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    幾種布魯氏菌ELISA抗體試劑盒對牛血清的臨床檢測評價

    2021-11-11 06:14:06劉麗婭馬曉菁謝彩云谷文喜馬俊杰易新萍
    中國獸醫(yī)雜志 2021年6期
    關(guān)鍵詞:布病布魯氏菌一致性

    葉 鋒,劉麗婭,馬曉菁,謝彩云,谷文喜,馬俊杰,易新萍,鐘 旗

    (新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所 新疆畜牧科學(xué)院動物臨床醫(yī)學(xué)研究中心,新疆 烏魯木齊 830099)

    布魯氏菌病(簡稱“布病”)是一種嚴(yán)重的人獸共患傳染病[1],近些年其在我國北方地區(qū)的流行率呈逐年上升趨勢[2]。為了提高動物布魯氏菌病的診斷需求,新版國家標(biāo)準(zhǔn)《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》(GB/T 18646—2018)已于2018年9月開始執(zhí)行,在原有診斷技術(shù)的基礎(chǔ)上,增加了間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(iELISA)、競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(cELISA)及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等血清學(xué)和病原學(xué)診斷新技術(shù)。由于ELISA方法具有靈敏性高、檢測通量大、人為因素影響小等優(yōu)點(diǎn),在近些年的布病檢測中得到了廣泛的研究和應(yīng)用[3-4]。前人多有對虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)、ELISA等方法之間的符合率進(jìn)行評價,但較少有對某種方法的產(chǎn)品間進(jìn)行橫向?qū)Ρ鹊难芯縖5-7]。本試驗(yàn)采用市面上流通的幾種iELISA及cELISA試劑盒,對采集的300份牛血清樣品進(jìn)行了布病抗體檢測,比對這些試劑盒在臨床檢測中的應(yīng)用情況。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集 全疆各地采集的荷斯坦、西門塔爾及家養(yǎng)黃牛血清樣品共計300份。

    1.2 試劑 布魯氏菌虎紅凝集試驗(yàn)抗原及陰性、陽性對照血清,均購自英國APHA公司。檢測用試劑盒,均為市面購買,4種iELISA布病檢測試劑盒以編號A~D代表,5種cELISA布病抗體檢測試劑盒以編號E~I(xiàn)代表。

    1.3 檢測方法 布魯氏菌病RBT和SAT操作方法及結(jié)果判定按照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18646進(jìn)行。ELISA試驗(yàn)步驟按試劑盒說明書操作。本試驗(yàn)先用RBT和SAT試驗(yàn)進(jìn)行血清篩選,再用ELISA試劑盒進(jìn)行比對試驗(yàn)。

    1.4 檢測結(jié)果一致性分析 根據(jù)Kappa計算方法,對4種iELISA試劑盒和5種cELISA試劑盒檢測結(jié)果進(jìn)行結(jié)果一致性分析。Kappa值越高,表明兩種試劑盒的檢測結(jié)果一致性好;反之則表明一致性較差。

    2 結(jié)果

    2.1 RBT及SAT檢測結(jié)果 300份牛血清采用RBT初篩及SAT確診后,其中206份血清為布病抗體陽性,94份血清為布病抗體陰性。

    2.2 iELISA試驗(yàn)檢測結(jié)果 應(yīng)用4種不同廠家生產(chǎn)的iELISA布病抗體檢測試劑盒(編號A~D)對篩選過的300份牛血清進(jìn)行檢測,顯示其敏感性在97.9%~100.0%,特異性介于18.2%~27.3%,總體符合率在74.3%~77.1%,結(jié)果見表1。

    表1 4種iELISA試劑盒檢測牛血清結(jié)果

    2.3 cELISA試驗(yàn)檢測結(jié)果 應(yīng)用5種不同廠家生產(chǎn)的cELISA布病抗體檢測試劑盒(編號E~I(xiàn))對300份牛血清進(jìn)行檢測,顯示其對牛血清的檢測敏感性在95.8%~100.0%,特異性介于22.7%~81.8%,總體符合率在74.3%~92.9%。結(jié)果見表2。

