桃紅四物湯聯(lián)合二甲雙胍對(duì)2型糖尿病合并骨質(zhì)疏松大鼠骨折愈合的影響

李雷，陳萬海，那仁草克

（1.新疆庫爾勒市巴州人民醫(yī)院關(guān)節(jié)創(chuàng)傷外科，庫爾勒 841000；2.新疆庫爾勒市巴州人民醫(yī)院病案管理信息科，庫爾勒 841000）

骨質(zhì)疏松癥（OP）是一種常見的骨礦基代謝性疾病，表現(xiàn)為骨質(zhì)含量減少、骨密度（BMD）下降、骨脆性增高和骨組織顯微結(jié)構(gòu)改變等，導(dǎo)致受輕微創(chuàng)傷即可引發(fā)骨折[1-3]。OP已被世界衛(wèi)生組織列為21世紀(jì)人類健康的4大疾?。ㄐ哪X血管病、艾滋病、腫瘤、OP）之一[4]，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生命安全。有研究表明，2型糖尿病（T2DM）的高血糖狀態(tài)對(duì)成骨細(xì)胞有著直接的細(xì)胞毒性作用，可抑制成骨細(xì)胞的功能[5]。同時(shí)，T2DM在骨折愈合過程中會(huì)促進(jìn)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的過度表達(dá)，從而抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖[6]。此外，T2DM還會(huì)促進(jìn)骨痂內(nèi)軟骨細(xì)胞的吸收，導(dǎo)致骨痂面積的減小[7]。桃紅四物湯取自《醫(yī)壘元戎》，由當(dāng)歸、熟地黃、川芎、白芍、桃仁、紅花6味中藥組成，具有活血行氣、化瘀止痛之功效[8]，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，其具有擴(kuò)張血管、抗炎、抗氧化、抗過敏、降血脂、調(diào)節(jié)免疫等作用，目前臨床廣泛用于腦梗死、糖尿病末梢神經(jīng)炎、軟組織損傷、人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后等[9]。本研究旨在探究桃紅四物湯聯(lián)合二甲雙胍對(duì)T2DM合并OP大鼠骨折愈合的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取SPF級(jí)雌性SD大鼠40只，由本院醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)為SCXK（新）2019-0723，體質(zhì)量（200±20）g，于本院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心常規(guī)飼養(yǎng)，室溫維持（24±2）℃，濕度40%～65%，自然通風(fēng)，自由攝食飲水。

1.1.2 藥物 桃紅四物湯由當(dāng)歸、熟地黃、川芎、白芍、桃仁、紅花6味中藥構(gòu)成，以上中藥材均購自新疆九州通醫(yī)藥有限公司，經(jīng)檢驗(yàn)符合2015年版《中華人民共和國藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。取當(dāng)歸15 g，熟地黃15 g，川芎 15 g，白芍 15 g，桃仁 9 g，紅花 6 g，加水煎煮回流提取約1 h，過濾，將濾液置于水浴濃縮，至相當(dāng)于生藥含量為1 g/mL。

鹽酸二甲雙胍片購自中美上海施貴寶制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20023371，規(guī)格850 mg/片，批號(hào)：ABA4624。

1.1.3 試劑及儀器 10%水合氯醛：購自青島宇龍海藻有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H37022673；離心機(jī)：購自美國Sigma公司，型號(hào)3KI8；全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀：購自美國BioTek公司，試劑盒購自美國BioTSZ公司；全自動(dòng)生化分析儀：購自美國BeckmanCoulter公司，試劑盒購自美國BioTSZ公司；顯微電子計(jì)算機(jī)斷層掃描（microCT）：購自瑞士Scanco公司，型號(hào)CT40；雙能X線骨密度掃描儀：購自美國Hologic公司，型號(hào)HOLOGIC4500A；力學(xué)實(shí)驗(yàn)儀：購自日本島津公司，型號(hào)AG-1C。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將40只SD大鼠完全隨機(jī)分為正常組、模型組、桃紅四物湯組和聯(lián)合組（n=10），其中模型組、桃紅四物湯組和聯(lián)合組按以下方法建立T2DM合并OP模型。

