柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥模型大鼠的降脂作用及機制研究*

陳雨微 ，席雨蒙 ，李盼 ，羅先欽 ，李巍 ，王建偉

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 301617；2.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥防治代謝性疾病重慶市重點試驗室，重慶 400016）

高脂血癥是由于體內(nèi)脂肪代謝或運轉(zhuǎn)異常，進而引起的血脂增高的一種代謝性相關(guān)疾病，其包括高膽固醇血癥、高三酰甘油血癥、低高密度脂蛋白血癥和混合型高脂血癥等4種類型[1]。其中，高三酰甘油血癥是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的主要危險因素之一，與冠狀動脈粥樣硬化、心腦血管病等多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，嚴重威脅和危害人類的生命健康[2-3]。目前，臨床上治療以使用西藥他汀類藥物為主，但有臨床研究表明，中國患者對大劑量、高強度的他汀類藥物治療耐受性和安全性較差，有肝、肌肉毒性的風險，這也一定程度上限制了中國高血脂患者的臨床用藥[4]。中醫(yī)藥作為治療復(fù)雜代謝性疾病的優(yōu)勢療法，目前在諸多代謝性疾病的治療中取得了良好治療效果，其中在降血脂方面，中藥以其特有的多靶點、多途徑調(diào)控模式，在諸多臨床試驗中表現(xiàn)出了良好的療效[5-7]，也表明了從中藥中研究降脂類藥物具有巨大的潛在開發(fā)價值。

柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinese DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根。柴胡作為常用解表藥，已有兩千多年的應(yīng)用歷史，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣的傳統(tǒng)功效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，柴胡具有抗炎、抗腫瘤、保肝、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用[8-9]。此外，有研究表明柴胡具有潛在的降血脂作用[10-11]，但柴胡對高果糖飲食誘導(dǎo)的高三酰甘油血癥模型大鼠的藥效作用及相關(guān)的機制目前尚不清楚。鑒于此，本研究擬利用10%果糖水誘導(dǎo)并構(gòu)建高三酰甘油血癥模型大鼠，觀察柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥模型的改善作用。在此基礎(chǔ)上，通過實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）及蛋白免疫印跡（Western-blot）分析等分子生物學(xué)技術(shù)，考察柴胡配方顆粒對高三酰甘油模型大鼠肝臟及脂肪等脂質(zhì)代謝重要組織相關(guān)基因和蛋白表達情況的影響，進一步探究其可能的作用機制，為柴胡及其相關(guān)制劑的新適應(yīng)癥的開發(fā)研究奠定實驗基礎(chǔ)，提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗動物與材料

1.1 實驗動物 SPF級雄性Sprague Dawley（SD）大鼠 40 只，6～7 周齡，體質(zhì)量（220±20）g，購自重慶醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（渝）2018-0003，動物使用許可證：SYXK（渝）2018-0003。動物飼養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心SPF等級環(huán)境，溫度（22±2）℃，濕度（55±5）%，12 h明暗交替。所有動物實驗操作符合試驗動物倫理委員會要求。

1.2 藥物與試劑 柴胡配方顆粒劑（批號：9049141），購自重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東一方制藥有限公司；異氟烷（批號：217180801），購自深圳市瑞沃德生命科技有限公司；BCA蛋白濃度測定試劑盒（批號：P0010），購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；葡萄糖氧化酶法試劑盒，購自北京普利來基因技術(shù)有限公司；三酰甘油含量檢測試劑盒，購自南京建成生物工程研究所有限公司；RNA抽提試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑、PCR試劑盒，均購自大連寶生物工程有限公司；兔抗 FGF21（ab171941）、PGC1α（ab54481），鼠抗 SIRT1（ab110304）、CPT1α（ab128568），均購自美國Abcam公司；兔抗AMPK（2532S）、p-AMPK（2535S）、β-actin（4970S），均購自美國 CST 公司；羊抗兔IgG二抗（BA1054）、羊抗鼠IgG二抗（BA1050），均購自武漢博士德生物工程有限公司；化學(xué)發(fā)光液（批號：1730501），購自美國Millipore公司。

1.3 實驗儀器 Mini-PROTEAN Tetra System濕轉(zhuǎn)印儀、垂直電泳裝置、熒光定量PCR儀，美國Bio-Rad公司；TissueLyser Ⅱ組織研磨儀，德國Qiagen公司；Synergy HTX全自動酶標儀，美國BioTek公司；NANODEOP 2000微量核酸蛋白測定儀，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；金屬?。∕K-20）中國杭州奧盛科技有限公司；石蠟切片機（RM2235）德國Leica公司；icEN-24R高速冷凍離心機，杭州奧盛儀器有限公司；Odyssey Fc雙色紅外熒光成像系統(tǒng)，美國LI-COR公司。

