外周血調(diào)節(jié)性T細胞和CD4+T細胞對浸潤性乳腺癌臨床分期及預(yù)后的評估價值

許英 丘元福 林帝金 楊宗蓓 羅曉紅 段朝暉

乳腺癌是目前女性最常見的惡性腫瘤之一，是導(dǎo)致女性死亡的重要原因［1］。浸潤性乳腺癌是乳腺癌中最常見的類型，約占80%。浸潤性乳腺癌的癌細胞已經(jīng)突破上皮基底膜的限制，向間質(zhì)內(nèi)廣泛浸潤，容易發(fā)生癌灶轉(zhuǎn)移［2］。因此，對浸潤性乳腺癌患者預(yù)后進行早期評估，及時采取相應(yīng)的臨床干預(yù)措施，有助于降低患者死亡率。免疫細胞、免疫效應(yīng)分子與乳腺癌患者臨床病理因素之間密切相關(guān)［3］。乳腺癌腫瘤免疫微環(huán)境的研究顯示，腫瘤浸潤性淋巴細胞（Tumor infiltrating Lym-phocytes，TILs）在機體抗腫瘤免疫效應(yīng)和改善預(yù)后中發(fā)揮重要作用［4］。但外周血液循環(huán)中的淋巴細胞與患者預(yù)后的關(guān)系目前研究尚不明確，且不同研究的結(jié)果常存在矛盾。乳腺癌患者多數(shù)存在細胞免疫功能紊亂的情況，其中T 淋巴細胞介導(dǎo)的細胞免疫在機體抗腫瘤效應(yīng)中起重要作用［5］。調(diào)節(jié)性T 細胞（regulatory T cells，Treg）是一個異質(zhì)性細胞群體，發(fā)揮免疫負性調(diào)節(jié)作用。本研究通過回顧性分析浸潤性乳腺癌患者治療前外周血CD4+T 淋巴細胞和調(diào)節(jié)性T 細胞絕對計數(shù)水平與患者預(yù)后的關(guān)系，旨在研究細胞免疫功能監(jiān)測在評估浸潤性乳腺癌預(yù)后中的檢測價值。

1 臨床資料

1.1 一般資料 入選條件：（1）具有完整的臨床資料，包括年齡、性別、首診日期、腫瘤大小、腫瘤臨床分期、組織學(xué)分級、病理類型、手術(shù)方式、治療方案及定期隨訪結(jié)果；（2）術(shù)前對外周血T 淋巴細胞亞群和Treg 水平進行流式細胞術(shù)檢測。2016 年1 月至2016 年12 月就診于中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院乳腺外科的、符合入選條件的浸潤性初診乳腺癌患者共121 例。本研究腫瘤的分期參照AJCC乳腺癌TNM 分期標準；腫瘤的分子分型按照2013年圣安東尼奧共識對乳腺癌分子分型進行診斷。

1.2 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析。分類變量以計數(shù)（百分比）表示，連續(xù)變量以平均值±標準差表示。對數(shù)據(jù)進行組間比較時，分類變量采用Pearson 檢驗，連續(xù)變量采用t檢驗，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 外周血Treg 和CD4+T 細胞的絕對計數(shù)與臨床病理特征之間關(guān)系 121例患者外周血中CD4+T細胞中位值為684 個/μL，Treg 中位值為35 個/μL；以中位值為臨界值將患者分為低表達和高表達組。將患者的年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移情況和遠處轉(zhuǎn)移等臨床病理因素與外周血Treg 和CD4+T 表達水平進行相關(guān)性分析，見表1、2。

表1 121 例浸潤性乳腺癌患者外周血CD4+T 細胞絕對計數(shù)與臨床病理特征關(guān)系

2.2 外周血Treg 和CD4+T 細胞絕對計數(shù)在不同TNM 分期患者分組中的差異表達分析 Treg 在Ⅳ期患者中表達較Ⅰ期患者中明顯下降（P<0.01）。CD4+T 細胞在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期患者中表達較Ⅰ期患明顯下降。詳見圖1。

