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    抑霉乳酸菌脫毒特性及青貯應(yīng)用的研究

    2021-11-06 02:58:38趙雅茹許慶方高文俊郭剛陳雷玉柱
    生物技術(shù)通報(bào) 2021年9期
    關(guān)鍵詞:植物

    趙雅茹 許慶方 高文俊 郭剛 陳雷 玉柱

    (1. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院,晉中 030801;2. 內(nèi)蒙古正時(shí)生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司,呼和浩特 010000;3. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,晉中030801;4. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,北京 100193)

    青貯飼料產(chǎn)業(yè)的壯大促進(jìn)畜牧業(yè)迅速發(fā)展和農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整。青貯飼料優(yōu)點(diǎn)較多,在反芻動(dòng)物日糧中不可或缺,在畜牧業(yè)中有著巨大的發(fā)展?jié)撃埽?]。青貯飼料乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)分為同型發(fā)酵和異型發(fā)酵。同型發(fā)酵乳酸菌在青貯飼料發(fā)酵過(guò)程中起促進(jìn)作用,產(chǎn)生大量乳酸(lactic acid,LA),降低青貯環(huán)境pH,阻止?fàn)I養(yǎng)成分分解[2]。常見(jiàn)的是植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum),乳球菌屬(Lactococcus)也有利于酸性環(huán)境的形成[3],屎腸球菌(Enterococcus faecium)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)等也經(jīng)常被應(yīng)用[4]。異型發(fā)酵LAB主要有布氏乳桿菌(L. buchneri)、短乳桿菌(L. brevis)、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides),這類(lèi)LAB產(chǎn)生乙酸(AA),抑制腐敗菌生長(zhǎng)且影響青貯有氧穩(wěn)定性[5-6],研究表明將短乳桿菌添加到青貯飼料中,可以改善飼料的發(fā)酵品質(zhì),同時(shí)提高有氧穩(wěn)定性[7]。

    青貯飼料密封不嚴(yán)或開(kāi)封使用時(shí)霉菌增殖會(huì)導(dǎo)致飼料腐敗。霉菌通過(guò)呼吸作用降解營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和有機(jī)酸,分解纖維素(cellulose),破壞細(xì)胞壁,損壞青貯莖葉結(jié)構(gòu),使青貯感官品質(zhì)下降[8]。從青貯飼料中分離出來(lái)的主要霉菌有曲霉菌屬(Aspergillus)、青霉菌屬(Penicillium)、毛霉菌屬(Mucor)、鐮刀菌屬(Fusarium)等[9],其分泌的二級(jí)代謝產(chǎn)物稱(chēng)為霉菌毒素[10],它會(huì)造成飼料霉變、品質(zhì)降低,嚴(yán)重者使動(dòng)物中毒死亡[11],其中危害較大的是黃曲霉毒素B1(AFB1)[12]。

    LAB可以顯著抑制霉菌生長(zhǎng),并且可以降解生物毒素。研究發(fā)現(xiàn),LAB明顯抑制黃曲霉菌菌絲的生長(zhǎng),降解毒素[13]。LAB抑制霉菌生長(zhǎng)的機(jī)制可能與其分泌的有機(jī)酸有關(guān),研究發(fā)現(xiàn),LAB分泌的有機(jī)酸可以抑制霉菌生長(zhǎng),減少毒素產(chǎn)生[14]。同時(shí),其分泌的抗真菌成分破壞霉菌菌絲壁,抑制霉菌分生孢子萌發(fā),從而減少毒素積累[15]。

