元寶楓籽油改善脂多糖誘導(dǎo)的小鼠腸道炎癥

梁嬋華，黃妍，莫敏敏,2，陳城宇,3，宋家樂,4*

（1.桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，廣西桂林 541199）（2.廉江市人民醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科，廣東廉江 524400）（3.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科，廣西南寧 530000）（4.桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院臨床營(yíng)養(yǎng)科，廣西桂林 541199）

作為人體內(nèi)重要的消化器官，腸道擁有龐大的腸道菌群并集結(jié)了人體70%～80%的免疫細(xì)胞。因此，腸道也被認(rèn)為是人體內(nèi)最重要的內(nèi)分泌及免疫器官。正常狀態(tài)下腸道菌群之間相互依存并相互制約，時(shí)刻維持著彼此間的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。腸道菌群失衡將導(dǎo)致腸道免疫系統(tǒng)失衡，使得機(jī)體免疫系統(tǒng)異常激活，從而導(dǎo)致腸道炎癥甚至是全身炎癥反應(yīng)的發(fā)生[1-3]。研究提示，結(jié)直腸癌有較明確的“炎癥-癌癥”轉(zhuǎn)化病變，腸道系統(tǒng)慢性炎癥與癌癥風(fēng)險(xiǎn)的增加密切相關(guān)，嚴(yán)重危害人類健康[4]。臨床流行病數(shù)據(jù)顯示，炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）患者的結(jié)直腸癌發(fā)病率遠(yuǎn)高于正常人群[5]。而在中國(guó)，2018年結(jié)直腸癌新發(fā)病例和死亡病例分別增至52.1萬(wàn)例和24.5萬(wàn)例，結(jié)直腸癌在全部惡性腫瘤發(fā)病率排名由第3位升至第2位[6]。因此，探索具有安全性和生物活性的抗炎物質(zhì)已成為結(jié)直腸腫瘤及相關(guān)疾病的防治研發(fā)熱點(diǎn)之一。

元寶楓籽油是從無(wú)患子目槭樹科槭屬落葉喬木元寶楓（Acer truncatumBunge）果實(shí)中提煉出來的純天然木本植物油，富含油酸、亞油酸、功能性脂肪酸-神經(jīng)酸及豐富的脂溶性維生素E[7]。此外，也有研究報(bào)道稱元寶楓籽油具有抗菌[8]及抗腫瘤作用[9]，能夠增強(qiáng)小鼠免疫力[10]，調(diào)節(jié)腸道菌群[11]，并能夠改善力竭運(yùn)動(dòng)大鼠氧化應(yīng)激和體內(nèi)炎癥反應(yīng)水平的功效[12]。此外，元寶楓油乳液能促進(jìn)新生組織生長(zhǎng)，對(duì)體細(xì)胞有修復(fù)作用[13]，目前，楓籽油已經(jīng)被國(guó)家衛(wèi)健委批準(zhǔn)列為新資源食品。

脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的組成成分，由脂質(zhì)和多糖構(gòu)成。研究表明，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔內(nèi)暴露低劑量LPS可通過緊密連接選擇性地增加腸道通透性，誘發(fā)腸道出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，從而模擬急性腸道功能障礙[14]。因此，本研究采用腹腔注射LPS的方式來建立小鼠腸道炎癥模型。通過觀察元寶楓籽油對(duì)LPS腸道損傷小鼠體重，腸道炎癥水平及結(jié)腸組織病理的改善情況；評(píng)估對(duì)炎性指標(biāo)物MPO酶活性及氧化應(yīng)激損傷指標(biāo)MDA的影響，觀察對(duì)NLRP3炎癥小體相關(guān)因子mRNA表達(dá)的影響。以此探究元寶楓籽油對(duì)腸道炎癥反應(yīng)的改善效果并比較其效果是否與玉米油存在差異，為元寶楓籽油這種新資源食品將來應(yīng)用于腸道炎癥患者的腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)治療提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