2 實驗方法

2.1 實驗分組與給藥 40只雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機分為正常對照組、果糖誘導(dǎo)組（模型組）及柴胡配方顆粒低、中、高劑量給藥組（由臨床劑量換算而來，劑量分別為0.675、1.35及2.70 g/kg），每組8只，所有組大鼠均給予基礎(chǔ)飼料（飼料由重慶醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供）。實驗開始后，正常對照組給予正常飲水，模型組與柴胡配方顆粒低、中、高劑量組給予10%的果糖水溶液，并于每天上午10～11時對大鼠進行灌胃，對照組與模型組灌胃給予等體積的蒸餾水，柴胡配方顆粒用蒸餾水溶解，分為低、中、高劑量組，實驗持續(xù)5周。每周記錄體質(zhì)量，模型組與給藥組根據(jù)總計攝入熱量調(diào)整攝食量和攝入果糖水的含量，保證模型組與給藥組實驗期間總熱量攝入一致。實驗4周后，于眼內(nèi)眥取血，保存于-80℃。實驗第5周末處死大鼠，取肝和附睪周圍脂肪稱質(zhì)量，部分保存于4%多聚甲醛；剩余部分置于液氮后轉(zhuǎn)移至-80℃保存，以備后期檢測。

2.2 口服葡萄糖耐量實驗 實驗第4周末，所有組別大鼠禁食過夜（12 h，果糖水換為常規(guī)飲用自來水），灌胃給予5 g/kg的葡萄糖，分別于灌胃開始0、30、60、120 min后于眼內(nèi)眥取血，4 000 r/min離心10 min（離心半徑=85 mm，下同）分離血漿用于檢測葡萄糖含量。

2.3 三酰甘油、葡萄糖含量的檢測 嚴格按照葡萄糖氧化酶法試劑盒與三酰甘油含量檢測試劑盒說明書操作要求，分別檢測各組大鼠血漿葡萄糖含量及血漿/肝臟組織勻漿三酰甘油含量。

2.4 qRT-PCR基因分析 嚴格按照RNA提取試劑盒說明書提取肝、脂肪組織RNA，并根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作方法，逆轉(zhuǎn)錄mRNA。反應(yīng)條件為：逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（15 min，37℃），逆轉(zhuǎn)錄酶失活（5 s，85℃），逆轉(zhuǎn)錄后的mRNA稀釋并用于PCR檢測。隨后嚴格按照PCR試劑盒說明書操作方法，在Real-Time PCR儀上進行基因擴增。反應(yīng)條件為：預(yù)變性（30 s，95 ℃），變性（5 s，95℃），退火延伸（30 s，60℃），40循環(huán)次數(shù)。以β-Actin為內(nèi)參基因，根據(jù)2-ΔΔCq計算各組目的基因相對表達量。相關(guān)基因的引物（上海生工生物工程股份有限公司）序列見表1。

表1 qPCR基因引物序列Tab.1 qPCR gene primer sequence

2.5 Western-blot法分析 稱取50 mg脂肪組織，加入800 μL RIPA裂解液（使用前加入終濃度為1 mmol/L的PMSF和磷酸酶抑制劑），充分勻漿。并于冰上靜置1 h，然后于4℃下12 000 r/min離心20 min。取上清液，測定其蛋白濃度。然后，按試劑使用說明書加入5×蛋白上樣緩沖液于95℃變性5 min，進行SDS-PAGE（8%分離膠，4%濃縮膠）電泳分離，250 mA恒流電轉(zhuǎn)，用5%脫脂牛奶封閉2 h，并分別用以下抗體進行孵育：β-Actin兔抗（稀釋：1∶3 000）；AMPK 兔抗（稀釋：1∶2 000，美國 CST 公司）；p-AMPKThr172 兔抗（稀釋：1∶800）；PGC-1α 兔抗（稀釋：1∶1 000）；SIRT1 鼠抗（稀釋：1∶1 000）。上述一抗4℃孵育16 h，TBST洗滌5次，每次5 min，洗膜后加二抗（室溫孵育1 h），再以TBST洗滌3次，每次5 min，化學(xué)發(fā)光液顯影。用Odyssey Fc雙色紅外熒光成像系統(tǒng)掃描條帶，Image J軟件分析測定各條帶的灰度值，將所得目的條帶的吸光度值與相應(yīng)的內(nèi)參β-Actin蛋白條帶的灰度值相比為相應(yīng)蛋白的相對表達量。