    隨著我國(guó)草牧業(yè)的推進(jìn),青貯飼料的諸多優(yōu)勢(shì)決定了其發(fā)展前景廣闊。但是霉菌增殖導(dǎo)致青貯飼料腐敗,給草牧業(yè)和乳制品行業(yè)帶來(lái)巨大損失,且有些霉菌產(chǎn)生毒素,嚴(yán)重危害動(dòng)物及人類(lèi)健康。特異性LAB在抑制精飼料發(fā)霉變質(zhì)等方面研究較多,而在青貯飼料抑霉方面的研究較少。通過(guò)添加具有分泌抗真菌活性物質(zhì)的LAB來(lái)抑制霉菌生長(zhǎng),吸附毒素,改善青貯飼料品質(zhì),提升安全性能,對(duì)青貯產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。本研究著力于分析LAB對(duì)霉菌形態(tài)結(jié)構(gòu)破壞及活性物質(zhì)鑒別,闡明LAB抑霉機(jī)制,為優(yōu)質(zhì)安全青貯提供高效菌劑。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    黃曲霉菌(來(lái)自發(fā)霉變質(zhì)的青貯飼料),植物乳桿菌(來(lái)自發(fā)酵良好的青貯飼料),植物乳桿菌無(wú)細(xì)胞上清液(CFS),霉菌孢子液(106孢子/mL),磷酸緩沖液(PBS),AFB1標(biāo)準(zhǔn)品,AFB1工作液(5 μg/mL),2020年9月從山西農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)田隨機(jī)采取的全株玉米樣品制成的青貯飼料。

    1.2 方法

    1.2.1 黃曲霉菌產(chǎn)毒性能分析 將黃曲霉菌送至北京清析技術(shù)研究院按照 GB/T 30955-2014、GB 5009.24-2016 的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其產(chǎn)毒情況進(jìn)行測(cè)定。

    1.2.2 植物乳桿菌及黃曲霉菌形態(tài)觀察 離心植物乳桿菌發(fā)酵液,加入PBS再次離心,之后加入戊二醛(glutaric dialdehyde),置于4℃冰箱固定24 h,重復(fù)以上離心步驟,使用不同濃度乙醇(ethanol)脫水,再用叔丁醇(tert-butanol)洗脫溶解,將含有樣品的觀察皿放入4℃冰箱冷凝約10 min,取出置于真空抽氣泵中,待干燥冷凝過(guò)夜之后使用掃描電鏡觀察。將黃曲霉菌用戊二醛在pH7.2的0.1 mol/L的PBS中固定菌絲3 h,將固定菌絲用相同PBS 洗滌3次,采用不同濃度乙醇脫水,脫水后的樣品干燥,鍍金,進(jìn)行掃描電鏡觀察。

    1.2.3 植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌的破壞 在MRS肉湯中接種濃度為106孢子/mL 的黃曲霉孢子懸浮液,28℃下培養(yǎng)7 d,取出放入4℃冰箱中,作為對(duì)照組;將植物乳桿菌接種到MRS肉湯中,35℃下培養(yǎng)2 d,之后接種同等濃度的孢子懸浮液,28℃下培養(yǎng)7 d,作為處理組。然后用掃描電鏡觀察植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌造成的破壞。

    1.2.4 抗真菌活性化合物的測(cè)定與分析 利用高效液相色譜法(HPLC)分析所含有的抗真菌活性化合物。首先對(duì)植物乳桿菌CFS進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)試驗(yàn),用1 mol/L的NaOH將CFS的pH調(diào) 節(jié) 為4.0、5.0、6.0,加入到PDA培養(yǎng)基中,倒平板,在平板中心接種106孢子/ mL的霉菌孢子懸液,于28℃下培養(yǎng)7 d。以未經(jīng)調(diào)整pH的CFS作為對(duì)照組。進(jìn)行3次重復(fù),用尺子測(cè)量抑菌圈直徑并記錄。

    1.2.5 植物乳桿菌吸附黃曲霉毒素 在MRS肉湯中接種1×1010CFU/mL的植物乳桿菌,離心菌液,倒掉上清液,用PBS清洗菌體沉淀3次,之后加入AFB1工作液,37℃下培養(yǎng)30 min,以上述相同條件離心,將上清液保存在-20℃的冰箱中,使用HPLC檢測(cè)AFB1的濃度。對(duì)照組為不含乳酸菌的AFB1工作液。對(duì)照組和處理組各3個(gè)重復(fù)。除此之外,測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間及加熱處理對(duì)植物乳桿菌吸附AFB1的影響。根據(jù)以下公式計(jì)算吸附率:

    AFB1吸附率(%)=(1-SAFB1/CAFB1)×100

    SAFB1:樣品中 AFB1 的峰面積;CAFB1:對(duì)照中AFB1 的峰面積。1.2.6 植物乳桿菌在全株玉米青貯飼料中的應(yīng)用效果 在全株玉米青貯飼料中添加植物乳桿菌及黃曲霉菌,測(cè)定發(fā)酵0 d、24 d、48 d的指標(biāo)。青貯后根據(jù)德國(guó)農(nóng)業(yè)協(xié)會(huì)的青貯感官評(píng)分法對(duì)青貯飼料的整體發(fā)酵進(jìn)行評(píng)價(jià)[16]。制備不同時(shí)期的樣品懸液,使用涂布平板法計(jì)數(shù)LAB及霉菌。采用苯酚-次氯酸鈉比色法測(cè)定氨態(tài)氮[17];HPLC測(cè)定有機(jī)酸含量[18];pH計(jì)測(cè)定青貯浸提液的pH值。干物質(zhì)(DM)、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、粗灰分(Ash)根據(jù)AOAC的方法測(cè)定[19];中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)根據(jù)Van Soest法測(cè)定[20];高錳酸鉀滴定法測(cè)定鈣(Ca)[21],鉬黃比色法測(cè)定磷(P)[22];蒽酮-硫酸比色法測(cè)定可溶性糖(WSC)[23];高氯酸水解-蒽酮比色法測(cè)定淀粉(starch)[24]。飼料發(fā)酵48 d后,樣品送到藍(lán)德雷檢測(cè)公司,近紅外檢測(cè)法評(píng)定總可消化養(yǎng)分(TDN)、產(chǎn)奶凈能(NEL)、維持凈能(NEM)、增重凈能(NEG)、相對(duì)牧草質(zhì)量(RFQ)及產(chǎn)奶量(Kg Milk)。飼料樣品于室溫下開(kāi)口放7 d,觀察霉變情況,且將霉變飼料送至北京清析技術(shù)研究院測(cè)定其產(chǎn)毒情況。發(fā)酵結(jié)束后開(kāi)封,在裝有樣品的不同青貯袋中間插入測(cè)溫棒,儀器每隔30 min記錄一次溫度,當(dāng)儀器顯示飼料中心溫度大于周?chē)鷾囟?℃時(shí)[25],此時(shí)認(rèn)定飼料開(kāi)始有氧腐敗,并且記錄時(shí)間。相對(duì)飼喂價(jià)值(RFV)及康乃爾凈碳水化合物-蛋白質(zhì)體系(CNCPS)中碳水化合物的組分含量根據(jù)以下公式計(jì)算:

    RFV=DMI(%BW)×DDM(%DM)/1.29;

    DMI(%BW)=120/NDF(%DM);

    DDM(%DM)=88.9-0.779×ADF(%DM)

    DMI:干物質(zhì)采食量;BW:體重;DDM:可消化干物質(zhì)。

    CHO=100-CP-EE-ASH;CC=LIGNIN×2.4;CB1=STARCH;CA=WSC。

    CHO:總碳水化合物;CC:不可利用纖維;CB1:淀粉;CA:可溶性糖。

    1.2.7 數(shù)據(jù)處理 所測(cè)得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel整理,之后通過(guò)SPSS 24.0的統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA),然后采用Duncan法進(jìn)行多重比較分析,以P<0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn),試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示,之后使用Origin 2019進(jìn)行繪圖。