    表2 5種cELISA試劑盒牛血清檢測結(jié)果

    2.4 一致性分析 同時用A、B、C、D這4種iELISA試劑盒和E、F、G、H、I這5種cELISA試劑盒對300份牛血清樣品進(jìn)行檢測,其兩兩之間的Kappa 值見表3和表4。

    表3 4種iELISA試劑盒兩兩比較的Kappa值

    表4 5種cELISA試劑盒兩兩比較的Kappa值

    3 討論

    根據(jù)我國動物布魯氏菌病診斷技術(shù)國家標(biāo)準(zhǔn),臨床血清學(xué)檢測時,一般選用RBT或iELISA方法進(jìn)行初篩,用SAT或cELISA方法進(jìn)行確診。RBT法具有敏感性高、耗時短、操作簡單等優(yōu)點(diǎn),但也存在交叉反應(yīng)多、假陽性高等缺點(diǎn)。與SAT法聯(lián)用后,可提高早期感染診斷的準(zhǔn)確率[8]。ELISA方法用于布病診斷已有多年的經(jīng)驗(yàn),iELISA法對樣本要求量少,敏感性高,結(jié)果量化易于判斷,但也存在較高的假陽性率[9];cELISA法因敏感性和特異性都較高,是一種很好的確診性試驗(yàn),在血清學(xué)檢測和奶樣檢測中均有應(yīng)用[10-11]。

    目前布病檢測所使用的各種檢測方法均有其優(yōu)缺點(diǎn)[12-14],其相對應(yīng)的產(chǎn)品也存在一定的差異。本試驗(yàn)采用RBT和SAT法對血清進(jìn)行篩選后,挑選了市面上流通的4種iELISA和5種cELISA布病抗體檢測試劑盒,開展了牛血清布病抗體檢測比對試驗(yàn)。對篩選后的牛血清開展檢測后發(fā)現(xiàn),4種iELISA試劑盒表現(xiàn)出了良好的敏感性,均達(dá)到了95%以上的檢出率,但是其特異性均低于30%(18.2%~27.3%)。這個結(jié)果符合iELISA作為一種初篩試驗(yàn)方法的定位,即盡量提高其敏感性,不出現(xiàn)漏檢的情況。4種產(chǎn)品與RBT和SAT確定的檢測結(jié)果總體符合率在75%左右(74.3%~77.1%),與前人的檢測結(jié)果數(shù)據(jù)也基本保持一致[15]。5種cELISA試劑盒均有較好的敏感性(95.8%~100.0%),在特異性上差異較大。作為一種確診的試驗(yàn)方法,其特異性最高為81.8%,最低僅22.7%,顯示出產(chǎn)品之間存在較大的差異。

    檢驗(yàn)兩種檢測結(jié)果之間一致性的有效手段是進(jìn)行Kappa檢驗(yàn),當(dāng)Kappa>0.75時,表明2個結(jié)果高度一致;當(dāng)Kappa值處于0.40~0.75時,表明結(jié)果一致性較為一般。4種iELISA檢測試劑盒,除了B試劑盒與C試劑盒之間檢測結(jié)果一致性稍低為0.707,其余3種iELISA試劑盒兩兩之間的檢測結(jié)果一致性均大于0.75(0.786~0.916),表明4種試劑盒檢測結(jié)果高度一致,在用于布病血清學(xué)初篩時,可以任選其中一種即可。5種cELISA檢測試劑盒,兩兩之間的Kappa值分布在0.394~0.972,其中有5組試劑盒檢測結(jié)果之間的Kappa>0.75,表現(xiàn)出結(jié)果的高度一致性;4組試劑盒檢測結(jié)果之間的Kappa介于0.40~0.75,表明其檢測結(jié)果一致性一般;1組試劑盒檢測結(jié)果Kappa<0.40,表明其檢測結(jié)果之間的一致性較差。

    血清學(xué)檢測是布魯氏菌病診斷過程中的重要手段,在檢測過程中,其差異性不僅存在于各方法之間,也存在于不同的產(chǎn)品之間。隨著新的國標(biāo)方法的實(shí)施,ELISA作為一種高通量、易于定性的檢測方法,各種ELISA試劑盒產(chǎn)品將會大量的進(jìn)入到市場當(dāng)中,因此選擇合適的方法及產(chǎn)品,對提高布魯氏菌病的臨床診斷準(zhǔn)確率具有重要意義。

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