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    低鈣日糧對(duì)蛋雞龍骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)和骨骼元素濃度的影響

    2021-11-11 12:19:56張潤(rùn)祥陳艷青楊凱淇于翰林王曉萱魏海東李純李劍虹包軍
    關(guān)鍵詞:微結(jié)構(gòu)龍骨骨骼

    張潤(rùn)祥,陳艷青,楊凱淇,于翰林,王曉萱,魏海東,李純,李劍虹,包軍*

    (1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,哈爾濱150030;2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部雞遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,哈爾濱150030;3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,哈爾濱150030)

    鈣是動(dòng)物體必需營(yíng)養(yǎng)成分,影響蛋殼形成和骨骼健康。蛋雞對(duì)鈣元素有較高代謝需求,缺鈣導(dǎo)致骨質(zhì)流失,易引發(fā)骨質(zhì)疏松癥。龍骨損傷是危害蛋雞生產(chǎn)福利問(wèn)題之一。研究鈣營(yíng)養(yǎng)水平與蛋雞龍骨損傷關(guān)系及對(duì)龍骨結(jié)構(gòu)參數(shù)的影響,將為降低龍骨損傷發(fā)生率提供鈣營(yíng)養(yǎng)思路。

    鈣主要以磷酸鈣方式儲(chǔ)存在骨骼中,并以碳酸鈣形式儲(chǔ)存于蛋殼中[1]。我國(guó)蛋雞攝入100 g飼料鈣推薦量為3.5%[2]。骨骼是一種受生理、營(yíng)養(yǎng)和物理因素如機(jī)械應(yīng)力和身體活動(dòng)影響的動(dòng)態(tài)生物組織,含有大量骨細(xì)胞,成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞不斷重塑和修復(fù)維持骨骼健康[3]。由于產(chǎn)蛋行為特殊需求,蛋雞具有獨(dú)特骨代謝和生理過(guò)程[4]。在產(chǎn)蛋期開(kāi)始時(shí),蛋雞停止正常的骨骼生長(zhǎng)并發(fā)育成髓質(zhì)骨[5]。隨產(chǎn)蛋持續(xù)進(jìn)行,骨強(qiáng)度降低和骨脆性增加,蛋雞易發(fā)生骨折[6]。家禽龍骨是一種從胸骨延伸并軸向越過(guò)中線的結(jié)構(gòu)骨,在禽類骨骼中具有特殊地位,在禽類飛行和呼吸過(guò)程中發(fā)揮重要作用。龍骨損傷包括龍骨骨折和龍骨彎曲,龍骨骨折可能與蛋雞對(duì)產(chǎn)蛋行為適應(yīng)性與突然碰撞等行為學(xué)事件發(fā)生有關(guān),也與籠舍設(shè)施資源、鈣磷營(yíng)養(yǎng)代謝水平及遺傳品種相關(guān),龍骨骨折主要發(fā)生產(chǎn)蛋開(kāi)始至45周齡階段[7-8]。龍骨損傷不僅改變蛋雞行為表現(xiàn),降低生產(chǎn)性能和雞蛋質(zhì)量,還影響蛋雞情緒和生理狀況,給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失[7-9]。因此,龍骨損傷特別是龍骨骨折已成為商業(yè)蛋雞的生產(chǎn)和福利問(wèn)題。因此,本文聚焦鈣營(yíng)養(yǎng),探討低鈣日糧對(duì)蛋雞龍骨損傷發(fā)生率、龍骨微觀結(jié)構(gòu)和離子濃度的影響。

    微計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)(Micro-CT)已被廣泛用于評(píng)估動(dòng)物骨骼微結(jié)構(gòu)[10]。評(píng)估骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)包括骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th),骨小梁分離度(Tb.Sp),骨小梁數(shù)量(Tb.N)和連接密度(Conn.D.)[11]。研究結(jié)果表明,蛋雞龍骨骨折改變龍骨骨骼質(zhì)量,導(dǎo)致骨體積分?jǐn)?shù)、小梁數(shù)、各向異性度(DA)和連接密度減少及小梁分離增加[12]。骨質(zhì)疏松還導(dǎo)致雞股骨質(zhì)量下降和小梁顯微結(jié)構(gòu)改變[13]。