    2 結(jié)果

    2.1 黃曲霉菌產(chǎn)毒性能分析

    黃曲霉菌產(chǎn)毒情況示于表1中,只產(chǎn)生26.0 μg/kg的AFB1和2.8 μg/kg的AFB2。

    表1 霉菌產(chǎn)毒特性Table 1 Toxigenic characteristics of mold

    2.2 植物乳桿菌及黃曲霉菌形態(tài)觀察

    兩種菌株在掃描電鏡下的形態(tài)觀察如圖1所示,植物乳桿菌兩端圓,中間直,呈圓端直桿狀,單個(gè)、成對(duì)或短鏈狀出現(xiàn);黃曲霉菌分生孢子梗粗糙,頂囊呈圓球形,菌絲表面光滑,無(wú)褶皺,且分生孢子在小梗上鏈狀著生。

    圖1 植物乳桿菌(A)及黃曲霉菌(B)掃描電鏡圖Fig. 1 Scanning electron micrograph of L. plantarum(A)and A. flavus(B)

    2.3 植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌的破壞

    植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌形態(tài)破壞如圖2所示。左邊是正常黃曲霉菌的菌絲體,表面光滑,無(wú)褶皺斷裂,菌絲生長(zhǎng)良好,沒(méi)有任何生長(zhǎng)異常;右邊是用植物乳桿菌處理過(guò)的黃曲霉菌,與左邊相比,觀察到菌絲生長(zhǎng)異常,表面不光滑,有大量皺縮和扭曲狀態(tài),菌絲體形態(tài)遭到破壞。證明植物乳桿菌對(duì)黃曲霉菌的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用。

    圖2 正常菌絲(A)及異常菌絲(B)掃描電鏡圖Fig. 2 Scanning electron micrograph of normal hyphae(A)and abnormal hyphae(B)

    2.4 抗真菌活性化合物的測(cè)定與分析

    CFS中存在LA、AA、丙酸(PA)及苯乳酸(PLA),其含量如圖3所示。4種有機(jī)酸的含量分別為19.770、8.870、2.900、0.006 mg/mL,LA最 多,顯著高于其他有機(jī)酸(P<0.05)。由表2可知,與對(duì)照組相比,CFS進(jìn)行pH調(diào)節(jié)后,隨pH增加,酸性減弱,抑菌圈直徑縮小,乳酸菌抑制霉菌能力減弱,最后抑菌能力徹底消失;相反,CFS的pH值越小,酸性越強(qiáng),抑菌圈直徑越大,對(duì)霉菌的抑制效果越高。未調(diào)節(jié)pH和pH 4.0的CFS中,抑菌活性最大,pH為6.0時(shí),抑菌活性消失。表明植物乳桿菌CFS的抑菌活性受到pH值變化的影響較大。

    表2 pH對(duì)CFS抑霉活性的影響Table 2 Effect of different pH on the inhibition of mould activity of cell-free supernatant

    圖3 CFS中的有機(jī)酸含量Fig. 3 Content of organic acid in CFS

    2.5 植物乳桿菌吸附黃曲霉毒素

    植物乳桿菌對(duì)AFB1的吸附率為59.40%。不同培養(yǎng)時(shí)間及加熱處理下,植物乳桿菌對(duì)AFB1的吸附效率如圖4所示。培養(yǎng)4 h后吸附效率最高,為59.53%,4 h熱處理后,吸附效率最低,為59.25%。熱處理30 min及4 h后,吸附效率顯著降低(P<0.05)。未加熱時(shí),植物乳桿菌對(duì)AFB1的吸附效率不會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而吸附更多毒素。

    圖4 不同處理對(duì)AFB1吸附率的影響Fig. 4 Effects of different treatments on the adsorption rate of AFB1

    2.6 植物乳桿菌在全株玉米青貯飼料中的應(yīng)用效果

    全 株玉米原料的DM為68.30%,CP含量為8.95%,NDF與ADF的 含 量 分 別 為57.57%和34.47%,WSC的含量為11.71%,淀粉的含量為18.64%。

