紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊明爽 邊雨 曲佳樂 高陸

【摘 要】 目的：制備紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑，并建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為紅景天配方顆粒的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。方法：按照標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備要求，制備十五批不同產(chǎn)地紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑。以紅景天苷作為定量檢測指標(biāo)，計算其出膏率及轉(zhuǎn)移率，采用高效液相色譜法建立標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜，用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》 軟件進(jìn)行指紋圖譜分析。結(jié)果：紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑平均出膏率為24.82 %;紅景天苷平均轉(zhuǎn)移率為48.45%，紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜共有11個共有峰，指認(rèn)出紅景天苷、酪醇2種成分。十五批紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度均大于0.90。結(jié)論：紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備規(guī)范，建立的指紋圖譜方法簡便有效，為紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量控制提供了較全面的信息。

【關(guān)鍵詞】

紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑;紅景天苷;指紋圖譜;轉(zhuǎn)移率;出膏率

【中圖分類號】R917?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2021）19-0022-05

Study on Preparation and Quality Evaluation of Rhodiola crenulata Standard Decoction

YANG Mingshuang BIAN Yu QU Jiale GAO Lu*

Jilin Modern Chinese Medicine Engineering and Research Center Co.，Ltd.，Changchun 130012，China

Abstract：

Objective To prepare Rhodiola crenulata standard decoction and establish the quality standard， and provide reference for quality control of Rhodiola crenulata formula granules. Methods Fifteen batches of Rhodiola crenulatas tandard decoction were prepared according to the standardization method. With salidroside as the detection index， the transfer rate and extractum rate were calculated and the HPLC chromatograms was established. Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM （2012） was used to analyze and compare the fingerprint. Results The average extractum rates of Rhodiola crenulata standard decoction were 24.82%， and average transfer rates were 48.45%，eleven common peaks were determined and two were identified. The similarity evaluations were carried out on 15 batches of Rhodiola crenulata standard decoction， and their similarities were all greater than 0.90. Conclusion The preparation method of Rhodiola crenulata standard decoction is standart， the established fingerprint method is simple and effective， and provides comprehensive information for the quality control of Rhodiola crenulata sformula granules.

Key words：

Rhodiola crenulata Standard Decoction; Salidroside; Fingerprint; Transfer rate; Extractum Rate

紅景天是景天科植物紅景天Rhodiola crenulata（Hook. f. et Thoms. ）H. Ohba的干燥根和根莖。主要分布西藏、四川、云南等西部地區(qū)[1]。中國古代第一部醫(yī)學(xué)典籍《神農(nóng)本草經(jīng)》，將紅景天列為藥中上品?；瘜W(xué)成分主要有酚類、萜類、黃酮類、苷類、木質(zhì)素類等，其中酪醇和紅景天苷被認(rèn)為是紅景天的主要藥理活性成分[2]。紅景天具有很高的藥用價值，具有抗輻射、抗疲勞、抗衰老、增強(qiáng)免疫力等功效[3-4]。

傳統(tǒng)湯劑存在服用、存儲、攜帶不便等問題。中藥配方顆粒和傳統(tǒng)湯劑相比具有質(zhì)量穩(wěn)定、療效可靠、便于攜帶、服用方便、便于保管等優(yōu)勢[5-7]。依據(jù)國家藥典委員會發(fā)布的《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)湯劑技術(shù)要求（征求意見稿）》，將標(biāo)準(zhǔn)湯劑作為衡量中藥配方顆粒是否與湯劑基本一致的標(biāo)準(zhǔn)參照物，以保障臨床用藥的準(zhǔn)確性和劑量的一致性[8-9]。本研究旨在開展紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為配方顆粒后續(xù)生產(chǎn)及質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 Ultimate3000型高效液相色譜儀（美國Thermo公司）;JY2003電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）;JY-8多鍋煎藥機(jī)（山東青州精誠醫(yī)藥設(shè)備制造有限公司）;Scientz-30F冷凍干燥機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）;SB-1200D 型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）

