乳中地塞米松殘留量檢測方法的改進研究

宋 鴿，王克超，關蘊杰，秦思文，李慧娟，王 宏

（蒙牛乳業(yè)（沈陽）有限責任公司，遼寧沈陽110122）

地塞米松是一種人工合成的腎上腺皮質激素，具有抗病毒、消炎、促進泌乳等多種功效，在養(yǎng)殖業(yè)中被頻繁使用，造成動物乳源不同程度的藥物殘留，人體攝入過量可能會引起激素代謝紊亂、肥胖、骨質疏松等病癥，并可能產生致畸、致癌等風險[1-2]。

地塞米松殘留量項目為國家監(jiān)管機構重點抽檢指標，根據(jù)我國《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）、中華人民共和國農業(yè)部公告第235號的規(guī)定，地塞米松在牛奶中的最大殘留限量為0.3 μg/kg[3-4]。目前，地塞米松檢測方法主要有膠體金免疫層析法[5]、酶聯(lián)免疫法[6]、氣相色譜法[7]、氣相色譜-質譜法[8]和液相色譜-質譜法[9-11]等。其中液相色譜-質譜聯(lián)用法具有靈敏度高、特異性強、分析速度快等優(yōu)點被廣泛應用[12-14]。本文基于《牛奶和奶粉中地塞米松殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》（GB/T 22978—2008）和農業(yè)部1031號公告《動物源性食品中糖皮質激素類藥物多殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質譜法》，通過簡化色譜條件、優(yōu)化樣品前處理，更換離子源，建立一種快速有效的檢測方法，提高檢驗結果精準性。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

XSE204電子天平；UPLC-TQD高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子源（ESI-）；渦旋混合儀；旋轉蒸發(fā)儀；高速冷凍離心機；氮吹儀；固相萃取裝置。

1.1.2 試劑

色譜純乙腈、甲醇、色譜純甲酸；地塞米松標準物質（純度＞99%）。HLB固相萃取柱；雞心瓶 150 mL；一次性有機過濾器0.22 μm。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準曲線的制備

準確量取地塞米松標準溶液，用基質空白配制0.5 ng/mL、1 ng/mL、2.0ng/mL、5.0 ng/mL和10.0 ng/mL的標準工作液，繪制標準曲線，相關系數(shù)≥0.99。（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

1.2.2 樣品處理

稱取5～10 g樣品（精確到0.000 1 g）置于50 mL塑料離心管中，加入20 mL乙腈，渦旋混勻3 min，以8 000 r/min離心10 min，取上清液至雞心瓶中，用旋轉蒸發(fā)儀（50±5）℃水浴上減壓蒸發(fā)，將提取液濃縮至體積小于5 mL。

1.2.3 凈化

將提取液移至經預處理的HLB固相萃取柱中，分別用兩次10 mL一級水洗滌雞心瓶，將洗滌液移至HLB固相萃取柱中，棄去全部流出液，抽干，用8 mL甲醇以≤ 3 mL/min流速洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，（50±5）℃水浴中氮氣吹干，用1 mL的20%乙腈水溶解殘渣，經過0.22 μm一次性有機過濾器過濾后供液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定。

1.2.4 測定

（1）液相色譜儀參考條件。色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL；流速：0.3 mL/min。

（2）質譜參考條件。離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：負離子掃描；定量離子對：437.0/361.0，定性離子對：437.0/391.5；正離子掃描：定量離子對：393.2/373.2，定性離子對：393.2/355.2；流動相：A相：乙腈，B相：0.1%甲酸水，流動相梯度洗脫條件和流速見表1。

表1 流動相梯度洗脫條件和流速

1.2.5 結果計算：

式中：X-試樣中地塞米松殘留量，單位為μg/kg；C-從標準工作曲線得到的試樣溶液中被測組分的濃度，單位為ng/mL；V-試樣溶液定容體積，單位為mL；m-最終試樣溶液所代表的的試樣質量，單位為g。

2 結果與分析

2.1 改進研究試驗結果

2.1.1 標準曲線

依據(jù)1.2.1制作標準曲線，得出標準曲線y=155.845x+4.171 81，相關系數(shù)為r2=0.997 456，符合相關系數(shù)≥0.99的要求。

2.1.2 方法檢出限

由表2可知，依據(jù)《食品衛(wèi)生檢驗方法 理化部分總則》（GB/T 5009.1—2003）附錄A中色譜法檢出限為3倍儀器噪音/標準曲線回歸方程中的斜率[15]，理論計算出該方法檢出限為0.2 μg/kg，故添加0.2 μg/kg濃度的樣品，該濃度加標樣品能夠檢出，色譜峰型正常，回收率結果均在《實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）[16]中60%～120%，結果符合要求。

表2 方法檢出限結果

2.1.3 回收率

由表3可知，添加濃度為0.2 μg/kg、 0.3 μg/kg、 1.0 μg/kg共3個濃度點，每個點6次平行測試，回收率結果均在《實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）中60%～120%范圍內，結果符合要求。

表3 加標回收率結果

2.1.4 精密度

由表4可知，添加定量檢測限、限量值、5倍定量檢測限3個濃度樣品，連續(xù)檢測6個平行樣，相對標準偏差RSD%分別為：12.4%、7.3%、7.3%。依據(jù)《實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）F.3中精密度的要求，即當被測組分含量在0.1 μg/kg時，實驗室內變異系數(shù)≤43%，當被測組分含量在1 μg/kg時，實驗室內變異系數(shù)≤30%，符合方法要求。

表4 相對標準偏差結果

2.2 改進后方法對比

使用改進方法與國標方法分別檢測定量檢測限、限量值、5倍定量檢測限3個濃度樣品平行試驗，回收率結果對比，改進方法優(yōu)于國標方法，具體見表5。

表5 改進方法與國標方法對比表

3 結論與討論

本研究是應用高效液相色譜串聯(lián)質譜法建立一種快速有效檢測乳中地塞米松的檢測方法，與國家標準中的方法相比，本方法更改了液相色譜-串聯(lián)四級桿質譜儀的離子源，優(yōu)化了前處理過程，簡化了操作步驟，重新設定了質譜參數(shù)，縮短了分析時間，本研究標準曲線線性良好，回收率70.0%～102.7%，精密度7.3%～12.4%，滿足《實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）的標準要求，有效提高了檢測結果的準確性，滿足日常檢測需求，解決了實驗室資源配置問題，為保證乳的質量安全提供了技術保障，值得在實驗室中推廣。