1.2.2 T2DM模型的建立 正常組以普通飼料喂養(yǎng)，模型組、桃紅四物湯組和聯(lián)合組大鼠均給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)3周。于實(shí)驗(yàn)開始第1天時(shí)，禁食12h，腹腔注射35mg/kg的鏈脲佐菌素檸檬酸鈉緩沖液。第7天時(shí)，禁食12 h，檢測大鼠空腹血糖（FBG），若FBG≥13.9 mmol/L提示造模成功[10]，剔除造模失敗大鼠。每周定時(shí)測量大鼠尾靜脈血糖值并記錄。

1.2.3 OP模型的建立 第7天時(shí)，取T2DM造模成功的大鼠腹腔注射300 mg/kg的10%水合氯醛溶液麻醉，檢測各只大鼠右側(cè)股骨中段的BMD數(shù)值。背部術(shù)區(qū)備皮，碘伏消毒，取脊椎旁1 cm、髂骨嵴上2 cm為手術(shù)切口，切開約1 cm縱向切口，暴露雙側(cè)卵巢及輸卵管，切除雙側(cè)卵巢，將周圍軟組織納還，生理鹽水反復(fù)沖洗切口，逐層關(guān)閉并縫合切口。術(shù)后肌內(nèi)注射青霉素80萬單位，每日2次，連續(xù)注射3 d。術(shù)后第28天，腹腔注射300 mg/kg的10%水合氯醛麻醉后，再次檢查各只大鼠右側(cè)股骨中段BMD值，并與造模前相比，若差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），則提示造模成功，剔除造模失敗大鼠。

1.2.4 骨折大鼠模型的建立 第28天時(shí)，4組大鼠均腹腔注射300 mg/kg的10%水合氯醛麻醉，于右側(cè)股骨中段切開皮膚和皮下組織，分離肌層后暴露股骨，線鋸于股骨中段，橫行鋸斷股骨。將直徑1.5 mm的克氏針經(jīng)髓腔固定骨折斷端，逐層關(guān)閉并縫合。大鼠仰臥位置于骨折造模支架下，右后肢股骨以外展內(nèi)旋位固定在骨折造模支架的凹槽上，骨刀輕壓股骨中段，提起砝碼至25～30 cm處，使其自由落體撞擊下方螺母，螺母將力傳導(dǎo)至骨刀，造成股骨中段骨折，手法觸診判斷大鼠股骨是否骨折。手術(shù)完成后，在麻醉狀態(tài)下立即拍攝患肢的正位X線片，確認(rèn)骨折類型、移位程度、骨折斷端對(duì)位對(duì)線情況、內(nèi)固定是否牢靠、有無變形、斷裂、松動(dòng)等異常，篩除不符合實(shí)驗(yàn)要求的動(dòng)物。要求骨折類型為橫行骨折或短斜行骨折，并且無明顯移位視為造模成功。術(shù)后肌內(nèi)注射青霉素80萬單位，每日2次，連續(xù)注射3 d。

1.2.5 治療方法 桃紅四物湯組和聯(lián)合組參考實(shí)驗(yàn)大鼠和人的用藥劑量換算方法[11]及文獻(xiàn)報(bào)道[12]的劑量，于第7天開始每天以6g/kg的劑量灌胃桃紅四物湯藥液；聯(lián)合組在此基礎(chǔ)上灌胃100 mg/kg的二甲雙胍生理鹽水混懸液；正常組和模型組于第7天開始按照大鼠的體質(zhì)量，每日灌胃10 mL/kg生理鹽水。每周定時(shí)稱量4組大鼠的體質(zhì)量，并根據(jù)其變化調(diào)節(jié)藥物用量。治療6周后，即第71天時(shí)，處死各組大鼠，取樣并檢測相關(guān)指標(biāo)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 X線檢查 治療結(jié)束后，4組大鼠均腹腔注射300 mg/kg的10%水合氯醛麻醉，采用DR 7500系統(tǒng)對(duì)各組大鼠行X線檢查。

1.3.2 BMD 采用雙能X線全身骨密度測量儀檢測股骨BMD值。

1.3.3 蘇木精-伊紅（HE）染色 治療結(jié)束后處死各組大鼠，取股骨，置于乙二胺四乙酸（EDTA，pH值為7.20）溶液中脫鈣，行常規(guī)包埋、切片、脫蠟，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察骨痂微結(jié)構(gòu)。