1.2 藥品與試劑 試劑：甲醇、乙腈為色譜純，來自Fisher公司，其他試劑均為分析純，水為超純水。

對照品：紅景天苷對照品（批號110818-20160705，純度：98.8%），酪醇對照品（批號 111676-200602）均來自中國食品藥品檢定研究院;

樣品：共收集紅景天飲片十五批，其中西藏7批;新疆4批;甘肅2批;河北2批;包含了紅景天的道地產(chǎn)區(qū)和主產(chǎn)區(qū)。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備 按照《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)湯劑技術(shù)要求（征求意見稿）》的技術(shù)要求確定制備方法：取紅景天飲片100 g，加水煎煮2次，第一次加9倍水浸泡30 min，武火煮沸，文火保持微沸60 min，用200目濾布過濾，第二次加7倍水煎煮，武火煮沸，文火保持微沸40 min，過濾，合并濾液;采用減壓濃縮方法進(jìn)行低溫濃縮，溫度不超過50 ℃，濃縮至100 mL;將濃縮液置于培養(yǎng)皿，-56 ℃凍存12 h 后冷凍干燥，即得紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉。

2.2 紅景天苷含量測定 參照2015版《中國藥典》[10]紅景天藥材項下紅景天苷含量測定方法中流動相體系，進(jìn)行了供試品溶液制備及相關(guān)方法學(xué)考察，確定檢測方法如下。

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水溶液（15∶85）為流動相;檢測波長為275 nm。色譜圖如圖1所示。

2.2.2 對照品溶液的制備 取紅景天苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含紅景天苷0.50 mg的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 方法學(xué)考察

2.2.4.1 線性關(guān)系的考察 精密稱取紅景天苷對照品4.68 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.4680 mg·mL-1的紅景天苷對照品貯備液。量取六份對照品貯備液各1 mL，分別加入0 、1 、2 、3 、4 、5 mL甲醇，搖勻，配制成濃度分別為0.4680、0.2340、0.1560、0.1170、0.0936、0.0780 mg·mL-1的對照品溶液，精密吸取5 μL，按照“2.2.1”項下色譜條件測定，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=21.666 x+0.2354，r=0.9993，結(jié)果表明，紅景天苷進(jìn)樣量在0.39 ～2.34 μg范圍內(nèi)線性良好。

2.2.4.2 精密度試驗(yàn) 取同一批（編號S1）紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑約0.25 g，精密稱定，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL。按“2.2.1” 項下色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果紅景天苷峰面積RSD=0.85%，表明儀器精密度良好。

2.2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批（編號S1）紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉約0.25 g，精密稱定，按“2.2.3”項下方法制備6份供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL。按“2.2.1” 項下色譜條件測定，測得同一批標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉中紅景天苷的含量均值為1.59 %，RSD =1.29%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批（編號S1）紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉約0.25 g，精密稱定，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL。按“2.2.1” 項下色譜條件測定，分別在制備后放置0、4、8、12、16、20 h進(jìn)樣檢測，結(jié)果紅景天苷峰面積RSD=1.04%（n=6），表明供試品溶液在20 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉（編號S1），約0.125 g（共6份），精密稱定，分置25 mL容量瓶中，分別精密加入一定量的紅景天苷對照品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.2.1”色譜條件進(jìn)行液相分析。結(jié)果，平均回收率為101.41%，RSD為1.54%（n=6），表明本方法準(zhǔn)確度良好。

2.2.5 指標(biāo)成分含量測定 按照“2.2.1”項下色譜條件測定十五批標(biāo)準(zhǔn)湯劑中紅景天苷的含量，并計算紅景天苷轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表2。

結(jié)果，十五批標(biāo)準(zhǔn)湯劑平均出膏率為24.82%，按照均值加減30%的范圍浮動為17.37%～32.27%;標(biāo)準(zhǔn)湯劑中紅景天苷平均含量為1.81%，按照均值加減30%的范圍浮動為1.26%～2.35%;紅景天苷平均轉(zhuǎn)移率為48.45%，按照均值加減30%的范圍浮動為33.92%～62.99%，本研究的十五批標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率、紅景天苷含量及轉(zhuǎn)移率均在此范圍內(nèi)，表明制備工藝規(guī)范，穩(wěn)定、可行。

