之間產(chǎn)生差異。該研究旨在了解p38MAPK在腱病發(fā)展中的作用，豐富和完善髕腱發(fā)病機(jī)制，為運(yùn)動(dòng)中腱病預(yù)防提供理論指導(dǎo)。

1 研究方法

該方案經(jīng)北京體育大學(xué)運(yùn)動(dòng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：2016013），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均在麻醉下進(jìn)行所有手術(shù)，并盡一切努力最大限度地減少其疼痛、痛苦和死亡。

1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象與分組

14只18周齡雌性新西蘭大白兔（購(gòu)買于北京興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心），隨機(jī)分為對(duì)照組（CON，N=4）、跳躍組（J1，N=5）、跳躍后注射p38抑制劑組（J1P，N=5）。溫度20~22℃，濕度55%~65%。常規(guī)飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2動(dòng)物訓(xùn)練方法

本研究采用的動(dòng)物模型為在北京體育大學(xué)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室建立的新西蘭大白兔大強(qiáng)度定量跳躍模型，該模型需要用到的儀器為：電刺激動(dòng)物跳臺(tái)（DSTT-1）、激光發(fā)射接收器（ZL-QTJS002）[14]。牽引繩將兔前肢套起，跳躍前訓(xùn)練人員提起繩索使兔前肢呈懸空姿態(tài)，后肢位于電刺激器上，與地面呈60°保持預(yù)備姿勢(shì)，兔騰空及落地過(guò)程中牽引繩處于不受力狀態(tài)。電壓15 V，電流1 min通5次，電刺激引發(fā)兔向前上方跳躍且每次跳躍后迅速將兔重置并重復(fù)這一過(guò)程。激光發(fā)射接收器固定跳臺(tái)2側(cè)，實(shí)時(shí)反饋跳躍高度。合格跳躍定義為兔以預(yù)備姿勢(shì)在電刺激的電流刺激下向正前方主動(dòng)跳躍，高度不低于15 cm（該模型的大強(qiáng)度由兔的最低跳躍高度得出）[14]。實(shí)驗(yàn)前所有訓(xùn)練人員接受培訓(xùn)。適應(yīng)性訓(xùn)練3 d，每天跳躍次數(shù)依次增加，分別為50次、100次、150次。訓(xùn)練時(shí)安撫兔情緒。正式實(shí)驗(yàn)：每日1次，每次150個(gè)合格跳躍。分10組完成，每組15次。組間休息3 min，為了控制跳躍質(zhì)量，第4組與第8組結(jié)束后，休息6 min。此舉是為了控制跳躍質(zhì)量，若不延長(zhǎng)休息時(shí)間將無(wú)法完成后續(xù)訓(xùn)練。CON組不訓(xùn)練，J1P組于每次訓(xùn)練后腹腔注射SB203580（0.5 mg/kg）。關(guān)于p38抑制劑的研究已比較完善，大量文獻(xiàn)證明，p38抑制劑SB203580在注射進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)可產(chǎn)生抑制效應(yīng)[15]。

1.3樣品處理

完成相應(yīng)訓(xùn)練24 h后25%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射，兔固定在解剖臺(tái)上，沿兔后肢長(zhǎng)軸剪開兔膝關(guān)節(jié)皮膚，取兔髕腱連同髕腱末端區(qū)附著的骨和軟骨，手術(shù)刀切分為PPTJ與TPTJ，10%福爾馬林溶液固定24 h，70%酒精保存。保存后的組織常規(guī)脫水（LeicaASP200S，德國(guó)）后石蠟包埋（Leica，德國(guó)），每一部位按橫截面一分為二待測(cè)，冷卻后冰箱4℃保存。隨后進(jìn)行石蠟切片（LeicaRM2235，德國(guó)），切片厚度7 μm。每個(gè)蠟塊保證組織完整的15張切片，烤箱60℃烘烤2 h。