1.3.4 骨痂相關(guān)指標(biāo)檢查 以microCT掃描股骨標(biāo)本，并利用自帶軟件獲取相對(duì)骨體積（BV）、骨小梁數(shù)（Tb．N）、骨小梁厚度（Tb．Th）、骨小梁分離度（TB.Sp）、連接密度（Conn.D）、骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）和骨表面積體積比（BS/BV）等參數(shù)。

1.3.5 生物力學(xué)性能 處死各組大鼠后，取右側(cè)股骨制作標(biāo)本，用濕紗布包裹，采用力學(xué)實(shí)驗(yàn)儀進(jìn)行4點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)。頂端跨距8 mm，底端跨距20 mm，加載速度為1 mm/min，測量期間保持各標(biāo)本位置一致。通過載荷-位移曲線獲得最大載荷，以右側(cè)股骨最大載荷與左側(cè)非骨折側(cè)股骨最大載荷的比值表示骨折載荷恢復(fù)率（%）。

1.3.6 FBG 于實(shí)驗(yàn)第7天開始，每周固定時(shí)間取大鼠尾靜脈血檢測FBG值，記錄其變化趨勢(shì)。

1.3.7 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、纖維蛋白原（FIB）、堿性磷酸酶（ALP）和D-二聚體的表達(dá)水平 采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測各組大鼠血清中VEGF和FIB的表達(dá)水平，采用速率法檢測血清中ALP和D-二聚體的表達(dá)水平，以上操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情況 實(shí)驗(yàn)期間共有2只大鼠死亡，其中正常組1只、模型組1只；T2DM模型建立后共有2只大鼠血糖指標(biāo)未達(dá)標(biāo)，其中二甲雙胍組1只、聯(lián)合組1只；OP模型均建立成功。最終各組大鼠數(shù)量為：正常組9只，模型組9只，二甲雙胍組9只，聯(lián)合組9只。

2.2 X線檢查 正常組大鼠骨折線已幾乎不見，骨折端出現(xiàn)較高密度的骨痂，愈合良好；模型組大鼠骨折線仍清晰可見，且骨折端未見骨痂；桃紅四物湯組和聯(lián)合組與模型組相比，骨折線不清晰，且可見骨性骨痂連接于骨折端。見圖1。

圖1 各組大鼠骨折端X線檢查結(jié)果

2.3 各組大鼠BMD比較 治療后模型組大鼠BMD低于正常組（P＜0.05）；與模型組相比，桃紅四物湯組和聯(lián)合組的BMD值提高（P＜0.05）；與桃紅四物湯組相比，聯(lián)合組的BMD值較高（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠BMD比較（±s）g/cm2

表1 各組大鼠BMD比較（±s）g/cm2

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與桃紅四物湯組比較，△P＜0.05。

組別 n B M D正常組 9 0.2 6±0.0 1模型組 9 0.1 6±0.0 2*桃紅四物湯組 9 0.2 1±0.0 2#聯(lián)合組 9 0.2 3±0.0 1#△

2.4 HE染色 正常組大鼠骨折端的骨性骨痂已基本恢復(fù)成板骨，可見少量軟骨分布于外骨痂中；模型組可見較多軟骨和纖維組織，而骨性骨痂較少；桃紅四物湯組和聯(lián)合組與模型組相比，骨性骨痂明顯增多，且軟骨和纖維組織較少，可見編織骨和板層骨開始融合。見圖2。

圖2 各組大鼠骨折組織HE染色結(jié)果（×200）

2.5 骨痂相關(guān)指標(biāo)分析 模型組大鼠的Tb.N、Tb.Th、Conn.D和BV/TV均低于正常組，而Tb.Sp和BS/BV均高于正常組（P＜0.05）；桃紅四物湯組和聯(lián)合組的Tb.N、Tb.Th、Conn.D和BV/TV均高于模型組（P＜0.05），Tb.Sp和BS/BV低于模型組（P＜0.05）；與桃紅四物湯組相比，聯(lián)合組Tb.N、Tb.Th、Conn.D和BV/TV均較高，BS/BV 較低（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠骨痂顯微結(jié)構(gòu)參數(shù)比較（±s）