    飼糧低鈣水平影響蛋雞骨骼健康,為了解飼糧低鈣水平與蛋雞龍骨損傷之間關(guān)系及低鈣日糧對(duì)蛋雞龍骨骨骼微觀參數(shù)和離子濃度的影響,本研究對(duì)產(chǎn)蛋初期蛋雞持續(xù)飼喂低鈣日糧17周,測(cè)定蛋雞龍骨骨折發(fā)生率、骨礦物密度(BMD)、結(jié)構(gòu)參數(shù)和元素濃度,揭示低鈣日糧對(duì)蛋雞龍骨參數(shù)的影響。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料和飼養(yǎng)方案

    本試驗(yàn)購(gòu)買(mǎi)20周齡(wk)健康羅曼白蛋雞180只(購(gòu)自黑龍江先鋒民勝種雞場(chǎng)),隨機(jī)分為對(duì)照組(Con)組和低鈣飲食(LCa)組,每組6個(gè)籠子,每籠15只。將蛋雞飼養(yǎng)于富集籠(長(zhǎng)×寬×高為180 cm×70 cm×70 cm,含有方型木制棲架、草坪墊)和紅色半封閉產(chǎn)蛋箱,每籠配置乳頭飲水器。雞舍為半封閉飼舍,蛋雞自由進(jìn)食和飲水。試驗(yàn)期間(20~37 wk),雞舍溫度和濕度分別控制在22~26℃和45%~65%。雞舍機(jī)械通風(fēng)并配合自然通風(fēng),采用自然光和人工光照結(jié)合方式,光照周期為16L∶8D。日糧營(yíng)養(yǎng)水平中,對(duì)照組有效鈣水平為3.37%,低鈣組有效鈣水平為1.5%。飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平如表1所示。

    表1 蛋雞飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Dietary composition and nutrient levels of laying hens

    1.2 龍骨損傷評(píng)估

    龍骨損傷判定依據(jù)Scholz等[14]和Richard等[15]介紹的活雞觸診方法,為減小觸診誤差,龍骨損傷觸診判定均由1人完成。觸診時(shí),1只手從翅根處固定翅膀,抓起雞暴露腹部,另1只手食指和拇指沿龍骨腹外側(cè)邊緣觸摸,判斷龍骨是否發(fā)生損傷。根據(jù)龍骨是否存在彎曲和骨折,將龍骨狀態(tài)分為3類:正常龍骨(NK)、彎曲龍骨(DK)和骨折龍骨(FK)。正常龍骨從龍骨矢狀面尖端到尾部呈180°直線或從龍骨尖端到尾部偏離矢狀面范圍<0.5 cm;彎曲龍骨是指偏離范圍>0.5 cm,且龍骨表面光滑,無(wú)任何明顯位移或骨膜疤痕,也無(wú)凸起或腫脹。骨折龍骨指龍骨表面有明顯凸起,傷疤、腫脹、斷裂、位移或胼胝形成。彎曲和骨折同時(shí)存在判定為龍骨骨折,因?yàn)楣钦弁春蛡h(yuǎn)超過(guò)彎曲。在第25、29、33和37周,評(píng)估所有蛋雞龍骨損傷狀況。根據(jù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)觸診結(jié)果計(jì)算龍骨損傷發(fā)生率,最后1次龍骨損傷以解剖后視診為準(zhǔn)。

    1.3 樣品采集

    每個(gè)時(shí)間點(diǎn)評(píng)估蛋雞龍骨狀態(tài),記錄龍骨損傷發(fā)生率。最后1次觸診后剖殺雞只,將龍骨切除,肌肉和其他與龍骨連接軟組織完全移除,采集龍骨樣品,儲(chǔ)存于-80℃冰箱進(jìn)一步分析。

    1.4 顯微計(jì)算機(jī)斷層掃描分析

    將對(duì)照組和低鈣組蛋雞龍骨樣品(每組n=6)尾端分別切割1.3 cm,浸泡在4%多聚甲醛溶液中用于顯微計(jì)算機(jī)斷層掃描分析(Micro-CT,CT 50斯堪科醫(yī)療股份有限公司,瑞士蘇黎世)。檢測(cè)條件中體素尺寸16 m,源電位70 kV,電流200 A,積分時(shí)間300 ms,鋁濾波器0.5 mm。每次掃描均使用Mimics 19.0重構(gòu)。骨分析(ABA)軟件確定骨微結(jié)構(gòu)參數(shù):骨礦物質(zhì)密度(BMD)、骨表面積和組織體積比值(BV/TV)、骨骼表面(BS)、骨表面和骨組織比值(BS/BV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分離度(Tb.Sp)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)、各向異性的程度(DA)和連接密度(Conn.D.)。

