香菇種間雜交選育菌絲耐高溫菌株*

常 堃，蔡 婧，李世華，李為民，張九玲，李 軍，肖 艷，劉 杰，田繼成

（十堰市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北 十堰 442000）

湖北省十堰市香菇（Lentinula edodes）栽培歷史悠久，栽培模式豐富[1]，但無論是春栽模式還是秋栽模式，均存在菌絲的高溫越夏階段。安全越夏已成為香菇栽培成功的重要保障[2]，即便是夏季出菇的反季節(jié)栽培模式，在轉(zhuǎn)潮階段，此時的菌絲恢復(fù)階段仍屬于高溫期養(yǎng)菌。為此選育菌絲耐高溫的香菇品種十分必要。

選用十堰本地春栽主栽品種9608、秋栽主栽品種久香4號為雙核親本，以反季節(jié)品種申香215為單核親本，利用“布勒現(xiàn)象”衍生而來的雙單雜交技術(shù)[3]進行雜交試驗，該雜交技術(shù)是一種目的性較強的常規(guī)育種手段。香菇的有性生殖方式為異宗結(jié)合，利用雙單雜交技術(shù)，將具有優(yōu)良特性的香菇雙核菌絲，對需要改良菌株的單核菌絲進行雙單配對，形成雙核菌絲，從而選育出新的雜交菌株[4]。先對親本菌株進行雜交，再對所得雜交菌株的菌絲進行高溫處理，獲得耐高溫目的雜交菌株后，進行出菇試驗，初步篩選出具有栽培潛力的雜交菌株。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

試驗所用香菇菌種9608、久香4號以及申香215，均保存于湖北省十堰市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所。

1.2 培養(yǎng)基質(zhì)

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，水 1 000 mL。

栽培料：硬雜木屑選用本地栓皮櫟粉碎，顆粒度為10 mm×22 mm×（1～3）mm，含量80%，麩皮19%、石膏1%，含水量60%。

1.3 雙單雜交

采用平板稀釋法，在PDA培養(yǎng)基上獲得申香215菌株的單核孢子，純化培養(yǎng)獲得申香215的單核菌絲[5]。將其與9608和久香4號的雙核菌絲分別進行對峙培養(yǎng)，即于同一PDA試管中，使雙核菌絲位于試管底部，單核菌絲位于試管中部，菌絲塊之間相差4 cm～5 cm，26℃避光培養(yǎng)10 d～15 d后，挑取單核菌絲靠近試管前端的邊緣菌塊進行鏡檢，具有鎖狀聯(lián)合者則視為雜交成功[6]，轉(zhuǎn)接到PDA試管中26℃擴大培養(yǎng)。

1.4 高溫處理

待擴大培養(yǎng)的雜交菌株菌絲萌發(fā)并延伸至2 cm左右時，將其置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)1 d后，30℃培養(yǎng)1 d，再于32℃培養(yǎng)至菌絲長滿試管。培養(yǎng)箱為電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.5 雜交菌株的篩選

選擇菌絲能夠長滿試管的雜交菌株進行菌種制作，26℃避光培養(yǎng)30 d～40 d，將生長速度過慢或無法生長的雜交菌株淘汰。

1.6 雜交菌株生長速度測定

對篩選出的雜交菌絲使用培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)，用打孔器對雜交子進行挑取，獲得的均勻菌塊（直徑0．8 cm）接入PDA培養(yǎng)皿（直徑9 cm）正中央。每3個培養(yǎng)皿一組，置于26℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察菌絲長勢，測量菌絲長度，計算平均生長速度[7]。

1.7 雜交菌株栽培試驗

于3月初到4月底進行出菇試驗。用15 cm×30 cm×0．05 cm聚乙烯塑料袋裝料（袋料干重220 g），每個菌株接種15袋，設(shè)3個重復(fù)，即每個重復(fù)5袋，接種后培養(yǎng)室25℃避光培養(yǎng)，菌絲滿袋后刺小孔促進轉(zhuǎn)色，轉(zhuǎn)色后進入出菇房進行劃口出菇管理，第一潮菇結(jié)束，待菌絲恢復(fù)對菌袋進行12 h泡水處理，刺激轉(zhuǎn)潮出菇。

記錄各雜交菌株的出菇溫度（出菇室內(nèi)上午8點至下午3點內(nèi)最溫度低至最高溫度）、出菇期（第一潮菇第一個原基形成到第二潮菇最后一個菇采收的時間）、采收期（采收第一個菇到最后一個菇的時間）、單菇重、總重量及生物學(xué)效率，對每個雜交菌株子實體隨機取樣，對菌蓋厚度、菌蓋直徑、菌柄長度以及菌柄厚度進行測量。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙單雜交

將菌株9608和久香4號分別與菌株申香215的60份單核菌絲進行雙單雜交，獲得9X2（9608與申香215雙單雜交）雜交菌株58株，獲得久X2（久香4號與申香215雙單雜交）雜交菌株41株。