1.4組織染色

使用常規(guī)H&E染色（蘇木素與伊紅染色液G1140，G1110，購(gòu)于Solarbio）與免疫組化（一抗比例1:100，bs-0812R，bs-6312R，bs-0086R，Bioss；試 劑 盒SP-0022，SP-0023，Bioss）處理。

1.5圖像采集

使用光學(xué)顯微圖像采集系統(tǒng)（50i，日本尼康）進(jìn)行圖像采集。H&E在20倍、40倍視野下各拍攝1張，100倍3張，偏振光模式拍攝要求同上。免疫組化20倍視野1張，100倍3張，400倍5張。拍攝標(biāo)準(zhǔn) 統(tǒng)一，PPTJ髕尖朝左下方45°，100倍視野下骨區(qū)占畫面的三分之一；TPTJ髕腱與脛骨結(jié)合位置的長(zhǎng)條形空隙一致橫向置于畫面中線并與上下底邊平行。存為TIF格式。

1.6測(cè)試指標(biāo)

采用定性描述和相對(duì)定量分析2種方式。定性分析腱止點(diǎn)細(xì)胞的形態(tài)、膠原排列、潮線變化等組織學(xué)表現(xiàn)；定量（MetaMorph 7.7）分析纖維軟骨帶厚度、細(xì)胞密度與免疫組化陽(yáng)性指標(biāo)數(shù)（選取與p38及腱病聯(lián)系密切的相關(guān)因子，分別為IL-6、IL-1β、TGF-β1）。軟骨帶厚度與細(xì)胞密度在100倍視野下的3張照片測(cè)定后取平均值。免疫組化陽(yáng)性指標(biāo)在400倍下測(cè)定5張后取平均值。在肌腱對(duì)負(fù)荷的適應(yīng)性過(guò)程中，炎性因子與纖維化因子是影響這一進(jìn)程的兩大重要因素[16]。有研究認(rèn)為白細(xì)胞介素（IL）是腱病的初始致病因子，也有實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)急性運(yùn)動(dòng)后的組織活檢發(fā)現(xiàn)IL對(duì)腱病的上調(diào)作用被夸大[17]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β1）是調(diào)節(jié)損傷愈合中纖維化進(jìn)程的核心因子[18]，它可以調(diào)節(jié)膠原的生成并促進(jìn)瘢痕形成與組織連續(xù)[19]。p38MAPK可以影響IL等炎性因子的產(chǎn)生，并能夠在TGF-β激活的蛋白激酶1結(jié)合蛋白（TAB1）的幫助下完成自身磷酸化過(guò)程[20]。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

測(cè)試結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）描述。將干預(yù)手段（對(duì)照、跳躍、跳躍加抑制劑）作為自變量，使用單因素方差分析法分別對(duì)PPTJ和TPTJ進(jìn)行定量指標(biāo)分析，后續(xù)兩兩比較采用LSD方法；相同干預(yù)條件下的PPTJ與TPTJ 2個(gè)不同部位之間進(jìn)行配對(duì)T檢驗(yàn)。顯著性差異定義為P＜0.05。指標(biāo)包括：細(xì)胞密度、軟骨帶厚度、免疫組化IL-6、IL-1β、TGF-β1陽(yáng)性計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 PPTJ與TPTJ的組織形態(tài)學(xué)定性描述

圖1 所示，CON-P為對(duì)照組PPTJ的H&E圖像，CON-P'是CON-P偏振光圖像，CON-T是對(duì)照組TPTJ的H&E圖 像，CON-T'是CON-T偏振 光 圖像，以此類推。

圖1 H&E染色顯微成像圖（放大倍數(shù)100×）Figure1 H&E staining microscopic image(magnification 100×)