表2 各組大鼠骨痂顯微結(jié)構(gòu)參數(shù)比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與桃紅四物湯組比較，△P＜0.05。

組別 n Tb.N（1/mm） Tb.Th（μm） Tb.Sp（nm） Conn.D（1/mm3） BV/TV（%） BS/BV（1/mm）正常組 9 2.82±0.11 265.35±20.45 208.12±13.11 125.89±10.91 0.53±0.03 7.56±1.66模型組 9 1.34±0.05* 121.09±10.84* 325.11±15.64* 32.32± 9.14* 0.35±0.02* 19.44±2.23*桃紅四物湯組 9 2.17±0.09# 204.53±17.35# 227.65±14.21# 96.40±10.12# 0.47±0.03# 11.31±1.81#聯(lián)合組 9 2.71±0.13#△ 253.27±18.63#△ 218.94±13.92# 115.72±12.38#△ 0.51±0.02#△ 8.95±1.21#△

2.6 生物力學(xué)性質(zhì) 根據(jù)載荷-位移曲線獲得最大載荷（N），最大載荷恢復(fù)率（%）以骨折側(cè)股骨最大載荷與非骨折側(cè)股骨最大載荷的比值來表示，結(jié)果顯示，模型組最大載荷和最大載荷恢復(fù)率低于正常組（P＜0.05）；桃紅四物湯組與聯(lián)合組的最大載荷及最大載荷恢復(fù)率均高于模型組（P＜0.05）；與桃紅四物湯組相比，聯(lián)合組最大載荷和最大載荷恢復(fù)率較高（P＜0.05）。見表3。

表3 各組大鼠生物力學(xué)性質(zhì)比較（±s）

表3 各組大鼠生物力學(xué)性質(zhì)比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與桃紅四物湯組比較，△P＜0.05。

組別 n 最大載荷（N） 最大載荷恢復(fù)率（%）正常組 9 38.32±3.93 95.35±5.45模型組 9 16.34±3.10* 41.09±4.84*桃紅四物湯組 9 26.17±3.35# 64.53±4.35#聯(lián)合組 9 29.89±3.12#△ 73.27±4.63#△

2.7 各組大鼠FBG變化 建立T2DM模型后，與正常組相比，模型組大鼠FBG升高；桃紅四物湯組和聯(lián)合組大鼠FBG經(jīng)治療后平穩(wěn)下降并接近正常組水平。見圖3。

圖3 各組大鼠FBG變化趨勢(shì)（±s，n=9）

2.8 血清VEGF、FIB、ALP和D-二聚體表達(dá)水平比較 與正常組相比，模型組血清VEGF、FIB、ALP和D-二聚體的表達(dá)水平提高（P＜0.05）；與模型組相比，桃紅四物湯組和聯(lián)合組VEGF、FIB、ALP和D-二聚體的表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與桃紅四物湯組相比，聯(lián)合組VEGF、FIB和D-二聚體的表達(dá)水平較低，ALP 增加（P＜0.05）。見圖4。

圖4 各組大鼠血清VEGF、FIB、ALP和D-二聚體的表達(dá)水平比較（±s，n=9）

3 討論

OP的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，諸如骨質(zhì)量、幾何結(jié)構(gòu)、骨轉(zhuǎn)換率等可遺傳基因以及維生素D受體（VDR）、Ⅰ型膠原蛋白、雌激素受體、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）等細(xì)胞因子均可能影響骨代謝，從而對(duì)OP的發(fā)生發(fā)展起重要影響作用[13-15]。骨折是OP最常見的并發(fā)癥，當(dāng)成骨細(xì)胞的成骨功能和破骨細(xì)胞的骨吸收功能失衡，便會(huì)引起骨量減少、結(jié)構(gòu)退化、骨脆性增加，一旦載荷超過自身的支持強(qiáng)度即可引起骨折，大大增加了患者的致殘率和致死率[16]。糖尿病患者體內(nèi)的高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致機(jī)體蓄積大量糖基化終末產(chǎn)物，其不僅能通過與膠原蛋白發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而影響骨的質(zhì)量，還可直接抑制成骨細(xì)胞的增殖和分化，并誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡，從而加重OP的程度。