2.2 高溫處理

高溫處理后共獲得21株雜交菌株。其中9X2雜交菌株有15株，久X2雜交菌株有6株。

2.3 雜交菌株篩選

制種后淘汰生長過慢及無法正常生長的菌株，共獲得10株雜交菌株。其中9X2雜交菌株有8株，久X2雜交菌株有2株。

2.4 雜交菌株生長速度測定

各雜交菌株的生長速度見表1。

表1 菌絲生長速度Tab．1 Mycelial growth rate

由表1可知，不同雜交菌株的菌絲生長速度各有不同，生長速度范圍為 0．35 cm·d-1～0．60 cm·d-1；其中久X2-31雜交菌株菌絲生長速度最快，雜交菌株9X2-28菌絲生長速度最慢；大部分雜交菌株菌絲的生長速度都在 0．40 cm·d-1以上。

2.5 雜交菌株栽培試驗結(jié)果

經(jīng)過出菇試驗，10個雜交菌株的試驗結(jié)果見表2。

表2 雜交菌株菌絲生長性狀Tab．2 Mycelial growth characteristics of hybrid strains

由表2所示，供試雜交菌株第一潮出菇期范圍在15 d～23 d，采收期范圍在5 d～17 d；第二潮出菇期范圍在9 d～23 d，采收期范圍在5 d～13 d，其中雜交菌株久X2-4的出菇期和采收期均較短。供試雜交菌株久X2-4兩潮菇的平均單袋產(chǎn)量以及生物學(xué)效率均為最高，雜交菌株9X2-8和久X2-31第二潮均無產(chǎn)量，9X2-5的平均單菇重最低，僅有9．57 g。供試雜交菌株的出菇溫度范圍在8℃～26℃，其中雜交菌株9X2-19、9X2-37、久X2-4均能在26℃的高溫環(huán)境下出菇。

考察比較了供試雜交菌株出菇子實體的菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌蓋直徑、菌柄長度等性狀，結(jié)果見表3。

表3 雜交菌株子實體特征Tab．3 Fruitbody characteristics of hybrids

如表3所示，供試雜交菌株9X2-5子實體的菇形最小，雜交菌株久X2-4、久X2-31、9X2-37的子實體菇形較大，但是雜交菌株久X2-4的菇面較黑，雜交菌株9X2-19的菌柄最短且呈上粗下細的錐子型。

3 小結(jié)

生產(chǎn)實際中，菌絲在高溫期生長情況一直是影響栽培成功的關(guān)鍵，為此利用高溫處理雜交菌株菌絲，并對所得雜交菌株進行出菇試驗。考慮到十堰地區(qū)3月份仍有秋栽香菇和春栽香菇出菇，同時4月份部分反季節(jié)香菇開始正式出菇，因此選擇3月初至4月底進行出菇試驗，有利于更好地觀察雜交菌株的特性。

本地春栽香菇平均產(chǎn)量在800 g/袋～1 000 g/袋（17 cm×58 cm×0．06 mm的袋子），生物轉(zhuǎn)化率在64．6%～86．2%。由于本研究使用小袋劃口出菇的模式，因此大部分雜交菌株第二潮表現(xiàn)都不理想。篩選所得雜交菌株9X2-19的產(chǎn)量較高，在只出兩潮的情況下生物轉(zhuǎn)化率已達到常規(guī)栽培的生物轉(zhuǎn)化率范圍，同時子實體大部分菌柄呈上粗下細的錐子型，與段木栽培的子實體菇形相似，符合市面上對段木香菇的要求，因此很適合作為段木栽培品種的替代品種進行栽培，擁有一定的市場潛力。雜交菌株久X2-4產(chǎn)量高，出菇呈爆發(fā)性出菇（現(xiàn)蕾較為一致），且出菇期較長，適合作為秋栽花菇品種，同時雜交菌株久X2-4具有菌齡較短（菌絲生長快），現(xiàn)蕾較一致的特點，非常符合火鍋店活體采摘香菇品種的需求。雜交菌株9X2-5的子實體菇形非常小，適合作為以加工為油炸風(fēng)味香菇食品為目的的品種進行栽培。后期進行了雜交菌株9X2-19和久X2-4初步的拮抗試驗，結(jié)果表明，雜交菌株9X2-19和久X2-4均與親本產(chǎn)生拮抗，初步表明雜交菌株為不同于親本的菌株。下一步將對雜交菌株久X2-4進行秋栽中間試驗，雜交菌株9X2-19進行春栽及反季節(jié)中間試驗。

雜交菌株的菌絲在32℃的高溫下培養(yǎng)時，大部分無法正常生長；菌絲能夠生長的雜交菌株中仍有部分出現(xiàn)無法轉(zhuǎn)色且無法出菇的現(xiàn)象；還有部分雜交菌株如9X2-28表現(xiàn)出不易轉(zhuǎn)色，且極易在未轉(zhuǎn)色處形成畸形菇。因此，從試驗范圍內(nèi)看，雜交菌株的菌絲是否耐高溫與出菇溫度沒有相關(guān)性。