抑霉乳酸菌脫毒特性及青貯應(yīng)用的研究

趙雅茹 許慶方 高文俊 郭剛 陳雷 玉柱

（1. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，晉中 030801；2. 內(nèi)蒙古正時(shí)生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司，呼和浩特 010000；3. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，晉中030801；4. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京 100193）

青貯飼料產(chǎn)業(yè)的壯大促進(jìn)畜牧業(yè)迅速發(fā)展和農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整。青貯飼料優(yōu)點(diǎn)較多，在反芻動(dòng)物日糧中不可或缺，在畜牧業(yè)中有著巨大的發(fā)展?jié)撃埽?］。青貯飼料乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）分為同型發(fā)酵和異型發(fā)酵。同型發(fā)酵乳酸菌在青貯飼料發(fā)酵過(guò)程中起促進(jìn)作用，產(chǎn)生大量乳酸（lactic acid，LA），降低青貯環(huán)境pH，阻止?fàn)I養(yǎng)成分分解［2］。常見(jiàn)的是植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum），乳球菌屬（Lactococcus）也有利于酸性環(huán)境的形成［3］，屎腸球菌（Enterococcus faecium）、乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）等也經(jīng)常被應(yīng)用［4］。異型發(fā)酵LAB主要有布氏乳桿菌（L. buchneri）、短乳桿菌（L. brevis）、腸膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides），這類(lèi)LAB產(chǎn)生乙酸（AA），抑制腐敗菌生長(zhǎng)且影響青貯有氧穩(wěn)定性［5-6］，研究表明將短乳桿菌添加到青貯飼料中，可以改善飼料的發(fā)酵品質(zhì)，同時(shí)提高有氧穩(wěn)定性［7］。

青貯飼料密封不嚴(yán)或開(kāi)封使用時(shí)霉菌增殖會(huì)導(dǎo)致飼料腐敗。霉菌通過(guò)呼吸作用降解營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和有機(jī)酸，分解纖維素（cellulose），破壞細(xì)胞壁，損壞青貯莖葉結(jié)構(gòu)，使青貯感官品質(zhì)下降［8］。從青貯飼料中分離出來(lái)的主要霉菌有曲霉菌屬（Aspergillus）、青霉菌屬（Penicillium）、毛霉菌屬（Mucor）、鐮刀菌屬（Fusarium）等［9］，其分泌的二級(jí)代謝產(chǎn)物稱(chēng)為霉菌毒素［10］，它會(huì)造成飼料霉變、品質(zhì)降低，嚴(yán)重者使動(dòng)物中毒死亡［11］，其中危害較大的是黃曲霉毒素B1（AFB1）［12］。

LAB可以顯著抑制霉菌生長(zhǎng)，并且可以降解生物毒素。研究發(fā)現(xiàn)，LAB明顯抑制黃曲霉菌菌絲的生長(zhǎng)，降解毒素［13］。LAB抑制霉菌生長(zhǎng)的機(jī)制可能與其分泌的有機(jī)酸有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)，LAB分泌的有機(jī)酸可以抑制霉菌生長(zhǎng)，減少毒素產(chǎn)生［14］。同時(shí)，其分泌的抗真菌成分破壞霉菌菌絲壁，抑制霉菌分生孢子萌發(fā)，從而減少毒素積累［15］。

隨著我國(guó)草牧業(yè)的推進(jìn)，青貯飼料的諸多優(yōu)勢(shì)決定了其發(fā)展前景廣闊。但是霉菌增殖導(dǎo)致青貯飼料腐敗，給草牧業(yè)和乳制品行業(yè)帶來(lái)巨大損失，且有些霉菌產(chǎn)生毒素，嚴(yán)重危害動(dòng)物及人類(lèi)健康。特異性LAB在抑制精飼料發(fā)霉變質(zhì)等方面研究較多，而在青貯飼料抑霉方面的研究較少。通過(guò)添加具有分泌抗真菌活性物質(zhì)的LAB來(lái)抑制霉菌生長(zhǎng)，吸附毒素，改善青貯飼料品質(zhì)，提升安全性能，對(duì)青貯產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。本研究著力于分析LAB對(duì)霉菌形態(tài)結(jié)構(gòu)破壞及活性物質(zhì)鑒別，闡明LAB抑霉機(jī)制，為優(yōu)質(zhì)安全青貯提供高效菌劑。