    由表3可知,L和L+A組等級(jí)為優(yōu),且L組評(píng)分最高,CK和A組等級(jí)為良。接種植物乳桿菌的處理組散發(fā)出較濃的芳香味,發(fā)酵品質(zhì)較高,莖葉結(jié)構(gòu)完整,青貯后飼料的顏色與青貯前飼料的顏色較為接近。

    表3 全株玉米青貯飼料的感官評(píng)定Table 3 Sensory evaluation of whole crop corn silage

    在不同發(fā)酵時(shí)期測(cè)定青貯飼料中LAB及霉菌數(shù)量,結(jié)果如表4所示。隨發(fā)酵天數(shù)增加,各處理組的LAB數(shù)量先增加后減少,L和L+A組的LAB數(shù)量顯著高于CK和A組(P<0.05)。在24 d時(shí),A組LAB的數(shù)量顯著高于CK組(P<0.05)。在0 d時(shí),存在霉菌,且霉菌數(shù)量之間沒(méi)有顯著差異,隨發(fā)酵天數(shù)增加,霉菌隨之消失。

    表4 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中乳酸菌及霉菌數(shù)量Table 4 Number of lactic acid bacteria and molds during fermentation of whole crop corn silage(log CFU/g)

    全株玉米青貯飼料在發(fā)酵0 d、24 d、48 d后,氨態(tài)氮及pH值變化如圖5所示。隨發(fā)酵時(shí)間增加,氨態(tài)氮含量逐漸上升,pH值逐漸下降。在0 d時(shí),4組之間的氨態(tài)氮含量及pH值沒(méi)有顯著差異。在24 d時(shí),CK和A組的氨態(tài)氮含量及pH值高于L及L+A組(P<0.05)。在48 d時(shí),L組的氨態(tài)氮含量顯著低于CK組(P<0.05),雖然L組的含量低于A和L+A組,但是沒(méi)有顯著差異。

    圖5 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中氨態(tài)氮(A)及pH(B)的變化Fig. 5 Changes of ammonia nitrogen(A)and pH(B)during the fermentation of whole crop corn silage

    有機(jī)酸的含量變化如表5所示。在不同發(fā)酵時(shí)期都產(chǎn)生了乳酸和乙酸。乳酸和乙酸含量與青貯飼料的發(fā)酵時(shí)間呈正相關(guān),發(fā)酵時(shí)間越長(zhǎng),其含量越多。在24 d和48 d時(shí),L以及L+A組的乳酸和乙酸含量高于CK及A組(P<0.05)。在48 d時(shí),CK及A組的丙酸含量顯著低于L及L+A組(P<0.05)。在3個(gè)不同時(shí)期沒(méi)有丁酸產(chǎn)生。

    表5 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中有機(jī)酸含量Table Organic acid content during fermentation of whole crop corn silage

    全株玉米青貯飼料在發(fā)酵0 d、24 d及48 d后,營(yíng)養(yǎng)成分的變化如表6所示。隨發(fā)酵時(shí)間增加,DM及其DMR下降,0 d時(shí),4組之間含量差異不顯著,24 d和48 d時(shí),CK和A組的DM及其DMR顯著低于L和L+A組(P<0.05);CP及Ash含量上升,EE下降,24 d時(shí),L+A組的CP含量顯著低于其他組(P<0.05),且CP含量最低為7.5%,0 d和48 d時(shí),4組之間CP含量差異不顯著,48 d后,L組CP含量最高,為10.85%,EE及Ash含量在4種不同處理下差異不顯著,48 d時(shí),L+A組的EE含量最低,CK組的Ash含量最高;NDF和ADF含量下降,0 d時(shí),4組之間沒(méi)有顯著差異,且在0 d時(shí)值最大,NDF為59%,ADF為36%,24 d和48 d時(shí),CK及A組 的NDF和ADF含量顯著高于L及L+A組(P<0.05)。添加微生物對(duì)Ca及P的含量變化沒(méi)有顯著影響,發(fā)酵24 d及48 d后,Ca及P的含量顯著高于0 d時(shí)的含量(P<0.05)。WSC及Starch隨青貯發(fā)酵時(shí)間增加出現(xiàn)降低,0 d時(shí),4組WSC及Starch含量之間沒(méi)有顯著差異,24 d和48 d時(shí),L及L+A組的WSC含量顯著高于CK及A組(P<0.05),L及L+A組的Starch含量顯著低于CK及A組(P<0.05)。