    1.5 龍骨礦物質(zhì)元素濃度測(cè)定

    從對(duì)照組和低鈣組蛋雞龍骨樣品中,選擇距尾緣2 cm處切割1.0 g樣品,于液氮中研磨成粉末狀,微波消解儀消解,使用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS,Thermo iCAP Q,MA,USA)測(cè)定元素濃度。29種骨礦物質(zhì)元素,包括鋰(Li)、硼(B)、鈉(Na)、鎂(Mg)、鋁(Al)、硅(Si)、磷(P)、鉀(K)、鈣(Ca)、鈦(Ti)、釩(V)、鉻(Cr)、錳(Mn)、鐵(Fe)、鈷(Co)、鎳(Ni)、銅(Cu)、鋅(Zn)、砷(As)、硒(Se)、鍶(Sr)、鉬(Mo)、鎘(Cd)、錫(Sn)、銻(Sb)、鋇(Ba)、汞(Hg)、鉈(Tl)和鉛(Pb)。將每個(gè)龍骨樣品在含有5 mL 65%(W/W)HNO3和2 mL 30%H2O2(W/V)溶液中消解,然后用去離子水稀釋至10 mL。隨后在功率為1 800 W微波消解系統(tǒng)中再次消解樣品:100℃3 min,150℃10 min和180℃45 min。待樣本冷卻至室溫后,所有消解樣品均用超純水稀釋至50 mL,充分混合后用ICP-MS分析。ICP-MS操作參數(shù)如下:頻率27.12 MHz,反射功率1 550 W,載氣流量1.05 L·min-1,等離子氣體流量14.0 L·min-1,輔助氣體流量0.8 L·min-1,S/C溫度為2.7℃,采樣深度為6.0 mm,霧化器泵40 r·min-1,氧化物離子(156/140)<2.0%,雙電荷(70/140)<3.0%。所有礦物質(zhì)元素含量均采用空白和標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算。

    1.6 統(tǒng)計(jì)分析

    通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 22(SPSS Inc.Chicago,IL,USA)分析所有數(shù)據(jù)。使用Kolmogorov-Smirnov法對(duì)骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)、礦物密度及元素濃度數(shù)據(jù)檢驗(yàn)正態(tài)分布,均符合正態(tài)分布。使用非配對(duì)t檢驗(yàn)比較從對(duì)照組和低鈣組獲得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)差異,當(dāng)P<0.05時(shí)被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 龍骨損傷

    圖1 顯示蛋雞在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)龍骨損傷評(píng)估結(jié)果。在25、29、33和37周齡時(shí),低鈣組蛋雞龍骨損傷(包括龍骨彎曲和龍骨骨折)發(fā)生率高于對(duì)照組。自25~37周齡,對(duì)照組蛋雞正常龍骨比例分別為60.00%、50.00%、47.38%、38.89%;龍骨彎曲比例為25.00%、21.43%、26.31%、23.33%;龍骨骨折比例為15.00%、28.57%、26.31%、27.78%。低鈣組蛋雞正常龍骨比例分別為25.00%、18.75%、15.38%、12.50%;龍骨彎曲組比例為43.75%、31.25%、30.77%、31.25%;龍骨骨折組比例為31.75%、50.00%、53.85%和56.25%。與對(duì)照組相比,低鈣組蛋雞龍骨損傷率明顯增高且隨產(chǎn)蛋雞年齡增加,龍骨損傷發(fā)生率逐漸增加。

    圖1 對(duì)照組和低鈣飲食組蛋雞龍骨損傷率Fig.1 Keel damage rate of laying hens in control group(Con)and LCa group