1 材料與方法

1.1 材料

黃曲霉菌（來(lái)自發(fā)霉變質(zhì)的青貯飼料），植物乳桿菌（來(lái)自發(fā)酵良好的青貯飼料），植物乳桿菌無(wú)細(xì)胞上清液（CFS），霉菌孢子液（106孢子/mL），磷酸緩沖液（PBS），AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，AFB1工作液（5 μg/mL），2020年9月從山西農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)田隨機(jī)采取的全株玉米樣品制成的青貯飼料。

1.2 方法

1.2.1 黃曲霉菌產(chǎn)毒性能分析 將黃曲霉菌送至北京清析技術(shù)研究院按照 GB/T 30955-2014、GB 5009.24-2016 的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其產(chǎn)毒情況進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2 植物乳桿菌及黃曲霉菌形態(tài)觀察 離心植物乳桿菌發(fā)酵液，加入PBS再次離心，之后加入戊二醛（glutaric dialdehyde），置于4℃冰箱固定24 h，重復(fù)以上離心步驟，使用不同濃度乙醇（ethanol）脫水，再用叔丁醇（tert-butanol）洗脫溶解，將含有樣品的觀察皿放入4℃冰箱冷凝約10 min，取出置于真空抽氣泵中，待干燥冷凝過(guò)夜之后使用掃描電鏡觀察。將黃曲霉菌用戊二醛在pH7.2的0.1 mol/L的PBS中固定菌絲3 h，將固定菌絲用相同PBS 洗滌3次，采用不同濃度乙醇脫水，脫水后的樣品干燥，鍍金，進(jìn)行掃描電鏡觀察。

1.2.3 植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌的破壞 在MRS肉湯中接種濃度為106孢子/mL 的黃曲霉孢子懸浮液，28℃下培養(yǎng)7 d，取出放入4℃冰箱中，作為對(duì)照組；將植物乳桿菌接種到MRS肉湯中，35℃下培養(yǎng)2 d，之后接種同等濃度的孢子懸浮液，28℃下培養(yǎng)7 d，作為處理組。然后用掃描電鏡觀察植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌造成的破壞。

1.2.4 抗真菌活性化合物的測(cè)定與分析 利用高效液相色譜法（HPLC）分析所含有的抗真菌活性化合物。首先對(duì)植物乳桿菌CFS進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)試驗(yàn)，用1 mol/L的NaOH將CFS的pH調(diào) 節(jié) 為4.0、5.0、6.0，加入到PDA培養(yǎng)基中，倒平板，在平板中心接種106孢子/ mL的霉菌孢子懸液，于28℃下培養(yǎng)7 d。以未經(jīng)調(diào)整pH的CFS作為對(duì)照組。進(jìn)行3次重復(fù)，用尺子測(cè)量抑菌圈直徑并記錄。

1.2.5 植物乳桿菌吸附黃曲霉毒素 在MRS肉湯中接種1×1010CFU/mL的植物乳桿菌，離心菌液，倒掉上清液，用PBS清洗菌體沉淀3次，之后加入AFB1工作液，37℃下培養(yǎng)30 min，以上述相同條件離心，將上清液保存在-20℃的冰箱中，使用HPLC檢測(cè)AFB1的濃度。對(duì)照組為不含乳酸菌的AFB1工作液。對(duì)照組和處理組各3個(gè)重復(fù)。除此之外，測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間及加熱處理對(duì)植物乳桿菌吸附AFB1的影響。根據(jù)以下公式計(jì)算吸附率：