3 統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)運用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組計量資料的比較用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血脂大鼠體質(zhì)量、血漿三酰甘油、葡萄糖及OGTT的影響 實驗周期末，模型組大鼠體質(zhì)量明顯高于正常對照組（P＜0.05）；與模型組相比，柴胡配方顆粒（低、中、高）劑量組大鼠體質(zhì)量具有降低的趨勢（P＜0.05），見圖1A。模型組血漿三酰甘油、葡萄糖含量明顯高于正常對照組（P＜0.01或P＜0.05），表明果糖能明顯誘導(dǎo)SD大鼠三酰甘油及葡萄糖代謝障礙，即造模成功。而柴胡配方顆粒中劑量組（1.35 g/kg）、高劑量組（2.70 g/kg）與模型組相比能顯著降低血漿三酰甘油含量（P＜0.01），但對大鼠血漿葡萄糖含量無明顯影響，見圖1B、1C。OGTT檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組糖耐量較對照組明顯受損，表現(xiàn)在灌胃葡萄糖2 h后血漿葡萄糖含量及其曲線分布下面積（AUC）明顯高于正常對照組（P＜0.05）；而柴胡配方顆粒高劑量組具有一定改善果糖導(dǎo)致的大鼠糖耐量受損的作用，表現(xiàn)在明顯降低灌胃葡萄糖2 h后大鼠血漿葡萄糖含量和AUC（P＜0.05），見圖1D、1E。

圖1 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠體質(zhì)量、血漿三酰甘油、葡萄糖及OGTT的影響Fig.1 Effects of for mulae Bupleuri Radix granules on body weight，plasma triacylglycerol，glucose and OGTT of hypertriglyceridemia rats

4.2 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠肝、腎和脂肪組織體質(zhì)量比的影響 與正常對照組相比，果糖誘導(dǎo)模型組肝體質(zhì)量比明顯增高（P＜0.05），提示高果糖誘導(dǎo)可能對SD大鼠肝臟具有一定的損傷作用；而與模型組相比，柴胡配方顆粒組具有降低果糖誘導(dǎo)的SD大鼠肝體質(zhì)量比的趨勢（P＞0.05）。此外，腎臟、腹膜后脂肪及附睪白色脂肪組織（eWAT）的體質(zhì)量比在各組之間均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見圖2。

圖2 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠肝、腎、eWAT及腹膜后脂肪等組織的體質(zhì)系數(shù)的影響Fig.2 Effect of formulae Bupleuri Radix granules on the constitution coefficients of liver，kidney，eWAT and retroperitoneal fat in rats with hypertriglyceridemia

4.3 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響 鑒于肝臟與高血脂癥的密切聯(lián)系，考察了柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥模型大鼠肝臟組織勻漿三酰甘油含量及肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達。高果糖攝入對大鼠肝臟組織勻漿三酰甘油含量具有增加的趨勢（P＞0.05），同時柴胡配方顆粒高、中、低劑量組對果糖誘導(dǎo)大鼠肝臟組織三酰甘油含量具有降低的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖3。

在肝臟脂質(zhì)代謝基因調(diào)控方面，高果糖能顯著增加大鼠肝臟組織脂肪酸合成關(guān)鍵基因硬脂酰輔酶 A 去飽和酶 1（SCD1）、脂肪酸合成酶（FASN）及脂肪酸代謝重要細胞因子成纖維細胞生長因子21（FGF21）、乙酰輔酶A羧化酶1（ACC1）等mRNA水平的表達（P＜0.05或 P＜0.01），而柴胡配方顆粒給藥組與果糖誘導(dǎo)組相比無顯著變化（P＞0.05），見圖4。此外，與正常對照組相比，果糖誘導(dǎo)組明顯降低肝臟組織轉(zhuǎn)錄因子碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CHREBP）、氧化物酶體增殖物激活受體 α（PPAR-α）、過氧化物酶體增殖物激活受體Y協(xié)同刺激因子1α（PGC1α）、脂肪酸氧化關(guān)鍵酶肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶 1α（CPT1α）、微粒體三酰甘油轉(zhuǎn)運蛋白（MTTP）及脂酰輔酶A氧化酶（ACO）等mRNA水平的表達（P＜0.05或P＜0.01），而柴胡配方顆粒對上述基因表達無明顯影響（P＞0.05）。以上結(jié)果表明：高果糖誘導(dǎo)可增加肝臟脂肪酸合成相關(guān)基因、降低其氧化基因的表達，可能與誘發(fā)高三酰甘油血癥的機制有關(guān)，而柴胡配方顆粒無明顯調(diào)節(jié)果糖誘導(dǎo)高三酰甘油血癥模型大鼠肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的作用。由于高三酰甘油血癥的病理機制涉及肝臟中眾多因素，因此，尚需進一步研究肝臟其他因子的變化。