元寶楓油（亞油酸≥30.0%，油酸≥15.0%，神經(jīng)酸≥5.0%）由西安拓豐生物科技有限公司提供（生產(chǎn)年份：2020年3月）；玉米胚芽油（不飽和脂肪酸含量為≥80.0%，亞油酸≥40.0%）由山東西王食品有限公司提供（生產(chǎn)年份：2019年12月）；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS，L8880）、Trizol法總RNA提取試劑盒（R1200-50T）、TaqMan快速qRT-PCR試劑盒（T2210-200T）：北京索萊寶生物科技有限公司；蘇木素-伊紅（H&E）染色試劑盒（C0105）：上海碧云天生物技術(shù)有限公司；白細(xì)胞介素（interleukin, IL）-1β，IL-6，IL-18，腫瘤壞死因子-α（TNF-α），髓過氧化 物 酶（myeloperoxidase，MPO）及 丙 二 醛（malondialdehyde，MDA）測(cè)定試劑盒，均購(gòu)于江蘇科特生物技術(shù)有限公司；普通嚙齒類維持飼料（AIN-93M），購(gòu)自常州鼠一鼠二生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

AL204電子分析天平，梅特勒-托利多（上海）有限公司；Eppendorf 5424R冷凍離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司；Quant StudioTM 6 Flex PCR儀，美國(guó)Thermo Scientific科技公司；KZ-II高速組織研磨儀，武漢塞維爾生物科技有限公司；ELx808酶標(biāo)儀，美國(guó)BioTek公司；Leica DM4B顯微鏡，德國(guó)徠卡儀器有限公司；L-600離心機(jī)，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)健康ICR雄性小鼠（總28只，12周齡，體重34.4±1.1 g），由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（湘）2016-0002；所有動(dòng)物均置于桂林醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)單位許可證號(hào)：SYXK（桂）2020-0005。本研究經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查通過（GLMC201803049）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥處理

所有經(jīng)小鼠1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后，以每組7只隨機(jī)分為正常組，損傷組，玉米油組，元寶楓籽油組行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。小鼠腸道損傷模型依趙曉等[15]的方法進(jìn)行操作，損傷組，玉米油組，元寶楓籽油組小鼠經(jīng)腹腔注射LPS（3.5 mg/kg）造模，正常組注射等量生理鹽水。注射24 h后，分別測(cè)量各組小鼠空腹體重，正常組和損傷組灌胃生理鹽水（100 μL/d），元寶楓籽油組和玉米油組分別灌胃等量油樣至第7天。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間以普通飼料繼續(xù)喂養(yǎng)，自由攝食與飲水。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重測(cè)量、生物樣本的收集與處理

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間內(nèi)（共7 d），每日于固定時(shí)間點(diǎn)測(cè)量小鼠體量、攝食與飲水情況并記錄。待7 d干預(yù)結(jié)束后，各組小鼠12 h禁食（自由飲水），以CO2安樂死法犧牲小鼠。自腹部中央動(dòng)脈采集血樣，以3500 r/min在4 ℃條件下離心15 min后制備血清后留存-80 ℃冰箱備用。取血后，置實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于冰上，快速分離其心臟、肝臟、脾臟、腎臟、睪丸及結(jié)腸組織，用冰生理鹽水洗去表面雜質(zhì)，濾紙吸干，計(jì)算臟器指數(shù)[(臟器質(zhì)量/體質(zhì)量)×100%]。測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度后，取部分用生理鹽水制成10%的組織勻漿液，700 r/min條件下離心15 min制備上清液留存于-80 ℃冰箱用于后續(xù)指標(biāo)的檢測(cè)。剩余結(jié)腸組織部分用4%多聚甲醛固定待進(jìn)行病理分析，余下組織則保存于-80 ℃冰箱用于后續(xù)qPCR分析。

1.4.3 血清及結(jié)腸組織中相關(guān)炎癥因子水平測(cè)定

嚴(yán)格依照ELISA檢測(cè)試劑盒的相關(guān)說明操作，分別檢測(cè)血清和結(jié)腸組織勻漿液中的IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α水平（單位：ng/L），及結(jié)腸組織中的MPO水平（單位：ng/L）與MDA水平（單位：μmol/g protein）。