    RFV的含量變化如圖6所示。RFV含量隨發(fā)酵時(shí)間增加呈現(xiàn)上升。0 d時(shí),CK組與其余3組的RFV之間沒(méi)有顯著差異,約為97%。隨發(fā)酵時(shí)間增加,24 d和48 d時(shí),CK及A組的RFV顯著低于L及L+A組(P<0.05)。

    圖6 全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中相對(duì)飼喂價(jià)值變化Fig. 6 Changes in relative feeding value during the fermentation of whole crop corn silage

    發(fā)酵48 d后,TDN、NEL、NEM、NEG、RFQ、產(chǎn)奶量(Kg Milk)的變化如表7所示。與CK組相比,添加微生物后NEG有所提高,且L+A組的含量顯著高于CK組(P<0.05)。

    表7 全株玉米青貯飼料飼用價(jià)值Table 7 Feeding value of whole crop corn silage

    表6全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定Table 6 Determination of nutritional components during the fermentation of whole crop corn silage

    發(fā)酵結(jié)束后,CNCPS體系中碳水化合物的組分變化如表8所示。4組的CHO含量沒(méi)有顯著差異。CK組的CC含量高于其余3組,但是沒(méi)有顯著差異。CK及A組的CB1含量顯著高于L以及L+A組(P<0.05)。L組的CA含量顯著高于CK及A組(P<0.05),但是與L+A組之間差異不顯著。

    表8 CNCPS體系中碳水化合物組分變化Table 8 Changes of carbohydrate composition in CNCPS system

    發(fā)酵結(jié)束后,將4組樣品分別裝在不同青貯袋中,在室溫下開(kāi)口放置7 d,觀察飼料霉變情況。如圖7所示,A組發(fā)霉情況最嚴(yán)重,飼料表面及內(nèi)部均有大量霉菌生長(zhǎng),且有異味;L組發(fā)霉情況最輕,只有零星部位出現(xiàn)霉菌。L+A組發(fā)霉情況介于L和A組之間,內(nèi)部沒(méi)有發(fā)霉,飼料表面發(fā)霉,發(fā)霉情況稍重于L組。CK組發(fā)霉情況重于L+A組。

    圖7 飼料有氧暴露下發(fā)霉情況Fig. 7 Mold development under the aerobic exposure of feed

    4組樣品二次發(fā)酵后,飼料表面出現(xiàn)霉菌,A組最嚴(yán)重。將樣品送到檢測(cè)公司測(cè)定霉菌的產(chǎn)毒情況。4組樣品中均未檢測(cè)出毒素,表明添加的產(chǎn)毒霉菌在飼料中沒(méi)有產(chǎn)生毒素。

    發(fā)酵結(jié)束后,對(duì)4組飼料及周?chē)鷾囟冗M(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),以繪制有氧穩(wěn)定性曲線,如圖8所示。4組青貯飼料的中心溫度變化與周?chē)鷾囟鹊淖兓厔?shì)相一致。10 d時(shí),A組的溫度比環(huán)境溫度高2℃。30 d之前,其余3組的溫度都大致低于環(huán)境溫度,從30 d開(kāi)始緩慢高于周?chē)鷾囟龋?0 d時(shí),CK組的溫度比環(huán)境溫度高2℃,31 d時(shí),L和L+A組的溫度比環(huán)境溫度高2℃。這表明,添加植物乳桿菌可以增加飼料有氧穩(wěn)定性的時(shí)間,避免飼料迅速變質(zhì)。

    圖8 全株玉米青貯飼料有氧穩(wěn)定性變化Fig. 8 Changes of aerobic stability of whole crop corn silage