AFB1吸附率（%）=（1-SAFB1/CAFB1）×100

SAFB1：樣品中 AFB1 的峰面積；CAFB1：對(duì)照中AFB1 的峰面積。1.2.6 植物乳桿菌在全株玉米青貯飼料中的應(yīng)用效果 在全株玉米青貯飼料中添加植物乳桿菌及黃曲霉菌，測(cè)定發(fā)酵0 d、24 d、48 d的指標(biāo)。青貯后根據(jù)德國(guó)農(nóng)業(yè)協(xié)會(huì)的青貯感官評(píng)分法對(duì)青貯飼料的整體發(fā)酵進(jìn)行評(píng)價(jià)［16］。制備不同時(shí)期的樣品懸液，使用涂布平板法計(jì)數(shù)LAB及霉菌。采用苯酚-次氯酸鈉比色法測(cè)定氨態(tài)氮［17］；HPLC測(cè)定有機(jī)酸含量［18］；pH計(jì)測(cè)定青貯浸提液的pH值。干物質(zhì)（DM）、粗蛋白（CP）、粗脂肪（EE）、粗灰分（Ash）根據(jù)AOAC的方法測(cè)定［19］；中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）根據(jù)Van Soest法測(cè)定［20］；高錳酸鉀滴定法測(cè)定鈣（Ca）［21］，鉬黃比色法測(cè)定磷（P）［22］；蒽酮-硫酸比色法測(cè)定可溶性糖（WSC）［23］；高氯酸水解-蒽酮比色法測(cè)定淀粉（starch）［24］。飼料發(fā)酵48 d后，樣品送到藍(lán)德雷檢測(cè)公司，近紅外檢測(cè)法評(píng)定總可消化養(yǎng)分（TDN）、產(chǎn)奶凈能（NEL）、維持凈能（NEM）、增重凈能（NEG）、相對(duì)牧草質(zhì)量（RFQ）及產(chǎn)奶量（Kg Milk）。飼料樣品于室溫下開(kāi)口放7 d，觀察霉變情況，且將霉變飼料送至北京清析技術(shù)研究院測(cè)定其產(chǎn)毒情況。發(fā)酵結(jié)束后開(kāi)封，在裝有樣品的不同青貯袋中間插入測(cè)溫棒，儀器每隔30 min記錄一次溫度，當(dāng)儀器顯示飼料中心溫度大于周?chē)鷾囟?℃時(shí)［25］，此時(shí)認(rèn)定飼料開(kāi)始有氧腐敗，并且記錄時(shí)間。相對(duì)飼喂價(jià)值（RFV）及康乃爾凈碳水化合物-蛋白質(zhì)體系（CNCPS）中碳水化合物的組分含量根據(jù)以下公式計(jì)算：

RFV=DMI（%BW）×DDM（%DM）/1.29；

DMI（%BW）=120/NDF（%DM）；

DDM（%DM）=88.9-0.779×ADF（%DM）

DMI：干物質(zhì)采食量；BW：體重；DDM：可消化干物質(zhì)。

CHO=100-CP-EE-ASH；CC=LIGNIN×2.4；CB1=STARCH；CA=WSC。

CHO：總碳水化合物；CC：不可利用纖維；CB1：淀粉；CA：可溶性糖。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理 所測(cè)得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel整理，之后通過(guò)SPSS 24.0的統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），然后采用Duncan法進(jìn)行多重比較分析，以P＜0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，之后使用Origin 2019進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果

