氣相色譜－質(zhì)譜法測定食用油中的膽固醇

李成

膽固醇又被叫作膽甾醇，是環(huán)戊烷多氫菲的一種衍生物，被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)列為3類致癌物，人體內(nèi)膽固醇過高會導(dǎo)致動脈粥樣硬化、冠心病等心腦血管疾病。針對膽固醇的定量方法，比較常見的是高效液相色譜法、比色法以及氣相色譜法。傳統(tǒng)的比色法操作復(fù)雜繁瑣，對試劑的需求量較大，需要投入較高的成本，因此使用并不廣泛。本文采用氣相色譜-質(zhì)譜法測定食用油中的膽固醇，旨在提高測定效益以及結(jié)果的可靠性，更好地確保食用油的健康。

一、儀器和試劑

5977A質(zhì)譜儀、7890B氣相色譜儀，安捷倫公司;XP205分析天平，梅特勒-托利多中國有限公司;異辛烷，廣州化學(xué)試劑廠;膽固醇，純度和批號分別為95.0%、00219，美國DR公司;甲醇，無水乙醇，氫氧化鉀，60%氫氧化鉀溶液，無水硫酸鈉，無水乙醚，沸程為30-60℃的石油醚。

二、操作條件

1.氣相色譜條件。分流模式進樣，分離比為1︰1;進樣口溫度280℃;柱溫借助程序升溫，初始溫度為220℃，保持3min，再以30℃/min的速率上升到280℃，保持12min;載氣為氦氣，載氣流量為1.5mL/min，溶劑延遲3min。

2.質(zhì)譜條件。ET電離方式，質(zhì)量掃描范圍190-450amu，電子能量70eV，電子倍增器電壓1405V，傳輸線溫度280℃，離子源溫度250℃。采用離子（SIM）方式的時候，定量離子為386，定性離子為275、301、368、386。

三、實驗和方法

1.樣品制備。（1）皂化。稱取均勻混合的油樣1-5g，精確到0.1mg，將5mL的氫氧化鉀溶液和10mL的無水乙醇加入到100mL的圓底燒瓶中，均勻混合后在75℃恒溫水浴鍋中皂化試樣。在皂化的過程中，振搖5min后油層幾乎消失干凈，再皂化1h;然后再搖一次，當(dāng)溶液為澄清透明的亮黃色液體時皂化結(jié)束，將其取出來放在75℃水浴鍋上將乙醇蒸去，自然冷卻，直到和室溫保持一致。

（2）提取。在250mL的分液漏斗中裝入所有的皂化液，用60mL的氫氧化鉀溶液（1mol/L）對試管進行三次清洗，把洗液一起倒在分液漏斗中。輕輕搖晃均勻后，將40mL的乙醚萃取液加入到混合溶液之中，振搖1min，靜置，分層。轉(zhuǎn)移水相至第二個分液漏斗，再用20mL的乙醚展開提取工作，一共提取兩次，舍去下層水相，將三次有機相合并在一起。用0.5mol的氫氧化鉀溶液將乙醚清除干凈，再借助蒸餾水對有機相進行清洗，直到pH為中性。通過無水硫酸鈉脫水干燥，在250mL氮吹專用瓶中濾入濾液。

（3）濃縮。在Caliper濃縮儀上放置上述濾液，45℃水浴，使用氮氣吹，濃縮，借助乙醚定容到1mL，利用吸管將其吸出并放入進樣瓶，借助氣相色譜展開分析。

2.工作曲線的繪制。提取膽固醇標準儲備液，用乙酸乙酯進行稀釋，制成1.62μg/mL、16.2μg/mL、48.6μg/mL、113.2μg/mL、162μg/mL、243μg/mL的膽固醇標準系列?；谏鲜錾V條件，分別取1μL進樣，對峰面積和保留時間進行測定，根據(jù)峰面積均值和濃度（μg/mL）繪制標準曲線。

四、結(jié)果與討論

1.色譜條件?；谠嚇优渲梅绞脚c色譜條件等，測定空白溶液，比較其和膽固醇對照品溶液的出峰時間，空白溶液在膽固醇的出峰時間處都沒有吸收峰，由此可知，空白溶液基本沒有影響測定結(jié)果。

2.線性實驗。線性實驗結(jié)果如表1所示，相關(guān)系數(shù)r2為0.999，在濃度0.06061-0.6061mg/mL之間，線性關(guān)系良好。

3.定量限和檢出限。分析方法的檢出限即信噪比為3時相應(yīng)的待分析物濃度，定量限即信噪比為10時相應(yīng)的分析物濃度。當(dāng)信噪比為3時，膽固醇的檢出限為0.12μg/mL，得到方法的膽固醇檢出限0.004mg/g;當(dāng)信噪比為10時，膽固醇的定量限為0.43μg/mL，得到方法的膽固醇定量限0.014mg/g。

4.準確度和精密度。分別稱取花生油和大豆油樣品各10g，分別加入1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg三個濃度水平的膽固醇標準溶液，然后基于以上提取方式進行處理，需要平行測定6次，準確計算加標回收率以及相對標準偏差（RSD）。通過計算可知，大豆油和花生油中膽固醇的回收率分別為94%-98%、93%-98%，相對標準偏差分別為2.4%-4.6%、2.2%-3.7%，說明此方法具有較強的可靠性。

5.測定食用油樣品。通過前文提到的方式，對花生油、色拉油、大豆油、豬油、芝麻調(diào)和油、地溝油以及餐廚廢油進行測定，并運用質(zhì)譜定性其中的甾醇，結(jié)果如表2所示。通過對表2進行分析可知，芝麻調(diào)和油中涉及到的膽固醇偏低，餐廚廢油以及豬油則偏高，地溝油中也存在膽固醇，植物油中不包含膽固醇，但結(jié)構(gòu)上存在與膽固醇較為接近的物質(zhì)，比如豆甾醇、菜油甾醇等植物甾醇。

五、結(jié)論

本文采用氣相色譜-質(zhì)譜法測定了食用油中的膽固醇含量，分離效果良好，且選擇性高。采取質(zhì)譜定性，排除植物甾醇對膽固醇檢測產(chǎn)生的影響，可以在測定食用油中高膽固醇含量時運用。借助測試食用油樣品，發(fā)現(xiàn)地溝油、餐廚廢油以及豬油中均有膽固醇，而植物油中涉及到的膽固醇極少，可以忽略。因此，測定食用油中包含的膽固醇能夠有效辨別植物油中是否摻入了動物油，這屬于判斷食用油中是否摻入餐廚廢油的關(guān)鍵指標。