    3 討論

    LAB能夠利用碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸[26]。黃曲霉菌在糧食作物及谷物飼料中出現(xiàn)頻率最高,黃曲霉毒素是其產(chǎn)生的極毒性代謝產(chǎn)物,它會(huì)導(dǎo)致畜禽流產(chǎn)、胚胎畸形,且對(duì)畜禽體內(nèi)的免疫系統(tǒng)造成嚴(yán)重破壞、對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生一定毒性[27]。LAB對(duì)霉菌具有抑菌效果,其中植物乳桿菌效果最強(qiáng)[28]。乳桿菌可以顯著抑制霉菌生長(zhǎng)并降解毒素,菌絲體生物量和黃曲霉毒素產(chǎn)量明顯減少,降解率高達(dá)96.31%[29]。pH是影響LAB抑菌活性的主要因素,pH越高,抑菌活性越低[30]。0.5%的乙酸和丙酸可以抑制霉菌生長(zhǎng),同時(shí)丙酸也顯示出有效的抗黃曲霉毒素活性[31]。苯乳酸是近期發(fā)現(xiàn)的一種新型抗真菌物質(zhì),與其他抑菌物質(zhì)相比,其具有較為廣泛且有效的抑菌作用,在抑制霉菌生長(zhǎng)中起到了重要作用[32]。本研究采用HPLC測(cè)定了乳酸菌對(duì)AFB1的吸附率,高于馬惠茹等[33]采用酶聯(lián)免疫法測(cè)得乳酸菌對(duì)AFB1的4.76%吸附率。不管是同型發(fā)酵乳酸菌還是異型發(fā)酵乳酸菌都對(duì)霉菌毒素有一定的降解作用[34-36],可能是本研究未能測(cè)出霉菌毒素的原因。

    玉米青貯飼料在飼喂牛羊等動(dòng)物中不可缺少[37]。這類(lèi)飼料營(yíng)養(yǎng)豐富、適口性好、生物學(xué)產(chǎn)量高、貯藏時(shí)間長(zhǎng)[38]。張適等[39]的研究表明,青貯飼料中添加植物乳桿菌,其飼料等級(jí)最高,且發(fā)酵品質(zhì)大幅提升。袁仕改[40]的研究表明,添加LAB的處理組,飼料發(fā)酵效果優(yōu)于其他組,且pH值均低于青貯飼料的臨界值。氨態(tài)氮含量直接影響飼料的適口性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,其含量與蛋白氮降解率呈正相關(guān),表明氨態(tài)氮對(duì)青貯飼料的發(fā)酵有不利影響[41-42]。添加植物乳桿菌使青貯飼料中氨態(tài)氮含量降低[43],本研究添加植物乳桿菌氨態(tài)氮含量變少,與之結(jié)果一致。張相倫等[44]的研究結(jié)果證明,在玉米秸稈制作而成的青貯飼料中添加復(fù)合乳酸菌使CP含量顯著增加。玉米秸稈中存在著較多的WSC,乳酸菌的定植需要WSC為其提供有利條件[45]。本研究中礦物元素的變化不受微生物影響,而受發(fā)酵時(shí)間影響,發(fā)酵結(jié)束后飼料中礦物元素的含量高于未發(fā)酵時(shí)的含量,此結(jié)果與王赫[46]的研究結(jié)果相一致。

    4 結(jié)論

    植物乳桿菌破壞黃曲霉菌結(jié)構(gòu)且抑制其生長(zhǎng),同時(shí)有效吸附毒素,吸附率達(dá)到59.40%。植物乳桿菌CFS中有乳酸、乙酸、丙酸及苯乳酸等抑菌成分。添加植物乳桿菌使青貯飼料感官評(píng)價(jià)得分較高,且有效改善發(fā)酵品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分,延長(zhǎng)有氧穩(wěn)定性,阻止飼料迅速發(fā)生霉變,從而提高飼料安全性。

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