PPTJ與TPTJ的CON組結(jié)果：肌腱細(xì)胞核均呈梭形，軟骨細(xì)胞核呈圓形，均無(wú)細(xì)胞核聚集現(xiàn)象，肌腱的膠原纖維整齊排列，纖維軟骨區(qū)靠近肌腱部位的軟骨細(xì)胞呈扁圓形，在靠近軟骨中央的地方細(xì)胞體積逐漸增大變?yōu)槁褕A形，骨區(qū)多橢圓形空腔，非鈣化的纖維軟骨、鈣化軟骨與骨之間分層清晰。TPTJ纖維軟骨區(qū)與鈣化的軟骨區(qū)之間可見(jiàn)一條清晰、平滑的圓弧形潮線，PPTJ未見(jiàn)潮線；TPTJ肌腱與軟骨細(xì)胞比PPTJ的肌腱與軟骨細(xì)胞排列更加緊湊，且TPTJ的卵圓形細(xì)胞核的面積略大于PPTJ，即TPTJ的軟骨區(qū)域比PPTJ多；偏振光圖像顯示，TPTJ比PPTJ膠原排列更致密。

J1組：以CON組為參照，PPTJ與TPTJ均產(chǎn)生了小范圍的細(xì)胞聚集現(xiàn)象，PPTJ細(xì)胞聚集情況的改變更明顯；PPTJ出現(xiàn)潮線，TPTJ潮線與CON組無(wú)明顯改變；此時(shí)二者潮線相比，TPTJ潮線更加清晰平滑；偏振光圖像顯示，2個(gè)部位未產(chǎn)生明顯的膠原形態(tài)改變。

J1P組：以J1組為參照，TPTJ潮線邊緣模糊且清晰度低于PPTJ潮線。

2.2指標(biāo)定量分析

如表1所示，干預(yù)手段只對(duì)PPTJ的IL-6有顯著性影響（P=0.045），所以對(duì)該指標(biāo)進(jìn)行兩兩比較。

表1 干預(yù)手段對(duì)PPTJ與TPTJ指標(biāo)單因素方差結(jié)果（X±SD）Table1 The results of single-factor variance of PPTJ and TPTJ indicators by intervention methods(X±SD)

圖2 結(jié)果顯示，J1P組PPTJ的IL-6含量明顯大于CON組（P=0.015）。

圖2 干預(yù)手段對(duì)PPTJ的IL-6影響兩兩比較結(jié)果（個(gè)/mm2）Figure2 Pairwise comparison of the intervention effects on IL-6 of PPTJ(pieces/mm2)

由表2可知，軟骨帶厚度在J1P組PPTJ明顯小于TPTJ（P＜0.05），其他時(shí)間點(diǎn)均無(wú)顯著性差異。

表2 PPTJ與TPTJ細(xì)胞密度與軟骨帶厚度的相對(duì)值比較（X±SD）Table2 Comparison of cell density and cartilage zone thickness between pptj and tptj(X±SD)

由表3可知，CON組中，PPTJ的IL-1β與IL-6明顯少于TPTJ（P＜0.05）；J1組PPTJ的IL-1β、TGF-β1、IL-6明顯少于TPTJ（P＜0.05）；J1P組中，PPTJ的IL-1β含量明顯少于TPTJ（P＜0.05）。

表3 PPTJ與TPTJ免疫組化指標(biāo)的相對(duì)值比較（X±SD）Table3 Comparison of immunohistochemical indexes between PPTJ and TPTJ(X±SD)

3 討論

3.1大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下p38MAPK對(duì)兔髕腱起止點(diǎn)組織學(xué)影響