2.1 黃曲霉菌產(chǎn)毒性能分析

黃曲霉菌產(chǎn)毒情況示于表1中，只產(chǎn)生26.0 μg/kg的AFB1和2.8 μg/kg的AFB2。

表1 霉菌產(chǎn)毒特性Table 1 Toxigenic characteristics of mold

2.2 植物乳桿菌及黃曲霉菌形態(tài)觀察

兩種菌株在掃描電鏡下的形態(tài)觀察如圖1所示，植物乳桿菌兩端圓，中間直，呈圓端直桿狀，單個(gè)、成對(duì)或短鏈狀出現(xiàn)；黃曲霉菌分生孢子梗粗糙，頂囊呈圓球形，菌絲表面光滑，無(wú)褶皺，且分生孢子在小梗上鏈狀著生。

圖1 植物乳桿菌（A）及黃曲霉菌（B）掃描電鏡圖Fig. 1 Scanning electron micrograph of L. plantarum（A）and A. flavus（B）

2.3 植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌的破壞

植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌形態(tài)破壞如圖2所示。左邊是正常黃曲霉菌的菌絲體，表面光滑，無(wú)褶皺斷裂，菌絲生長(zhǎng)良好，沒(méi)有任何生長(zhǎng)異常；右邊是用植物乳桿菌處理過(guò)的黃曲霉菌，與左邊相比，觀察到菌絲生長(zhǎng)異常，表面不光滑，有大量皺縮和扭曲狀態(tài)，菌絲體形態(tài)遭到破壞。證明植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用。

圖2 正常菌絲（A）及異常菌絲（B）掃描電鏡圖Fig. 2 Scanning electron micrograph of normal hyphae（A）and abnormal hyphae（B）

2.4 抗真菌活性化合物的測(cè)定與分析

CFS中存在LA、AA、丙酸（PA）及苯乳酸（PLA），其含量如圖3所示。4種有機(jī)酸的含量分別為19.770、8.870、2.900、0.006 mg/mL，LA最 多，顯著高于其他有機(jī)酸（P＜0.05）。由表2可知，與對(duì)照組相比，CFS進(jìn)行pH調(diào)節(jié)后，隨pH增加，酸性減弱，抑菌圈直徑縮小，乳酸菌抑制霉菌能力減弱，最后抑菌能力徹底消失；相反，CFS的pH值越小，酸性越強(qiáng)，抑菌圈直徑越大，對(duì)霉菌的抑制效果越高。未調(diào)節(jié)pH和pH 4.0的CFS中，抑菌活性最大，pH為6.0時(shí)，抑菌活性消失。表明植物乳桿菌CFS的抑菌活性受到pH值變化的影響較大。

表2 pH對(duì)CFS抑霉活性的影響Table 2 Effect of different pH on the inhibition of mould activity of cell-free supernatant

圖3 CFS中的有機(jī)酸含量Fig. 3 Content of organic acid in CFS

2.5 植物乳桿菌吸附黃曲霉毒素

植物乳桿菌對(duì)AFB1的吸附率為59.40%。不同培養(yǎng)時(shí)間及加熱處理下，植物乳桿菌對(duì)AFB1的吸附效率如圖4所示。培養(yǎng)4 h后吸附效率最高，為59.53%，4 h熱處理后，吸附效率最低，為59.25%。熱處理30 min及4 h后，吸附效率顯著降低（P＜0.05）。未加熱時(shí)，植物乳桿菌對(duì)AFB1的吸附效率不會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而吸附更多毒素。

圖4 不同處理對(duì)AFB1吸附率的影響Fig. 4 Effects of different treatments on the adsorption rate of AFB1

2.6 植物乳桿菌在全株玉米青貯飼料中的應(yīng)用效果

全 株玉米原料的DM為68.30%，CP含量為8.95%，NDF與ADF的 含 量 分 別 為57.57%和34.47%，WSC的含量為11.71%，淀粉的含量為18.64%。

由表3可知，L和L+A組等級(jí)為優(yōu)，且L組評(píng)分最高，CK和A組等級(jí)為良。接種植物乳桿菌的處理組散發(fā)出較濃的芳香味，發(fā)酵品質(zhì)較高，莖葉結(jié)構(gòu)完整，青貯后飼料的顏色與青貯前飼料的顏色較為接近。

