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    膠體金快速檢測(cè)技術(shù)在中獸藥散劑中違法添加化學(xué)藥物檢測(cè)的應(yīng)用

    2021-11-06 06:54:54趙興鑫何立寧張?jiān)葡?/span>楊曉霞
    今日畜牧獸醫(yī) 2021年10期
    關(guān)鍵詞:銀翹散劑磺胺類(lèi)

    趙興鑫,田 梅,何立寧,蘇 青,張?jiān)葡觥顣韵?/p>

    (1.石家莊市畜產(chǎn)品和獸藥飼料質(zhì)量檢測(cè)中心 050000;2.石家莊市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊(duì) 050000;3. 石家莊市藁城區(qū)畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)站 050000;4. 行唐縣畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)站 050000)

    隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,抗生素殘留和耐藥問(wèn)題也凸顯出來(lái)。中藥是我國(guó)的瑰寶,守護(hù)了華夏兒女幾千年,具有無(wú)殘留、副作用低等優(yōu)點(diǎn)。減少抗生素殘留、耐藥以及副作用問(wèn)題,中藥是最佳的解決辦法。但在農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于獸藥產(chǎn)品質(zhì)量的通報(bào)中,時(shí)常發(fā)現(xiàn)有關(guān)于中獸藥散劑中非法添加化學(xué)藥物的不合格通報(bào),給禽畜養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的安全隱患和經(jīng)濟(jì)損失。

    目前中獸藥散劑中非法添加化學(xué)藥物檢測(cè)常用的方法主要有顯微鏡檢查法、薄層色譜法、高效液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等,這些方法雖然技術(shù)相對(duì)成熟,但操作較為復(fù)雜,需要專(zhuān)業(yè)性很強(qiáng)的技術(shù)人員。膠體金免疫層析法是近來(lái)年用于快速檢測(cè)及診斷的新技術(shù),適用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩查,具有操作簡(jiǎn)單、省時(shí)省力、結(jié)果直觀等優(yōu)點(diǎn),更適用于基層檢測(cè)快速檢測(cè)工作。

    本實(shí)驗(yàn)采用膠體金免疫層析法對(duì)健胃散、白頭翁散和銀翹解散三種常見(jiàn)的中獸藥散劑進(jìn)行研究,通過(guò)對(duì)不同濃度的磺胺類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)抗生素藥物的測(cè)定,證明該方法的可行性,為相關(guān)快速檢測(cè)方法的建立提供參考。

    1 儀器和材料

    膠體金檢測(cè)讀數(shù)儀(深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司),磺胺類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)膠體金快速檢測(cè)卡(深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司),漩渦混合儀(IKA),離心機(jī)(Sigma)。實(shí)驗(yàn)用樣本提取液(深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司),磺胺類(lèi)混合對(duì)照品(磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑混合對(duì)照品100μg/mL)、氟喹諾酮類(lèi)混合對(duì)照品(氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星混合對(duì)照品100μg/mL)。

    2 方法

    取樣品1±0.01g,放入50mL離心管中,加入20mL樣本提取液,漩渦混合2min,室溫下4000r/min離心5min。取上清液200μL加入微孔條中,反復(fù)抽吸5次使樣品混勻,插入膠體金免疫層析檢測(cè)卡,計(jì)時(shí)5min后,直接目測(cè)結(jié)果。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 基質(zhì)干擾考察

    膠體金免疫層析法對(duì)樣本的處理是有一定要求的,由于免疫反應(yīng)是一種生物反應(yīng),最終滴加入檢測(cè)卡孔中的液體pH要在一定范圍內(nèi),一般在5~8之間,否則容易出現(xiàn)假陽(yáng)性或無(wú)效的情況;而中獸藥散劑本身物質(zhì)成分復(fù)雜,又具有較深的顏色,易造成干擾。所以在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)針對(duì)樣本提取液(一定濃度的緩沖體系)和稀釋倍數(shù)做了大量的研究,最終確定了該方法??梢酝ㄟ^(guò)圖片清晰地看到健胃散、白頭翁散、銀翹解散在基質(zhì)狀態(tài)下試紙條顯示明顯的陰性,偶有淡黃色背景,但不影響結(jié)果判斷。