組織學(xué)上的“潮線”指的是未鈣化軟骨與鈣化軟骨的分界線，健康骨腱結(jié)合部的潮線通常呈現(xiàn)圓弧形，邊緣清晰，這種結(jié)構(gòu)可以幫助減少軟骨損傷[11]。在J1組中，一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷使肌腱受應(yīng)力刺激，細(xì)胞內(nèi)膠原和基質(zhì)的合成增加，新陳代謝增加，對(duì)PPTJ造成細(xì)胞核聚集、潮線形態(tài)改變、邊緣模糊與上漲等情況，對(duì)TPTJ僅造成細(xì)胞聚集的情況，由此可見(jiàn)，在一次性的大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下，PPTJ比TPTJ更脆弱，這可能與二者在健康情況下的組織學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，從CON組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，健康情況下的TPTJ比PPTJ結(jié)構(gòu)更加致密。肌腱的波浪狀纖維結(jié)構(gòu)在受到外力刺激時(shí)，可以有效利用結(jié)構(gòu)優(yōu)勢(shì)進(jìn)行緩沖，這種機(jī)制在一定程度內(nèi)可以避免肌腱因受力過(guò)大而產(chǎn)生損傷[21]，J1組偏振光結(jié)果顯示，PPTJ與TPTJ的膠原排列均無(wú)明顯變化，說(shuō)明在這一點(diǎn)上二者均可以良好地適應(yīng)。通過(guò)文獻(xiàn)檢索未發(fā)現(xiàn)一次運(yùn)動(dòng)與骨腱結(jié)合部相關(guān)的研究成果出現(xiàn)，因此本文將結(jié)合與肌腱或長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)相關(guān)的研究成果進(jìn)行討論。李敏等[22]研究發(fā)現(xiàn)一次性中等強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)會(huì)使鼠跟腱的膠原間隙增大、局部排列錯(cuò)亂，與本文結(jié)果不一致，原因可能是部位不同或取材時(shí)間不同，李敏等[22]的研究取材時(shí)間為訓(xùn)練后即刻，而本文的取材時(shí)間為訓(xùn)練后24 h，或許可以說(shuō)明一次急性運(yùn)動(dòng)后發(fā)生的微細(xì)結(jié)構(gòu)損傷可以在24 h內(nèi)逐漸恢復(fù)。

申晉波等[23]發(fā)現(xiàn)急性力竭運(yùn)動(dòng)使大鼠跟腱膠原排列紊亂、間隙增大，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同，原因可能是取材部位的不同和其干預(yù)手段為力竭運(yùn)動(dòng)。在J1P組中，注射p38MAPK抑制劑使PPTJ的潮線更清晰，原本潮線更加清晰的TPTJ部位適應(yīng)性能力降低。p38MAPK在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中將力學(xué)因素傳遞到細(xì)胞內(nèi)，從而使相關(guān)細(xì)胞對(duì)該刺激進(jìn)行生理生化調(diào)節(jié)反應(yīng)，關(guān)于p38MAPK的研究 表明：p38MAPK信 號(hào)通路的抑制使得許多病理變化得到抑制，如細(xì)胞凋亡、炎性因子的產(chǎn)生及基質(zhì)分解酶的分解作用等[24]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下，p38MAPK在2個(gè)結(jié)合部表達(dá)被激活且對(duì)PPTJ潮線表現(xiàn)有消極影響，對(duì)TPTJ潮線表現(xiàn)有積極影響。湯婷婷[25]研究發(fā)現(xiàn)2周與6周跳躍會(huì)使大鼠跟腱止點(diǎn)中p38表達(dá)顯著增加，與本研究結(jié)果類似。在損傷修復(fù)的早期，相關(guān)因子在修復(fù)的過(guò)程中會(huì)通過(guò)瘢痕形成來(lái)促進(jìn)組織的連續(xù)性，同時(shí)也會(huì)激活軟骨細(xì)胞的增殖分化，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量增多。只有持續(xù)不斷的負(fù)荷有效地激活了以上進(jìn)程，才會(huì)使腱止點(diǎn)的細(xì)胞密度增加，這是組織在損傷早期對(duì)應(yīng)力負(fù)荷導(dǎo)致細(xì)微損傷所做出的適應(yīng)性反應(yīng)[26]。本實(shí)驗(yàn)條件下未對(duì)細(xì)胞密度產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)影響，可見(jiàn)在一次大強(qiáng)度跳躍刺激下，p38MAPK激活與否對(duì)髕腱起止點(diǎn)細(xì)胞的增殖分化未起明顯作用。腱止點(diǎn)的纖維軟骨帶厚度常常被用來(lái)評(píng)價(jià)該部位的損傷愈合與恢復(fù)情況。纖維軟骨帶厚度的增加往往是因?yàn)榇颂幨艿椒磸?fù)的應(yīng)力刺激導(dǎo)致纖維軟骨細(xì)胞增多，骨與肌腱之間接觸面更大，使應(yīng)力有所分散，且隨著跳躍負(fù)荷的積累和訓(xùn)練時(shí)間的延長(zhǎng)，活躍的軟骨細(xì)胞會(huì)合成更多的基質(zhì)，增強(qiáng)抗拉力[27]。