表3 全株玉米青貯飼料的感官評(píng)定Table 3 Sensory evaluation of whole crop corn silage

在不同發(fā)酵時(shí)期測(cè)定青貯飼料中LAB及霉菌數(shù)量，結(jié)果如表4所示。隨發(fā)酵天數(shù)增加，各處理組的LAB數(shù)量先增加后減少，L和L+A組的LAB數(shù)量顯著高于CK和A組（P＜0.05）。在24 d時(shí)，A組LAB的數(shù)量顯著高于CK組（P＜0.05）。在0 d時(shí)，存在霉菌，且霉菌數(shù)量之間沒(méi)有顯著差異，隨發(fā)酵天數(shù)增加，霉菌隨之消失。

表4 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中乳酸菌及霉菌數(shù)量Table 4 Number of lactic acid bacteria and molds during fermentation of whole crop corn silage（log CFU/g）

全株玉米青貯飼料在發(fā)酵0 d、24 d、48 d后，氨態(tài)氮及pH值變化如圖5所示。隨發(fā)酵時(shí)間增加，氨態(tài)氮含量逐漸上升，pH值逐漸下降。在0 d時(shí)，4組之間的氨態(tài)氮含量及pH值沒(méi)有顯著差異。在24 d時(shí)，CK和A組的氨態(tài)氮含量及pH值高于L及L+A組（P＜0.05）。在48 d時(shí)，L組的氨態(tài)氮含量顯著低于CK組（P＜0.05），雖然L組的含量低于A和L+A組，但是沒(méi)有顯著差異。

圖5 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中氨態(tài)氮（A）及pH（B）的變化Fig. 5 Changes of ammonia nitrogen（A）and pH（B）during the fermentation of whole crop corn silage

有機(jī)酸的含量變化如表5所示。在不同發(fā)酵時(shí)期都產(chǎn)生了乳酸和乙酸。乳酸和乙酸含量與青貯飼料的發(fā)酵時(shí)間呈正相關(guān)，發(fā)酵時(shí)間越長(zhǎng)，其含量越多。在24 d和48 d時(shí)，L以及L+A組的乳酸和乙酸含量高于CK及A組（P＜0.05）。在48 d時(shí)，CK及A組的丙酸含量顯著低于L及L+A組（P＜0.05）。在3個(gè)不同時(shí)期沒(méi)有丁酸產(chǎn)生。

表5 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中有機(jī)酸含量Table Organic acid content during fermentation of whole crop corn silage

全株玉米青貯飼料在發(fā)酵0 d、24 d及48 d后，營(yíng)養(yǎng)成分的變化如表6所示。隨發(fā)酵時(shí)間增加，DM及其DMR下降，0 d時(shí)，4組之間含量差異不顯著，24 d和48 d時(shí)，CK和A組的DM及其DMR顯著低于L和L+A組（P＜0.05）；CP及Ash含量上升，EE下降，24 d時(shí)，L+A組的CP含量顯著低于其他組（P＜0.05），且CP含量最低為7.5%，0 d和48 d時(shí)，4組之間CP含量差異不顯著，48 d后，L組CP含量最高，為10.85%，EE及Ash含量在4種不同處理下差異不顯著，48 d時(shí)，L+A組的EE含量最低，CK組的Ash含量最高；NDF和ADF含量下降，0 d時(shí)，4組之間沒(méi)有顯著差異，且在0 d時(shí)值最大，NDF為59%，ADF為36%，24 d和48 d時(shí)，CK及A組 的NDF和ADF含量顯著高于L及L+A組（P＜0.05）。添加微生物對(duì)Ca及P的含量變化沒(méi)有顯著影響，發(fā)酵24 d及48 d后，Ca及P的含量顯著高于0 d時(shí)的含量（P＜0.05）。WSC及Starch隨青貯發(fā)酵時(shí)間增加出現(xiàn)降低，0 d時(shí)，4組WSC及Starch含量之間沒(méi)有顯著差異，24 d和48 d時(shí)，L及L+A組的WSC含量顯著高于CK及A組（P＜0.05），L及L+A組的Starch含量顯著低于CK及A組（P＜0.05）。

