氣相色譜法測定食品中的甜蜜素

鄧文輝 李二冬 楊瑾瑋 王攀峰

在食品中甜蜜素（環(huán)己基氨基磺酸鈉）的檢測中，通常把其置于低溫條件下，在酸性環(huán)境中與亞硝酸鈉反應(yīng)生成環(huán)己醇，產(chǎn)物與亞硝酸鈉繼續(xù)發(fā)生酯化反應(yīng)生成環(huán)己醇亞硝酸酯，結(jié)合周正香、楊娟等的研究成果，成酯反應(yīng)在一定體系條件下呈動態(tài)平衡，且隨著時間推移和環(huán)境條件變化，主產(chǎn)物環(huán)己醇亞硝酸酯逐漸轉(zhuǎn)化為副產(chǎn)物環(huán)己醇，而兩者峰面積的和基本不變。

本研究在試驗中發(fā)現(xiàn)，采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.97-2016中規(guī)定的正庚烷作為提取劑時，在環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇之間，還有另外兩個峰。王珮等的研究也表明，在重氮化反應(yīng)中會有暫時無法確定的峰，目前仍無法確定其是否是重氮化反應(yīng)的其他產(chǎn)物，同時，它們與環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇的分離度并不大，雖然我們多次進行色譜方法優(yōu)化，試圖將其分離度變大，但是效果并不理想。特別是當(dāng)檢品成分復(fù)雜時，更加困難。因此，我們設(shè)想能否將其全部視為目標(biāo)物，以減少實際檢驗中的困難，為后續(xù)甜蜜素測定方法的改進提供參考。為此，我們分別選取了健力寶、面包、腐乳、火腿等常見的液體類，低脂、低蛋白固體類，高蛋白固體類，以及高脂固體類試樣，對其檢出限、精密度、回收率等進行考察，看其能否滿足相關(guān)要求。為了減少干擾，上述四種樣品均為陰性樣。最后發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)其線性良好，檢出限、精密度、回收率均滿足要求，采用本方法，可以準(zhǔn)確測定常見食品中甜蜜素的含量。

一、試驗部分

1.儀器及試劑。儀器：島津GC-2010 plus高效氣相色譜儀，配氫火焰離子FID檢測器;梅特勒XS204 電子天平;梅特勒-托利多MS105DU 電子天平;KQ-500DE超聲波清洗器;IKA ?MS3漩渦混合器。

試劑：環(huán)己基氨基磺酸鈉（Dr.Ehrenstorfer.GmbH，純度99.9%）;正庚烷（色譜純）;氯化鈉（分析純）;石油醚（分析純，沸程為30-60℃）;氫氧化鈉（分析純）;硫酸（分析純）;亞鐵氰化鉀（分析純）;硫酸鋅（分析純）;亞硝酸鈉（分析純）;純化水。

2.儀器條件。檢測器溫度：260℃;進樣方式：分流：5.0∶1;進洋口溫度：230℃;進樣量：1μL;流速：5.0mL/min;氫氣：40mL/min、空氣： ? ? ? ? ? ? ? ? ?400mL/min、尾吹氣：30mL/min;色譜柱：SH-RTX-5（30m×0.53mm×1.0μm）;升溫程序：50℃保持5min，以7℃/min升溫到90℃，保持0.5min，再以20℃/min升溫到200℃，保持5min。

3.試驗方法。（1）標(biāo)準(zhǔn)液的制備。準(zhǔn)確稱取環(huán)己基氨基磺酸鈉0.1001g于100mL容量瓶中，用純化水定容至刻度，配制成濃度為0.9999mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)液線性考察。①線性考察。分別精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25mL、0. 5mL、1.0mL、4.0mL、8.0mL至5個100mL的容量瓶中，用純化水定容至刻度。分別準(zhǔn)確移取上述5個容量瓶中的溶液各10mL于50mL帶蓋離心管中，離心管置試管架上冰浴5min，加入5.00mL正庚烷、2.5mL亞硝酸鈉溶液、2.5mL硫酸溶液，搖勻，冰浴30min，期間振搖10次，加入2.5g氯化鈉，蓋上蓋后置旋渦混合器上振動1min，3000r/min低溫離心10min分層后取上清液1μl進行氣相色譜分析，記錄色譜峰面積，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，甜蜜素色譜圖見圖1，線性方程見圖2。

線性方程：y = 547.21x + 322.19，r 2=1

②樣品制備。按GB 5009-2016的要求對四種樣品進行樣品制備及衍生化。

二、結(jié)果與分析

1.檢出限確定。稱取健力寶樣品25g，加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.05mL;稱取打碎、混勻的5.0g面包試樣于50mL離心管中，加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.05mL;稱取5.0g腐乳試樣于50mL離心管中，加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.05mL;稱取打碎、混勻的火腿試樣5.0g于50mL離心管中，加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.05mL;分別按上述②的方法處理后測定，色譜峰高度均大于3倍噪音，故檢出限分別為：0.002g/kg、0.010g/kg、0.010g/kg、0.010g/kg。

2.精密度試驗。準(zhǔn)確稱取健力寶25.0g于燒杯中，加入7.01mL標(biāo)準(zhǔn)溶液;稱取打碎、混勻的5.0g面包試樣放于50mL離心管中，加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液8.00mL;稱取5.0g腐乳試樣放于50mL離心管中，加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液3.25mL;稱取打碎、混勻的火腿試樣5.0g放于50mL離心管中，加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.50mL，按上述②的方法處理，在上述色譜條件下連續(xù)進樣6次，結(jié)果見表1。

3.回收率試驗。分別對四種樣品進行3個水平的6次加標(biāo)回收試驗，結(jié)果見表2。

按照本試驗中方法對四種類型的檢品進行檢出限、精密度、回收率的驗證，均滿足相關(guān)要求，有利于日常檢驗工作的開展，為后續(xù)甜蜜素檢測方法的改進提供了新的思路。

作者簡介：鄧文輝（1985-），男，工程師，碩士研究生，研究方向為食品檢驗。