本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)干預(yù)手段未使PPTJ或TPTJ各自的軟骨帶厚度產(chǎn)生明顯變化。梁孝天等[28]發(fā)現(xiàn)4周的跳躍訓(xùn)練會(huì)使兔PPTJ細(xì)胞密度與軟骨帶厚度顯著增加，與本文結(jié)果不符，這可能是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)干預(yù)時(shí)間短。雖然本實(shí)驗(yàn)干預(yù)未使2個(gè)結(jié)合部各自的軟骨帶厚度明顯增加，但使二者之間的軟骨帶厚度差值發(fā)生了顯著變化。健康的PPTJ與TPTJ之間軟骨帶厚度不存在顯著性差異，一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷也未明顯地使二者軟骨帶厚度產(chǎn)生顯著性差異，p38MAPK表達(dá)被抑制后，TPTJ的軟骨帶厚度顯著大于PPTJ。該結(jié)果提示，一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下，p38MAPK信號(hào)通路被激活并影響PPTJ與TPTJ軟骨帶厚度差異，使二者的抗拉能力拉開差距。

3.2大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下p38MAPK對(duì)兔髕腱起止點(diǎn)相關(guān)因子含量影響

在腱病發(fā)展過(guò)程中，早期是否存在炎癥反應(yīng)及其作用尚不清楚，炎性病變能否被認(rèn)為是腱病的原因目前尚無(wú)定論。IL-1β常被認(rèn)為是炎癥反應(yīng)的核心，它影響細(xì)胞外基質(zhì)降解，調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)IL-6、COX-2、PGE2的生成，調(diào)控膠原生成并促進(jìn)彈性蛋白生成，改變肌腱細(xì)胞的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)[29]。TGF-β1則是纖維化反應(yīng)的核心因子，它與肌腱的力學(xué)性能息息相關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中，只有PPTJ的IL-6含量在其適應(yīng)性進(jìn)程中有顯著改變，J1P組明顯大于CON組。Astill等[30]發(fā)現(xiàn)急性抗組運(yùn)動(dòng)后3~4 h肌腱中IL-6含量顯著上升，與本文結(jié)果不符的原因可能是測(cè)定時(shí)間不同，或許說(shuō)明一次急性運(yùn)動(dòng)后IL-6的變化可以逐漸恢復(fù)。申晉波等[23]發(fā)現(xiàn)急性力竭運(yùn)動(dòng)過(guò)程中大鼠跟腱TGF-β1表達(dá)過(guò)高，與本研究結(jié)果不符，可能是因?yàn)槠鋵?shí)驗(yàn)條件為力竭運(yùn)動(dòng)。CON組結(jié)果說(shuō)明在健康的PPTJ與TPTJ中，PPTJ中的IL-1β、IL-6含量明顯少于TPTJ，而TGF-β1的含量無(wú)明顯差異，即這2個(gè)部位相關(guān)的炎性反應(yīng)能力存在差異，而纖維化性能在健康狀態(tài)下并沒(méi)有存在明顯差距。跳躍與抑制并沒(méi)有改變2個(gè)結(jié)合部中IL-1β含量的差異，但改變了其他2個(gè)細(xì)胞因子的結(jié)果。J1組，2個(gè)部位TGF-β1含量開始有明顯差值，具體表現(xiàn)為PPTJ的TGF-β1含量明顯少于TPTJ，可知一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷使PPTJ與TPTJ之間TGF-β1含量差值顯著增加。注射抑制劑后2個(gè)部位TGF-β1與IL-6含量的顯著性差異消失，該種現(xiàn)象提示p38MAPK在一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下會(huì)對(duì)PPTJ與TPTJ之間TGF-β1、IL-6含量的差異產(chǎn)生影響[31]。