    2.2 龍骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)和骨密度

    蛋雞龍骨顯微結(jié)構(gòu)參數(shù)和骨密度見(jiàn)表2。與對(duì)照組相比,低鈣組蛋雞TV、BV、BV/TV、Conn.D.、Tb.Th、Tb.Sp、BS、BS/BV、DA、BMD差異顯著(P<0.05),其中TV、Conn.D.、Tb.Sp、BS、BS/BV、BMD值降低,BV、BV/TV、Tb.Th、DA值增加。

    表2 對(duì)照組和低鈣飲食組蛋雞龍骨顯微結(jié)構(gòu)參數(shù)和骨密度Table 2 Bone microstructure parameters and BMD of laying hens in control group(Con)and(LCa)diet group

    續(xù)表

    2.3 龍骨礦物質(zhì)元素含量

    蛋雞龍骨中礦物質(zhì)元素含量見(jiàn)表3。與對(duì)照組相比,低鈣組蛋雞鉀、鐵、銅、鍶、鉬、錳、鋅、釩、硒、鉈、鉛含量增加(P<0.05),而鈣、鎳、鋰、汞含量下降(P<0.05)。對(duì)照組和低鈣組蛋雞龍骨中其他元素含量差異不顯著(P>0.05)。

    表3 對(duì)照組和低鈣飲食組蛋雞龍骨礦物質(zhì)元素濃度Table 3 Element concentrations of laying hens in control(Con)and low-calcium diet(LCa)groups

    3 討論

    日糧鈣水平對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和骨骼質(zhì)量起重要作用。骨質(zhì)疏松癥是蛋雞骨骼問(wèn)題主要原因之一,特別在產(chǎn)蛋高峰期,通常是由于日糧中鈣缺乏引起。低鈣飼糧飼喂蛋雞,股骨和脛骨骨密度明顯減小,說(shuō)明低鈣飲食加重骨質(zhì)疏松,改變骨結(jié)構(gòu)[16]。隨蛋雞產(chǎn)蛋周齡增加,骨骼中鈣含量減少導(dǎo)致骨骼脆性增加,骨折風(fēng)險(xiǎn)增加[17]。研究發(fā)現(xiàn),37周齡蛋雞龍骨損傷特別是龍骨骨折發(fā)生率顯著高于25周齡,表明龍骨骨折發(fā)生率隨蛋雞年齡增加而上升,且集中發(fā)生在產(chǎn)蛋初期至產(chǎn)蛋高峰期,50周齡后增長(zhǎng)速度變緩[18]。飼喂含1.5%低鈣日糧蛋雞龍骨偏離和骨折發(fā)生率明顯增高,表明添加1.5%有效鈣日糧對(duì)籠養(yǎng)蛋雞龍骨生長(zhǎng)和健康有負(fù)面影響,可能與低鈣日糧致蛋雞骨骼密度降低,結(jié)構(gòu)變化和骨骼元素穩(wěn)態(tài)失衡有關(guān)。

    Micro-CT作為骨健康評(píng)估工具,BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp、DA等關(guān)鍵結(jié)構(gòu)參數(shù)可準(zhǔn)確評(píng)估骨骼狀態(tài),反映骨骼質(zhì)量。高數(shù)值BV/TV、Tb.Th、Tb.N及低數(shù)值Conn.D.和BS/BV與骨機(jī)械應(yīng)變相關(guān),Tb.Th與骨強(qiáng)度呈正相關(guān)[19]。此外,骨密度已成為骨折風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)指標(biāo),可精確指示骨量變化,較低骨密度與較高骨損傷直接相關(guān)[20]。與對(duì)照組相比,低鈣組蛋雞龍骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)TV、Conn.D.、Tb.Sp、BS、BS/BV、BMD較低,而B(niǎo)V、BV/TV、Tb.Th、DA較高。在骨質(zhì)疏松早期,DA值通常增加,BV、BV/TV值增加表示骨代謝水平升高,說(shuō)明低鈣日糧可誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥。據(jù)報(bào)道,飼喂常規(guī)鈣添加劑量日糧(3.7%)和高鈣日糧(4.4%)蛋雞比飼喂低鈣日糧(2.62%)蛋雞具有較強(qiáng)骨強(qiáng)度和更大骨密度[21]。