1.4.4 結(jié)腸組織標(biāo)本處理及病理染色觀察

將1.4.2部分中所述經(jīng)固定后的結(jié)腸組織進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片后（5 μm），進(jìn)行H&E染色，用徠卡DM4B光學(xué)顯微鏡觀察組織病理學(xué)改變，并拍攝圖像記錄。

1.4.5 qRT-PCR法測(cè)定腸黏膜組織中NLRP3炎性小體相關(guān)因子mRNA的表達(dá)

以細(xì)胞刮刀收集適量結(jié)腸組織（200 mg）的黏膜并按試劑盒要求提取黏膜中總RNA并檢測(cè)其純度。依qPCR試劑盒要求充分混勻各組分，即在總反應(yīng)體系中加入2 μg的RNA樣品，25×qRT-PCR預(yù)混液（1 μL），5×qRT-PCR緩沖液（5 μL），目的引物混合物（10 μmol/L，2 μL），TaqMan探針（0.2 μmol/L）并補(bǔ)ddH2O至總體積25 μL后置于QuantStudioTM6 Flex PCR儀中擴(kuò)增。擴(kuò)增反應(yīng)條件為反轉(zhuǎn)錄（50 ℃，20 min），變性（95 ℃，3 min），退火（56 ℃，20 s），延伸（72 ℃，30 s）實(shí)施30～35個(gè)循環(huán)反應(yīng)。每個(gè)基因cDNA樣本平行擴(kuò)增3次，取Ct值均數(shù)，依據(jù)以下公式計(jì)算目的基因表達(dá)水平。

本研究中Nlrp3、Asc、Il1β、Caspase1引物序列依據(jù)課題組先前研究[16]并由Thermo Scientific公司負(fù)責(zé)合成。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，且所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理使用單因素方差分析（ANOVA）并進(jìn)行多組之間均數(shù)的差異性檢驗(yàn)，p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠體重的影響

如圖1所示，實(shí)驗(yàn)開始前各組小鼠體重均無(wú)顯著性差異（p>0.05）。相比于正常組小鼠體重而言，LPS腹腔注射處理能顯著造成小鼠體重下降（p<0.05）。造模后小鼠分別進(jìn)行灌胃干預(yù)，結(jié)果顯示，各組小鼠體重均呈升高趨勢(shì)。相較初始體重，正常組小鼠體重增長(zhǎng)了4.76%。觀察其他另外三組小鼠體重發(fā)現(xiàn)，相較初始體重，玉米油組小鼠體重減輕了3.17%，而損傷組小鼠體重減輕了5.20%，但這兩組小鼠之間的體重變化無(wú)顯著性差異（p>0.05）。元寶楓籽油組小鼠體重較初始體重增長(zhǎng)了0.17%，其恢復(fù)初始體重程度較玉米油組和損傷組大，且具有顯著性差異（p<0.05）。

圖1 元寶楓籽油對(duì)LPS處理后小鼠體重變化的影響Fig.1 Effects of Acer truncatum Bunge seed oil on body weight changes in LPS-treated mice

2.2 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠臟器指數(shù)的影響

如表1，各組之間小鼠的心臟指數(shù)及腎臟指數(shù)差異都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。而LPS損傷組小鼠的肝臟及脾臟指數(shù)較正常組小鼠升高，睪丸指數(shù)較正常組小鼠降低，且具有顯著性差異（p>0.05），這一結(jié)果提示了LPS處理對(duì)小鼠的肝臟、脾臟、睪丸具有潛在的毒性作用。而玉米油組和元寶楓籽油組小鼠的肝臟指數(shù)及脾臟指數(shù)較LPS損傷組小鼠降低，其睪丸指數(shù)較LPS損傷組小鼠升高，但無(wú)顯著性差異（p>0.05）。

表1 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠臟器指數(shù)的影響（%）Table 1 Effects of Acer truncatum Bunge seed oil on organ index in LPS-treated mice