2.3 指紋圖譜研究

2.3.1 色譜條件 色譜柱為Aglient C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）為流動相;梯度洗脫，0～20 min，5%～10%乙腈;20～75min，10%～20%乙腈;75～120 min，20%～30%乙腈。檢測波長為275 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為25 ℃。此色譜條件下，各色譜峰的分離度良好，峰形對稱。色譜圖如圖2所示。

2.3.2 混合對照品溶液的制備 取紅景天苷、酪醇對照品適量，加入甲醇制成每1 mL含紅景天苷0.500 mg、酪醇0.686 mg，即得混合對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 稱取紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，在稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 方法學(xué)考察

2.3.4.1 精密度試驗(yàn) 取同一批紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉約0.25 g，精密稱定，按照“2.3.3”方法制備供試品溶液一份，按“2.3.1”項下連續(xù)進(jìn)樣6次，以紅景天苷（S）為參照峰，計算各共有峰的相對保留時間及相對峰面積，結(jié)果RSD分別為0.20%、1.85%（n=6），均在3 %以內(nèi)，表明儀器精密度良好。

2.3.4.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉約0.25 g，精密稱定6份，按照“2.3.3”方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項下條件進(jìn)行測定，以紅景天苷（S）為參照峰，計算各共有峰的相對保留時間及相對峰面積，結(jié)果RSD分別為0.45%、2.01%（n=6），均在3 %以內(nèi)，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑干粉約0.25 g，精密稱定，按照“2.3.3”方法制備供試品溶液，分別在制備后放置0、4、8、12、16、20 h后，按照“2.3.1”項下條件進(jìn)行測定，以紅景天苷（S）為參照峰，計算各共有峰的相對保留時間及相對峰面積，結(jié)果RSD分別為0.23%、1.51%（n=6），均在3 %以內(nèi)，表明供試品溶液在20 h 穩(wěn)定性良好。

2.3.4.4 指紋圖譜的建立與分析 按照“2.3.1”項下色譜條件測定十五批紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜，將所得到的色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）軟件》，采用多點(diǎn)校正將譜峰自動匹配，中位數(shù)法計算得出樣品指紋圖譜的共有模式。紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜中呈現(xiàn)11個共有峰，通過與對照品圖譜比較，指認(rèn)峰2紅景天苷、峰3為酪醇，其中以紅景天苷為參照峰（S峰）。十五批次紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑HPLC指紋圖譜相似度均在0.9以上。色譜圖如圖3所示。

3 討論

《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)湯劑技術(shù)要求》強(qiáng)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)湯劑是衡量中藥配方顆粒是否與單味中藥湯劑基本一致的物質(zhì)基準(zhǔn)。本研究共收集十五批紅景天飲片樣品，分別來自4個主產(chǎn)地（西藏、新疆、甘肅、河北），試驗(yàn)所用樣品具有一定的代表性，并且按照規(guī)范步驟制備標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，通過監(jiān)測出膏率、指標(biāo)成分含量和轉(zhuǎn)移率指標(biāo)，表明標(biāo)準(zhǔn)湯劑工藝規(guī)范，穩(wěn)定、可行，并為后續(xù)配方顆粒研究及大生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，采用指紋圖譜及紅景天苷含量測定相結(jié)合，從整體定性及指標(biāo)成分定量方向進(jìn)行質(zhì)量控制，其中指紋圖譜是目前控制中藥材綜合分析最有效、最直觀的手段之一，能較全面地獲得重要化學(xué)群的特征信息，可以更加客觀地對中藥及標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行質(zhì)量評價和質(zhì)量控制[11-14]。本研究采用高效液相色譜法，建立紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑的指紋圖譜。通過色譜條件、供試品制備方法等考察，確定最佳檢測方法，紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜11個共有峰，并指認(rèn)出紅景天苷、酪醇2種成分，十五批標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜相似度均在0.9以上，方法準(zhǔn)確可行。

為紅景天標(biāo)準(zhǔn)湯劑、配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和臨床用藥提供了依據(jù)和研究思路。

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（收稿日期：2021-02-04 編輯：劉斌）