圖1 Treg 和CD4+T 細胞絕對計數(shù)在不同TNM 分期患者中的表達

2.3 外周血Treg 和CD4+T 細胞絕對計數(shù)在是否合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者分組中的差異表達分析根據(jù)患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，將患者分為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組LN（-）和陽性組LN（+），采用獨立樣本t檢驗分析浸潤性乳腺癌患者Treg 和CD4+T細胞絕對計數(shù)與患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，詳見圖2。

圖2 Treg 和CD4+T 細胞絕對計數(shù)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（-/+）患者中的表達

表2 121 例浸潤性乳腺癌患者外周血調(diào)節(jié)性T 細胞絕對計數(shù)與臨床病理特征關(guān)系

2.4 外周血Treg 和CD4+T 細胞絕對計數(shù)在是否發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移和/或復(fù)發(fā)的患者分組中的差異表達分析 根據(jù)患者是否存在復(fù)發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移的情況，將患者分為復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移陰性組R/M（-）和陽性組R/M（+），采用獨立樣本t 檢驗分析浸潤性乳腺癌患者Treg 和CD4+T 細胞絕對計數(shù)與患者復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，詳見圖3。

圖3 Treg 和CD4+T 細胞絕對計數(shù)在乳腺癌復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移（-/+）的比較

3 討 論

乳腺癌Ⅲ、Ⅳ期患者與Ⅰ、Ⅱ期患者相比，CD4+T 細胞顯著降低［6］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：腫瘤大、TNM 分期高、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移的患者，外周血中CD4+T 細胞水平較低，提示低水平CD4+T 細胞與更差的乳腺癌預(yù)后相關(guān)。但也有研究表明，外周血CD4+T 細胞比例越高，越易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示與腫瘤進展和預(yù)后不良有關(guān)［7］。這可能與其入組的臨床病例較少，數(shù)據(jù)存在偏移有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移的患者外周血Treg 絕對計數(shù)較未發(fā)生淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移患者更低，提示：低水平Treg 與較差的預(yù)后相關(guān)。導(dǎo)致該結(jié)果的可能原因是：腫瘤晚期患者免疫整體功能低下，淋巴細胞數(shù)目顯著減少，導(dǎo)致Treg 絕對計數(shù)減少；Treg 聚集在腫瘤微環(huán)境中，導(dǎo)致外周血中Treg 含量下降。Treg 細胞可通過多種途徑促進腫瘤細胞的免疫逃逸，如：通過分泌免疫抑制性細胞因子（如TGF-?、IL-10、IL-35等），發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)［8］；通過表面組成性表達CD25（IL2Rɑ 鏈），與效應(yīng)T 細胞競爭性結(jié)合并大量消耗IL-2，從而抑制效應(yīng)細胞（如CD4+和CD8+T淋巴細胞）的增殖［9］；通過表面組成性表達細胞毒性T 淋巴細胞抗原（CTLA），與DC 表面配體CD80和CD86 相互作用，從而阻斷它們的共刺激功能和隨后的T 細胞活化［10］。本研究結(jié)果提示外周血中Treg 絕對計數(shù)的檢測可用于篩選高危乳腺癌患者和有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險的患者。

綜上所述，本研究采用流式細胞術(shù)方法檢測外周血免疫細胞絕對計數(shù)為臨床評估乳腺癌患者的預(yù)后提供了一種新的思路。外周血CD4+T 細胞及Treg 絕對計數(shù)可以作為潛在的評估浸潤性乳腺癌預(yù)后的監(jiān)測指標。但本研究屬于回顧性分析，符合條件的病例數(shù)較少，且為單中心研究；外周血CD4+T 細胞及Treg 在乳腺癌預(yù)后評估中的檢測價值仍需前瞻性、多中心、大樣本的臨床研究進一步驗證。