2.3 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度，重量與長(zhǎng)度比的影響

結(jié)腸的重量、長(zhǎng)度是評(píng)價(jià)腸道炎癥疾病所致腸壁增厚程度和炎癥強(qiáng)度的重要指標(biāo)，特別是結(jié)腸重量與長(zhǎng)度比能有效反映疾病發(fā)展的進(jìn)程[17]。與正常組相比而言，LPS處理能顯著造成小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度縮短至11.52 cm（圖2，p<0.05）。同時(shí)，相比于正常組小鼠，LPS處理還顯著造成了結(jié)腸重量與長(zhǎng)度比的升高至4.91 mg/mm（p<0.05）。而元寶楓籽油干預(yù)7 d后腸道損傷小鼠腸長(zhǎng)度恢復(fù)至11.82 cm，改善了LPS所致腸道炎癥模型小鼠結(jié)腸縮短的情況。此外，元寶楓籽油還能有效降低模型組小鼠結(jié)腸重量（至508.26 mg）和結(jié)腸重量與長(zhǎng)度比（4.21 mg/mm）（p<0.05）。

圖2 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度（a）、結(jié)腸重量（b）及結(jié)腸重量與長(zhǎng)度比（c）的影響Fig.2 Effects of Acer truncatum Bunge seed oil on colon length(a), weight (b) and colon weight to length (c) in LPS-treated mice

2.4 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠結(jié)腸病理改變的影響

通過觀察組織切片發(fā)現(xiàn)（圖3a～d），與正常組相比，LPS誘導(dǎo)損傷組小鼠結(jié)腸組織出現(xiàn)腸壁結(jié)構(gòu)破壞，上皮細(xì)胞壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)嚴(yán)重等病理改變。玉米油干預(yù)對(duì)LPS腸道損傷模型小鼠結(jié)腸組織黏膜的毀損，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等情況沒有得到較好改善。而連續(xù)灌胃元寶楓籽油7 d后，小鼠結(jié)腸組織上皮結(jié)構(gòu)明顯恢復(fù)正常，隱窩腺較完整，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，絨毛清晰。結(jié)果表明元寶楓籽油能夠改善腸道黏膜屏障功能，促進(jìn)黏膜修復(fù)。

圖3 楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠結(jié)腸病理改變（a～d）及結(jié)腸中MPO與MDA水平（e、f）的影響Fig.3 Effects of Acer truncatum Bunge seed oil on pathological changes, MPO and MDA in colon of LPS-treated mice

2.5 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠結(jié)腸組織中MPO酶活性與MDA水平的影響

MPO是嗜中性多形核白細(xì)胞（polymorphonuclear neutrophil，PMN）的特異性功能標(biāo)志并能夠反映其活化程度，主要存在于髓系細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒中。MPO的活化狀態(tài)不僅與急性或慢性炎癥狀態(tài)下組織損傷有關(guān)，還參與細(xì)胞間信號(hào)作用的各種生理過程并能作為判斷腸道炎癥強(qiáng)度的有效指標(biāo)[18]。同時(shí)，機(jī)體組織中過度的炎性反應(yīng)同時(shí)也會(huì)引發(fā)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，引發(fā)細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)從而造成MDA與氧化/亞硝化應(yīng)激生物標(biāo)志物4-羥基壬烯醛（4-hydroxynonenal，4-HNE）的升高[19]。由圖3b可知，腹腔注射LPS處理能顯著引發(fā)小鼠結(jié)腸中MPO酶活性及MDA水平的升高（p<0.05）。相反，元寶楓籽油處理則能顯著抑制LPS誘發(fā)的炎癥小鼠結(jié)腸中MPO活性及MDA水平（p<0.05），且相較于LPS損傷組小鼠降低了28.25%和35.10%，而較玉米油組降低了19.63%和30.43%。本研究結(jié)果提示元寶楓籽油可能通過調(diào)控MPO酶活性，減輕中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)程度；同時(shí)減輕損傷小鼠腸道中過度氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA的生成，從而逆轉(zhuǎn)LPS所造成的小鼠結(jié)腸組織的炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激損傷。此外，研究報(bào)道神經(jīng)酸干預(yù)能夠增強(qiáng)大鼠腦組織中谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase，GR）及γ-谷氨酰半胱氨酸連接酶（γ-glutamate cysteine ligase，γ-GCL）活力，升高大腦還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量并降低MDA水平從而改善1-溴丙烷染毒所造成的大鼠認(rèn)知功能損傷[20]。