桃紅四物湯由當(dāng)歸、熟地黃、川芎、白芍、桃仁、紅花6味中藥組成，當(dāng)歸補(bǔ)血活血，川芎理氣行血，熟地黃補(bǔ)血滋陰，白芍養(yǎng)血柔肝，緩急止痛，加入桃仁和紅花，增加了活血祛瘀功效[17]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，當(dāng)歸可促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖和分化，改善骨折部位微循環(huán)和血供情況；川芎可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的功能，進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫功能，有助于修復(fù)軟組織損傷；白芍具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、增強(qiáng)造血功能等作用，同樣有助于改善局部血液流變學(xué)狀態(tài)、加快毛細(xì)血管增生等，從而改善骨代謝狀況[18]。唐偲等[19]和李盼祥等[20]諸多學(xué)者均報(bào)道桃紅四物湯可改善OP骨折患者的炎癥因子表達(dá)、骨代謝狀況和血液流變學(xué)狀態(tài)，緩解骨折部位的腫脹和疼痛，促進(jìn)骨折愈合和骨功能恢復(fù)。然而，關(guān)于桃紅四物湯用于T2DM合并OP骨折治療的研究鮮有報(bào)道，因此本研究旨在探究桃紅四物湯對(duì)T2DM合并OP大鼠骨折愈合的影響。

OP為骨礦基代謝異常性疾病，可導(dǎo)致骨質(zhì)含量減少、BMD下降、骨小梁稀松、骨脆性增高、骨機(jī)械強(qiáng)度下降等，因此BMD為診斷和預(yù)測OP最好的單一指標(biāo)[21]。同時(shí)，OP骨折在愈合過程中成骨速度減慢，礦物質(zhì)沉積速度減慢，皮質(zhì)骨厚度變薄，從而導(dǎo)致骨痂形成量減少、軟骨組織和微結(jié)構(gòu)受損、生物力學(xué)性能下降，極易再次發(fā)生骨折。骨的微觀結(jié)構(gòu)和骨的脆性密切相關(guān)，骨小梁厚度和數(shù)量在發(fā)生OP時(shí)數(shù)值均降低，從而導(dǎo)致骨最大載荷量降低，因此骨小梁的丟失會(huì)導(dǎo)致骨折風(fēng)險(xiǎn)增高。骨量的減少可導(dǎo)致骨骼結(jié)構(gòu)的破壞，如皮質(zhì)骨變薄、骨內(nèi)穿孔、骨小梁變細(xì)、骨小梁數(shù)量減少、骨小梁斷裂和消失等，骨生物力學(xué)指標(biāo)可從各方面反映骨骼的物理特征和結(jié)構(gòu)變化，從而定量反映OP發(fā)生程度[22]。在本研究中，X線檢查和骨組織HE染色結(jié)果可見，桃紅四物湯組和聯(lián)合組大鼠骨折端愈合情況優(yōu)于模型組。與此同時(shí)，桃紅四物湯組和聯(lián)合組大鼠治療后BMD值提高，骨痂相關(guān)指標(biāo)及生物力學(xué)性能均得到改善，提示二甲雙胍和桃紅四物湯可顯著提高OP大鼠BMD值，改善生物力學(xué)性能和骨痂形成，促進(jìn)T2DM合并OP大鼠骨折愈合。

流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，T2DM患者骨折的發(fā)生率顯著升高[23]?；A(chǔ)研究表明，高血糖環(huán)境可減緩骨折的愈合，損傷骨痂的骨量和微結(jié)構(gòu)，而對(duì)血糖水平的干預(yù)可改善BMD和骨痂微結(jié)構(gòu)，促進(jìn)骨折的愈合，其機(jī)制可能與長期高血糖水平對(duì)成骨細(xì)胞的毒性損傷，以及高血糖誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子的高表達(dá)而抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖有關(guān)[24-25]。本研究通過連續(xù)監(jiān)測各組大鼠FBG變化趨勢(shì)，發(fā)現(xiàn)二甲雙胍組和聯(lián)合組大鼠FBG平穩(wěn)下降并接近正常組水平，結(jié)合上述BMD值、骨痂相關(guān)指標(biāo)及生物力學(xué)性能的結(jié)果可以看出，聯(lián)合組的BMD、骨痂相關(guān)指標(biāo)和生物力學(xué)性能均優(yōu)于桃紅四物湯組，提示血糖水平可能干預(yù)了骨折的修復(fù)和愈合過程，因此，對(duì)血糖水平的調(diào)控可能會(huì)有效改善OP程度并促進(jìn)骨折愈合。