RFV的含量變化如圖6所示。RFV含量隨發(fā)酵時(shí)間增加呈現(xiàn)上升。0 d時(shí)，CK組與其余3組的RFV之間沒(méi)有顯著差異，約為97%。隨發(fā)酵時(shí)間增加，24 d和48 d時(shí)，CK及A組的RFV顯著低于L及L+A組（P＜0.05）。

圖6 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中相對(duì)飼喂價(jià)值變化Fig. 6 Changes in relative feeding value during the fermentation of whole crop corn silage

發(fā)酵48 d后，TDN、NEL、NEM、NEG、RFQ、產(chǎn)奶量（Kg Milk）的變化如表7所示。與CK組相比，添加微生物后NEG有所提高，且L+A組的含量顯著高于CK組（P＜0.05）。

表7 全株玉米青貯飼料飼用價(jià)值Table 7 Feeding value of whole crop corn silage

表6全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定Table 6 Determination of nutritional components during the fermentation of whole crop corn silage

發(fā)酵結(jié)束后，CNCPS體系中碳水化合物的組分變化如表8所示。4組的CHO含量沒(méi)有顯著差異。CK組的CC含量高于其余3組，但是沒(méi)有顯著差異。CK及A組的CB1含量顯著高于L以及L+A組（P＜0.05）。L組的CA含量顯著高于CK及A組（P＜0.05），但是與L+A組之間差異不顯著。

表8 CNCPS體系中碳水化合物組分變化Table 8 Changes of carbohydrate composition in CNCPS system

發(fā)酵結(jié)束后，將4組樣品分別裝在不同青貯袋中，在室溫下開(kāi)口放置7 d，觀察飼料霉變情況。如圖7所示，A組發(fā)霉情況最嚴(yán)重，飼料表面及內(nèi)部均有大量霉菌生長(zhǎng)，且有異味；L組發(fā)霉情況最輕，只有零星部位出現(xiàn)霉菌。L+A組發(fā)霉情況介于L和A組之間，內(nèi)部沒(méi)有發(fā)霉，飼料表面發(fā)霉，發(fā)霉情況稍重于L組。CK組發(fā)霉情況重于L+A組。

圖7 飼料有氧暴露下發(fā)霉情況Fig. 7 Mold development under the aerobic exposure of feed

4組樣品二次發(fā)酵后，飼料表面出現(xiàn)霉菌，A組最嚴(yán)重。將樣品送到檢測(cè)公司測(cè)定霉菌的產(chǎn)毒情況。4組樣品中均未檢測(cè)出毒素，表明添加的產(chǎn)毒霉菌在飼料中沒(méi)有產(chǎn)生毒素。

發(fā)酵結(jié)束后，對(duì)4組飼料及周?chē)鷾囟冗M(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，以繪制有氧穩(wěn)定性曲線，如圖8所示。4組青貯飼料的中心溫度變化與周?chē)鷾囟鹊淖兓厔?shì)相一致。10 d時(shí)，A組的溫度比環(huán)境溫度高2℃。30 d之前，其余3組的溫度都大致低于環(huán)境溫度，從30 d開(kāi)始緩慢高于周?chē)鷾囟龋?0 d時(shí)，CK組的溫度比環(huán)境溫度高2℃，31 d時(shí)，L和L+A組的溫度比環(huán)境溫度高2℃。這表明，添加植物乳桿菌可以增加飼料有氧穩(wěn)定性的時(shí)間，避免飼料迅速變質(zhì)。

圖8 全株玉米青貯飼料有氧穩(wěn)定性變化Fig. 8 Changes of aerobic stability of whole crop corn silage