    低鈣(1.5%)飲食導(dǎo)致骨質(zhì)疏松,骨質(zhì)量和骨強(qiáng)度降低,同時(shí)引起蛋產(chǎn)量和蛋質(zhì)量降低[16],低鈣飼糧誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松常表現(xiàn)為骨量、寬度和強(qiáng)度大幅降低,骨小梁微結(jié)構(gòu)變性[22-23]。蛋殼形成主要發(fā)生在夜間,此期間蛋雞停止進(jìn)食,蛋殼中鈣主要通過(guò)腸道吸收,25%~40%由骨骼提供[24],當(dāng)飼糧中鈣含量不足時(shí),蛋雞則通過(guò)吸收髓骨中鈣保證蛋殼形成[25]。因此,日糧中鈣含量較低促使蛋雞骨密度降低,反映骨密度和骨強(qiáng)度的龍骨骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)也顯著降低,抗骨折能力及骨強(qiáng)度下降,影響骨骼質(zhì)量,導(dǎo)致龍骨骨折和彎曲發(fā)生率增加。

    礦物質(zhì)是組織和液體中普遍存在的無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),對(duì)維持人類和動(dòng)植物某些物理化學(xué)過(guò)程非常必要。礦物元素(如鈣、鐵、磷)在骨礦化和代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用,如鈣補(bǔ)充劑通過(guò)增加蛋雞和肉雞骨穩(wěn)態(tài)、骨密度和骨強(qiáng)度改善骨質(zhì)量。鈣磷是骨骼發(fā)育最重要礦物質(zhì),鈣磷缺乏導(dǎo)致骨量減少及骨結(jié)構(gòu)改變,引發(fā)骨質(zhì)疏松癥[26]。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),低鈣日糧可降低蛋雞龍骨中鈣、鋰、汞和鎳含量,提高體內(nèi)鉀、鐵、銅、鍶、鉬、錳、鋅、釩、硒、鉈、鉛含量。某些礦物質(zhì)元素包括鉀、錳、鐵、鋅和硒對(duì)骨骼完整性和代謝均產(chǎn)生積極影響,當(dāng)飲食中缺乏礦物質(zhì)元素時(shí)對(duì)人和動(dòng)物骨含量和骨質(zhì)量產(chǎn)生不利影響[27]。研究發(fā)現(xiàn),低鈣組蛋雞龍骨鉀、鐵濃度增加,這可能與膳食鈣缺乏引起骨損傷修復(fù)有關(guān)。鉀含量在骨折蛋雞龍骨中升高可能與其成骨作用,促進(jìn)骨折愈合有關(guān)[28]。

    鐵是骨骼健康和發(fā)育基本元素,參與多種代謝過(guò)程,鐵過(guò)載或缺乏與骨吸收和形成不平衡導(dǎo)致的骨丟失呈正相關(guān),反之說(shuō)明平衡良好,骨穩(wěn)態(tài)需最佳鐵含量[29]。本研究中低鈣飲食母雞龍骨鐵水平增加更可能促進(jìn)骨吸收,導(dǎo)致骨損失和骨質(zhì)量降低。鋅、硒是骨骼生長(zhǎng)發(fā)育重要元素,尤其在骨折愈合過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本研究中鋅、硒含量增加可能與低鈣飼糧引起的龍骨骨折后愈合過(guò)程有關(guān),骨折及其愈合期骨組織及其附著的肌肉組織發(fā)生炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng),需鋅和硒等抗炎和抗氧化應(yīng)激元素蓄積。鋰元素促進(jìn)骨折愈合,而本試驗(yàn)中低鈣飼糧顯著降低鋰濃度,對(duì)龍骨骨折愈合產(chǎn)生不利影響。此外,鉛和汞為有毒元素,低鈣飲食蛋雞鉛含量增加對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有害影響。綜上所述,長(zhǎng)期低鈣日糧誘導(dǎo)蛋雞龍骨骨元素濃度穩(wěn)態(tài)失衡。

    4 結(jié)論

    飼喂含1.5%有效鈣的低鈣日糧通過(guò)改變蛋雞龍骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)和破壞元素濃度平衡,降低骨骼質(zhì)量,導(dǎo)致龍骨損傷發(fā)生率升高,產(chǎn)蛋期蛋雞給予高鈣日糧有利于維持蛋雞龍骨健康。

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