目前多數(shù)學(xué)者均研究認(rèn)為骨折愈合是一個(gè)涉及多種細(xì)胞因子和生長因子的復(fù)雜過程，包括VEGF、FIB、血小板衍生生長因子（PDGF）、胰島素樣生長因子（IGF）、ALP和D-二聚體等在內(nèi)的血清因子均影響骨折的愈合。VEGF是一種高特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，可直接或間接影響血管再生的各個(gè)環(huán)節(jié)，具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增殖、增加血管通透性、促進(jìn)新生血管形成等作用[26]，可為局部骨再生及代謝提供有利的微環(huán)境。既往研究表明，VEGF還可作用于成骨細(xì)胞，誘導(dǎo)其遷移和分化，促進(jìn)骨形成和骨重建。FIB是一種凝血相關(guān)蛋白，其表達(dá)水平直接影響血液黏度，骨折創(chuàng)傷通常會(huì)伴有不同程度的軟組織損傷及出血，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷激活機(jī)體凝血系統(tǒng)，可導(dǎo)致FIB表達(dá)水平的提高[27]。吳龍昌等[28]報(bào)道在骨折創(chuàng)傷的刺激下，軟組織、血管等受到損傷，F(xiàn)IB水平會(huì)反應(yīng)性增高。ALP是由骨細(xì)胞分泌的一種促基質(zhì)鈣化的糖蛋白，是一種骨形成的標(biāo)志物，能反映骨細(xì)胞活性的變化情況。另有基礎(chǔ)研究表明，ALP可能參與了Notch信號(hào)通路的調(diào)控，與核轉(zhuǎn)錄因子-κB受體活化因子配體（RANKL）及骨保護(hù)素（OPG）的表達(dá)密切相關(guān)，參與破骨細(xì)胞的分化、成熟和形成，從而最終影響骨重建及骨強(qiáng)度[29]。D-二聚體為纖維蛋白降解產(chǎn)物，可反映骨折愈合的情況。溫慧敏等[30]研究顯示，骨折模型大鼠的血清D-二聚體表達(dá)水平顯著升高。國外學(xué)者研究顯示，通過對(duì)VEGF等細(xì)胞因子的調(diào)控，一方面可發(fā)揮其血管內(nèi)皮活性而促進(jìn)骨形成和骨重建，另一方面還可上調(diào)骨痂內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白的表達(dá)，從而促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞，提高軟細(xì)胞活性，有益于骨折愈合[31]。本研究中，桃紅四物湯組和聯(lián)合組大鼠治療后血清VEGF、FIB、ALP、D-二聚體的表達(dá)水平較模型組均降低，提示二甲雙胍聯(lián)合桃紅四物湯可通過調(diào)節(jié)血清VEGF、FIB、ALP、D-二聚體的表達(dá)而促進(jìn)骨折愈合。范聯(lián)鯤等[32]報(bào)道桃紅四物湯可提高骨折修復(fù)細(xì)胞因子如VEGF、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的表達(dá)水平，促進(jìn)骨折處血管新生，為骨修復(fù)提供良好的環(huán)境。

綜上，桃紅四物湯聯(lián)合二甲雙胍可降低血糖水平，提高OP大鼠的BMD和生物力學(xué)性能，改善骨痂的形成，從而有效促進(jìn)T2DM合并OP大鼠骨折的愈合。其機(jī)制可能與以下兩個(gè)方面有關(guān)：1）二甲雙胍調(diào)控血糖水平，從而避免了高血糖環(huán)境對(duì)成骨細(xì)胞的毒性作用，減少了對(duì)骨痂內(nèi)軟骨組織和結(jié)構(gòu)的損傷，從而有利于骨折處的恢復(fù)。2）桃紅四物湯活血化瘀，改善局部血供和氧供，降低相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平，加速骨細(xì)胞分化，促進(jìn)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的修復(fù)功能，并促進(jìn)血管新生，改善局部微循環(huán)，從而加速骨折部位的修復(fù)和愈合。