    3.2 加標(biāo)實(shí)驗(yàn)

    健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散,分別稱(chēng)取1g,至50mL離心管,取磺胺類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)品1~100mL的容量瓶中,用甲醇稀釋至定量得到濃度為1μg/mL的對(duì)照品溶液,取稀釋后的對(duì)照品溶液80μL加入已稱(chēng)好樣品的離心管中心,相當(dāng)于中藥散劑中磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑的含量均為80ng,磺胺類(lèi)總含量為400ng,同時(shí)做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn),按“2”方法處理后,待測(cè)液的磺胺類(lèi)添加物的濃度為20ppb,插入磺胺類(lèi)膠體金免疫層析檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè),分別記錄結(jié)果,詳見(jiàn)圖1,各個(gè)加標(biāo)樣品檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性,表明方法準(zhǔn)確性良好。

    圖1 健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散的陰陽(yáng)性檢測(cè)(磺胺類(lèi))

    健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散,分別稱(chēng)取1g,至50mL離心管,取氟喹諾酮類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)品1~100mL的容量瓶中,用甲醇稀釋至定量得到濃度為1μg/mL的對(duì)照品溶液,取稀釋后的對(duì)照品溶液20μL加入已稱(chēng)好樣品的離心管中心,相當(dāng)于中藥散劑中氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星的含量均為20ng,氟喹諾酮類(lèi)總含量為80ng,同時(shí)做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn),按“2”方法處理后,待測(cè)液的氟喹諾酮類(lèi)添加物的濃度為4ppb,插入氟喹諾酮類(lèi)膠體金免疫層析檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè),分別記錄結(jié)果,詳見(jiàn)圖2,各個(gè)加標(biāo)樣品檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性,表明方法準(zhǔn)確性良好。

    圖2 健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散的陰陽(yáng)性檢測(cè)(氟喹諾酮類(lèi))

    4 討論

    根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,健胃散、白頭翁散、銀翹解散三種中獸藥散劑在本實(shí)驗(yàn)方法下檢測(cè)未出現(xiàn)假陽(yáng)性或無(wú)效的情況,說(shuō)明該方法的提取溶劑和稀釋倍數(shù)適合,減少了色素及其他雜質(zhì)的影響。同時(shí),在加入的藥物對(duì)照品的樣品中,均有檢出,呈現(xiàn)明顯的陽(yáng)性結(jié)果,且檢測(cè)限均達(dá)到痕量級(jí)別,更進(jìn)一步確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    此方法的優(yōu)勢(shì)十分明顯,各檢測(cè)項(xiàng)目的靈敏度可以與其他檢測(cè)手段媲美,可以對(duì)大量樣本的多個(gè)靶標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行提前檢測(cè),初步確定違法行為。膠體金免疫層析法主要優(yōu)勢(shì)在于操作簡(jiǎn)單、省時(shí)省力,相對(duì)于傳統(tǒng)方法來(lái)說(shuō),儀器設(shè)備要求較少,檢測(cè)費(fèi)用較低,結(jié)果直觀,適合基層使用,該方法推廣應(yīng)用空間廣闊。

    中獸藥散劑品類(lèi)眾多,成分復(fù)雜,且在種植及炮制時(shí)有差異,而膠體金免疫技術(shù)易受樣本基質(zhì)干擾,例如樣品本身色素較多、ph值過(guò)低或過(guò)高、相似結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)成分等因素,易出現(xiàn)假陽(yáng)性或無(wú)效情況。為解決此類(lèi)問(wèn)題,需要調(diào)配合適的提取溶劑和調(diào)整合適的稀釋倍數(shù)來(lái)降低基質(zhì)干擾。本文只針對(duì)三種中獸藥散劑和八種化學(xué)藥物進(jìn)行研究,對(duì)于其他中獸藥散劑的非法添加化藥的檢測(cè),需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

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