圖4 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠肝臟脂質(zhì)沉積相關(guān)基因表達的影響Fig.4 Effects of formulae Bupleuri Radix granules on the expression of hepatic lipid deposition related genes in rats with hypertriglyceridemia

4.4 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠脂肪組織形態(tài)學(xué)的影響 脂肪細胞與三酰甘油儲存和清除具有密切聯(lián)系，在脂肪組織中三酰甘油的儲存增加而清除減少，導(dǎo)致脂肪組織脂質(zhì)周轉(zhuǎn)異常，是誘發(fā)高血脂癥的重要因素之一[12]。因此，本研究進一步考察了柴胡配方顆粒對大鼠脂肪組織的影響。在病理形態(tài)上，高果糖誘導(dǎo)明顯導(dǎo)致大鼠脂肪組織細胞體積增大（與正常對照組相比P＜0.01），而柴胡配方顆粒給藥后顯著降低（P＜0.05），見圖5。提示柴胡配方顆粒對高果糖誘導(dǎo)的大鼠e-WAT細胞體積增大具有改善作用。

圖5 HE染色考察柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠e-WAT病理形態(tài)學(xué)的影響Fig.5 Study on the effect of formulate B upleuri Radix Granules on e-WAT pathomorphology of hypertriglycer ridemia rats by HE staining

4.5 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠脂肪組織AMPK、p-AMPK、PGC1α及SIRT1蛋白水平表達的影響 進一步考察了柴胡配方顆粒對高三酰甘油模型大鼠脂肪組織能量代謝相關(guān)蛋白表達水平的影響。結(jié)果如圖5所示：果糖模型組能顯著降低脂肪組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）、PGC1α蛋白水平表達及p-AMPK/AMPK的比值，提示果糖誘導(dǎo)能明顯削弱大鼠脂肪組織AMPK/SIRT1/PGC1α的信號傳導(dǎo)，進而影響脂肪組織脂質(zhì)代謝。柴胡高劑量給藥組明顯激活A(yù)MPK，并顯著增加脂肪組織SIRT1、PGC1α 蛋白水平（與模型組相比，P＜0.05），提示柴胡配方顆?？赡芡ㄟ^促進脂肪組織AMPK/SIRT1/PGC1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，進而改善高三酰甘油血癥模型大鼠血脂紊亂。

5 討論

高三酰甘油血癥是中國人群常見的脂質(zhì)代謝異常，常與繼發(fā)性疾?。ㄈ绮涣硷嬍?、飲酒、肥胖、代謝綜合征和2型糖尿?。┎⒋鎇13]。如前所述，目前臨床上常以他汀類藥物治療為主，但臨床研究資料表明他汀類藥物對中國患者引起的不良反應(yīng)較為嚴重。本研究所采用的柴胡配方顆粒源于張仲景的經(jīng)典古方小柴胡湯，現(xiàn)已在中醫(yī)臨床上作為解表劑廣泛使用，具有較高的安全性。本研究發(fā)現(xiàn)柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥模型大鼠具有一定的改善作用，這對于臨床診療高三酰甘油血癥以及柴胡配方顆粒新適應(yīng)癥的開發(fā)具有重要意義。