2.6 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠血清中炎性細(xì)胞因子水平的影響

在炎癥反應(yīng)的刺激下，機(jī)體的免疫系統(tǒng)會(huì)發(fā)生紊亂，而免疫細(xì)胞會(huì)過度分泌一系列炎性細(xì)胞因子（如IL-1β，IL-6，IL-18，TNF-α）[21]。其中，IL-1β與TNF-α具有協(xié)同作用，能共同誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，促進(jìn)白細(xì)胞黏附，從而導(dǎo)致腸道組織損傷加重[22,23]。而IL-6和IL-18則是通過加強(qiáng)炎性細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，造成炎癥介質(zhì)大量產(chǎn)生，最終引起局部炎癥反應(yīng)[24]。如圖4所知，相較于正常組，LPS損傷組的小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均有顯著提高（p<0.05）。而玉米油組小鼠血清中細(xì)胞因子水平與LPS損傷組小鼠相比，IL-1β、IL-6、IL-18水平均有下降，TNF-α水平則略有上升，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。相反，元寶楓籽油組小鼠血清中細(xì)胞因子水平與LPS損傷組小鼠相比，IL-1β水平下降27.40%、IL-6水平下降24.80%、IL-18水平下降17.80%、TNF-α水平下降30.50%，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。元寶楓籽油組小鼠血清中細(xì)胞因子含量與玉米油組相比，IL-1β下降22.70%、IL-6下降20.40%、IL-18下降9.90%、TNF-α下降31.80%，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)果表明，元寶楓籽油干預(yù)能夠下調(diào)小鼠血清中細(xì)胞因子水平，控制腸道組織中炎癥反應(yīng)的進(jìn)程。此外，李彤與孫紅偉的[12]研究結(jié)果也提示，元寶楓油可明顯降低一次性力竭運(yùn)動(dòng)大鼠體內(nèi)血清中炎性細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α的水平。

圖4 元寶楓籽油對(duì)LPS損傷小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α含量的影響Fig.4 Effects of Acer truncatum Bunge seed oil on serum levels of IL-1β，IL-6，IL-18 and TNF-α in LPS-induced mice

2.7 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠結(jié)腸組織中炎性細(xì)胞因子水平的影響

結(jié)腸組織中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平的升高是腸道炎癥的重要特征之一[25]。由于免疫系統(tǒng)處于紊亂狀態(tài)，異常激活的TNF-α通過誘導(dǎo)杯狀細(xì)胞丟失，破壞結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)，減薄結(jié)腸黏膜層厚度，促使炎性細(xì)胞因子侵襲，進(jìn)而加速炎癥發(fā)展[26]。元寶楓籽油含有大量的神經(jīng)酸，神經(jīng)酸不僅有助于腦部疾病治療，還具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用[27]。王熙才等[10]研究結(jié)果也提示，元寶楓籽油處理能夠有效促進(jìn)小鼠體內(nèi)淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)小鼠免疫系統(tǒng)。如圖5所示，LPS損傷組的小鼠結(jié)腸組織中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平相較于正常組均有顯著提高（p<0.05）。玉米油組小鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子水平與損傷組相比，IL-6與IL-18水平略有下降，而IL-1β、TNF-α水平略有上升，但差異都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；元寶楓籽油組小鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子水平與LPS損傷組相比，IL-1β下降14.50%、IL-6下降23.10%、IL-18下降27.40%、TNF-α下降20.90%，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。元寶楓籽油組小鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子水平與較玉米油組相比，IL-1β下降12.80%、IL-6下降18.30%、IL-18下降19.80%、TNF-α下降20.30%，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)果提示元寶楓籽油可能通過糾正腸道免疫系統(tǒng)，抑制免疫細(xì)胞異常分泌炎性細(xì)胞因子，進(jìn)而改善腸道炎癥疾病。

圖5 元寶楓籽油對(duì)LPS損傷小鼠結(jié)腸組織中的IL-1β，IL-6，IL-18和TNF-α含量的影響Fig.5 Effects of Acer truncatum Bunge seed oil on the colon levels of IL-1β、IL-6、IL-18 and TNF-α in LPS-induced mice