3.3大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下p38MAPK與兔髕腱起止點(diǎn)適應(yīng)性反應(yīng)的關(guān)系

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)中的結(jié)果可知，在一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下，PPTJ的適應(yīng)性能力弱于TPTJ，這可能是健康情況下的PPTJ無(wú)論從細(xì)胞密度還是膠原纖維的排列緊密程度都低于TPTJ，并且IL-1β、IL-6這2個(gè)炎性因子在2個(gè)部位中的原始表達(dá)量有較大差異，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)機(jī)能有一定差異。將組織學(xué)表現(xiàn)與細(xì)胞因子結(jié)果結(jié)合分析，J1組大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷對(duì)2個(gè)結(jié)合部均造成微細(xì)結(jié)構(gòu)紊亂現(xiàn)象，TPTJ紊亂程度低于PPTJ，與此同時(shí)，2個(gè)部位的TGF-β1含量開始產(chǎn)生差異，TPTJ明顯大于PPTJ，意味著此時(shí)這2個(gè)部位的纖維化進(jìn)程已經(jīng)產(chǎn)生差距[32]，可以認(rèn)為TPTJ此時(shí)的高TGF-β1表達(dá)對(duì)其適應(yīng)性進(jìn)程有積極作用。注射抑制劑后PPTJ中IL-6相比CON組顯著提高，2個(gè)部位中TGF-β1、IL-6含量差異消失，軟骨帶厚度差值明顯增大，且此時(shí)原本適應(yīng)能力更強(qiáng)的TPTJ在組織學(xué)上的表現(xiàn)差于PPTJ。軟骨帶厚度增加有時(shí)被看作是一種正面的適應(yīng)性反應(yīng)，但在本實(shí)驗(yàn)J1P組中，組織學(xué)上TPTJ表現(xiàn)更差，推測(cè)在J1P組中，TPTJ軟骨帶厚度明顯大于PPTJ并不能被認(rèn)為是PPTJ正面的適應(yīng)性反應(yīng)，反而會(huì)減弱整個(gè)骨腱結(jié)合部區(qū)域的組織柔韌性與肌腱的抗?fàn)坷芰33-34]。該結(jié)果提示，一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下，抑制p38MAPK會(huì)使原本TPTJ優(yōu)于PPTJ的現(xiàn)象扭轉(zhuǎn)。

一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下，p38MAPK會(huì)對(duì)PPTJ與TPTJ的適應(yīng)性反應(yīng)產(chǎn)生影響，抑制前TPTJ優(yōu)于PPTJ，抑制后情況發(fā)生反轉(zhuǎn)。本研究結(jié)果顯示，p38在腱病發(fā)展過(guò)程中的作用值得進(jìn)一步研究，以形成成熟的研究成果運(yùn)用于實(shí)際運(yùn)動(dòng)中。使用p38抑制劑在特定時(shí)間段對(duì)特定部位進(jìn)行干預(yù)，從而降低腱病發(fā)展的可能性或推遲腱病發(fā)展過(guò)程中的時(shí)間節(jié)點(diǎn)。

4 結(jié)論

4.1一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷會(huì)引起PPTJ與TPTJ微細(xì)結(jié)構(gòu)變化（TPTJ的微細(xì)結(jié)構(gòu)變化優(yōu)于PPTJ）并使PPTJ與TPTJ之 間TGF-β1差 值 顯 著 增 大，p38MAPK被抑制后結(jié)局相反。

4.2一次大強(qiáng)度跳躍負(fù)荷下，p38MAPK的活化會(huì)維持PPTJ中IL-6含量的穩(wěn)定，p38MAPK被抑制使PPTJ與TPTJ之間IL-6含量顯著性差異消失。