3 討論

LAB能夠利用碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸［26］。黃曲霉菌在糧食作物及谷物飼料中出現(xiàn)頻率最高，黃曲霉毒素是其產(chǎn)生的極毒性代謝產(chǎn)物，它會(huì)導(dǎo)致畜禽流產(chǎn)、胚胎畸形，且對(duì)畜禽體內(nèi)的免疫系統(tǒng)造成嚴(yán)重破壞、對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生一定毒性［27］。LAB對(duì)霉菌具有抑菌效果，其中植物乳桿菌效果最強(qiáng)［28］。乳桿菌可以顯著抑制霉菌生長(zhǎng)并降解毒素，菌絲體生物量和黃曲霉毒素產(chǎn)量明顯減少，降解率高達(dá)96.31%［29］。pH是影響LAB抑菌活性的主要因素，pH越高，抑菌活性越低［30］。0.5%的乙酸和丙酸可以抑制霉菌生長(zhǎng)，同時(shí)丙酸也顯示出有效的抗黃曲霉毒素活性［31］。苯乳酸是近期發(fā)現(xiàn)的一種新型抗真菌物質(zhì)，與其他抑菌物質(zhì)相比，其具有較為廣泛且有效的抑菌作用，在抑制霉菌生長(zhǎng)中起到了重要作用［32］。本研究采用HPLC測(cè)定了乳酸菌對(duì)AFB1的吸附率，高于馬惠茹等［33］采用酶聯(lián)免疫法測(cè)得乳酸菌對(duì)AFB1的4.76%吸附率。不管是同型發(fā)酵乳酸菌還是異型發(fā)酵乳酸菌都對(duì)霉菌毒素有一定的降解作用［34-36］，可能是本研究未能測(cè)出霉菌毒素的原因。

玉米青貯飼料在飼喂牛羊等動(dòng)物中不可缺少［37］。這類(lèi)飼料營(yíng)養(yǎng)豐富、適口性好、生物學(xué)產(chǎn)量高、貯藏時(shí)間長(zhǎng)［38］。張適等［39］的研究表明，青貯飼料中添加植物乳桿菌，其飼料等級(jí)最高，且發(fā)酵品質(zhì)大幅提升。袁仕改［40］的研究表明，添加LAB的處理組，飼料發(fā)酵效果優(yōu)于其他組，且pH值均低于青貯飼料的臨界值。氨態(tài)氮含量直接影響飼料的適口性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，其含量與蛋白氮降解率呈正相關(guān)，表明氨態(tài)氮對(duì)青貯飼料的發(fā)酵有不利影響［41-42］。添加植物乳桿菌使青貯飼料中氨態(tài)氮含量降低［43］，本研究添加植物乳桿菌氨態(tài)氮含量變少，與之結(jié)果一致。張相倫等［44］的研究結(jié)果證明，在玉米秸稈制作而成的青貯飼料中添加復(fù)合乳酸菌使CP含量顯著增加。玉米秸稈中存在著較多的WSC，乳酸菌的定植需要WSC為其提供有利條件［45］。本研究中礦物元素的變化不受微生物影響，而受發(fā)酵時(shí)間影響，發(fā)酵結(jié)束后飼料中礦物元素的含量高于未發(fā)酵時(shí)的含量，此結(jié)果與王赫［46］的研究結(jié)果相一致。

4 結(jié)論

植物乳桿菌破壞黃曲霉菌結(jié)構(gòu)且抑制其生長(zhǎng)，同時(shí)有效吸附毒素，吸附率達(dá)到59.40%。植物乳桿菌CFS中有乳酸、乙酸、丙酸及苯乳酸等抑菌成分。添加植物乳桿菌使青貯飼料感官評(píng)價(jià)得分較高，且有效改善發(fā)酵品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分，延長(zhǎng)有氧穩(wěn)定性，阻止飼料迅速發(fā)生霉變，從而提高飼料安全性。