2.8 元寶楓籽油干預(yù)對(duì)LPS處理后小鼠結(jié)腸組織中Nlrp3，Asc，Caspase1和Il1β的mRNA轉(zhuǎn)錄影響

亞油酸是一種重要的功能性多不飽和脂肪酸，具有降血脂，抗癌，預(yù)防動(dòng)脈有樣硬化等生理功能，同時(shí)還參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)[28]。有研究認(rèn)為亞油酸對(duì)炎癥反應(yīng)具有積極作用，能夠抑制IL-1β、IL-6、TNF-α和caspase-1等相關(guān)因子的表達(dá)，促進(jìn)傷口愈合，緩解炎癥水平[29,30]。但是，亞油酸的氧化產(chǎn)物能增加炎癥介質(zhì)生成，改變免疫細(xì)胞功能，從而加速誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生[31,32]。喬謙等[7]調(diào)查了我國(guó)天然分布區(qū)內(nèi)14個(gè)種源的元寶楓籽油后發(fā)現(xiàn)，元寶楓籽油中富含約91.47%的不飽和脂肪酸[其中，亞油酸（32.97%）、油酸（25.19%）、神經(jīng)酸（5.76%）、亞麻酸（2.76%）]及豐富的維生素E，具有良好的抗氧化作用。而玉米油則是以ω-6脂肪酸亞油酸為主的一類食用植物油，亞油酸含量高達(dá)51.7%[33]。如圖6示，LPS處理顯著造成小鼠結(jié)腸組織中Nlrp3、Asc、Caspase1和Il1β的m RNA表達(dá)水平增加（p<0.05）。與正常組小鼠相比，LPS處理的模型組小鼠結(jié)腸中Nlrp3表達(dá)水平上升約11.49倍，Asc表達(dá)水平上升5.16倍，Caspasee1表達(dá)水平升高7.17倍和Il1β表達(dá)水平升高10.23倍。而分別經(jīng)玉米油和元寶楓籽油處理后，LPS處理后小鼠結(jié)腸組織中Nlrp3、Asc、Caspase-1和Il-1β的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均明顯低于LPS模型小鼠（p<0.05）。與LPS損傷組相比，元寶楓籽油干預(yù)能夠分別抑制Nlrp3（41.80%）、Asc（49.85%）、Caspase-1（31.28%）和Il-1β（39.83%）的mRNA表達(dá)。Xie等[27]研究結(jié)果也同時(shí)提示經(jīng)18周飼喂富含亞油酸（7%玉米油提供）的新鮮飼料能有效下調(diào)自發(fā)結(jié)腸炎模型鼠（Il-10-/-小鼠）結(jié)腸組織中Il-1β等炎癥因子的表達(dá)水平。

圖6 元寶楓籽油對(duì)LPS損傷小鼠結(jié)腸組織中Nlrp3、Asc、Caspase1和Il1β的mRNA轉(zhuǎn)錄影響Fig.6 Effects of Acer truncatum Bunge seed oil on mRNA levels of Nlrp3, Asc, caspase-1 and Il1β in colon of LPS-treated mice

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，元寶楓籽油能有效緩解LPS誘導(dǎo)腸道損傷小鼠體重減輕和結(jié)腸縮短，抑制結(jié)腸組織上皮細(xì)胞凋亡，修復(fù)炎性反應(yīng)所致腸黏膜損傷，進(jìn)而恢復(fù)腸道屏障功能。能通過下調(diào)NLRP3炎性小體相關(guān)分子Nlrp3、Asc、Caspase1和Il1β的mRNA表達(dá)來改善腸道炎癥反應(yīng)。此外，元寶楓籽油還能減少結(jié)腸炎小鼠血清與結(jié)腸組織中炎性細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18）的生成，降低結(jié)腸中MPO活性及MDA生產(chǎn)水平。綜上所述，元寶楓籽油對(duì)腸道炎性損傷小鼠具有較好的組織修復(fù)和抗炎作用。