高含量碳水化合物作為高熱量飲食中的重要組成之一，過多攝入與肥胖、糖尿病、高血脂癥等多種代謝性疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。長期攝入高糖含量的飲料易導(dǎo)致機體代謝功能紊亂，進一步加速代謝性相關(guān)疾病的發(fā)生。正如研究呈現(xiàn)的結(jié)果，大鼠長期攝入高熱量的果糖水明顯導(dǎo)致大鼠體質(zhì)量增加、血清三酰甘油水平增加、血清葡萄糖含量增加及OGTT受損。在分子水平上，高果糖誘導(dǎo)可導(dǎo)致大鼠肝臟、脂肪組織脂質(zhì)代謝相關(guān)基因或蛋白的異常表達等，進而導(dǎo)致體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，這與先前報道的果糖誘導(dǎo)糖脂代謝紊亂結(jié)果一致[14-16]。而柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥模型大鼠肝臟組織有關(guān)脂肪酸轉(zhuǎn)錄（ChREBP）及合成基因（FASN、SCD1） 和脂肪酸氧化相關(guān)基因（PPARɑ、CPT1ɑ、FGF21及PGC1ɑ等）無明顯影響。鑒于肝臟在代謝性疾病中的重要地位及柴胡配方顆粒降低高三酰甘油血癥的有效作用，后續(xù)將進一步研究柴胡降低三酰甘油血癥與調(diào)控肝臟代謝的關(guān)系及其作用機制，如柴胡調(diào)控關(guān)鍵蛋白的蛋白水平或翻譯后修飾水平的影響等。

圖6 柴胡配方顆粒對高三酰甘油血癥大鼠e-WAT脂質(zhì)沉積相關(guān)蛋白表達的影響Fig.6 Effect of formulae Bupleuri Radix Granules on the expression of e-WAT Lipid deposition related proteins in hypertriglyceridemia rats

脂肪組織作為一個較為活躍的器官，不僅參與能量儲存，同時具備一定的分泌功能，可分泌多種與代謝性疾病具有密切聯(lián)系的細胞因子，因而脂肪組織在代謝性疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中占有重要地位[17-18]。PGC1α是能量代謝途徑中眾多轉(zhuǎn)錄因子的共激活因子（如PPARγ、SREBP及FOXO1等），在線粒體脂肪酸的氧化等能量代謝平衡過程中有重要的作用。在脂肪組織高表達PGC1α可促使脂肪組織產(chǎn)熱增多，增加進線粒體合成及與呼吸作用相關(guān)基因的表達，增強整體呼吸能力、調(diào)節(jié)適應(yīng)性產(chǎn)熱，以消耗脂肪酸達到降脂作用[19-20]。SIRT1作為哺乳細胞內(nèi)的一種依賴于煙酰胺腺苷二核苷酸（NAD+）的去乙?；福膳潴w依賴性抑制PGC1α的去乙?；饔茫M而減少脂肪的合成及降低脂質(zhì)蓄積[21-22]。同時SIRT1與能量代謝的重要調(diào)節(jié)因子——AMPK的活化起相互調(diào)節(jié)的作用[23]。因此，激活脂肪組織AMPK/SIRT1/PGC1α信號通路能有效減少脂肪的合成與脂質(zhì)蓄積，改善脂質(zhì)代謝紊亂[24]。

鑒于柴胡配方顆粒對肝臟脂質(zhì)蓄積調(diào)控作用的結(jié)果（即柴胡配方顆粒改善高三酰甘油血癥可能不主要依賴于對肝臟脂質(zhì)蓄積的改善作用），提出柴胡配方顆粒能夠通過降低脂肪組織的脂質(zhì)蓄積進而改善高三酰甘油血癥的假說。因此，在大鼠eWAT 中檢測了 AMPK、p-AMPK、SIRT1 及PGC1α的蛋白水平表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高果糖顯著削弱AMPK的磷酸化激活，降低SIRT1和PGC1α蛋白水平的表達，而柴胡配方顆粒給藥后則顯著逆轉(zhuǎn)，提示柴胡配方顆?？赡芡ㄟ^促進脂肪組織AMPK/SIRT1/PGC1α的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，降低脂肪組織脂質(zhì)蓄積并改善高三酰甘油血癥。此外，脂肪細胞肥大與脂肪細胞代謝紊亂具有密切的聯(lián)系，其肥大的機制可能與脂肪細胞增生有關(guān)。脂肪細胞肥大與脂肪細胞胰島素敏感性、炎癥、細胞內(nèi)氧化應(yīng)激、代謝分泌、自噬及凋亡等多種脂肪細胞功能有關(guān)[25]。而研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)柴胡配方顆粒能明顯改善高果糖誘導(dǎo)的脂肪組織脂肪細胞體積增大，同時也進一步證實柴胡配方顆粒對脂肪組織潛在的調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，本研究報道了柴胡配方顆粒在改善高三酰甘油血癥中的潛在研究價值，其作用機制可能與促進脂肪組織AMPK/SIRT1/PGC1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)，為后續(xù)針對柴胡配方顆粒新適應(yīng)癥的開發(fā)和研究奠定了一定的理論和實驗基礎(chǔ)。