正交試驗(yàn)法優(yōu)選鹽菟絲子的工藝研究

種 振，高 波，羅 川，胡 雨

(1.安徽華潤(rùn)金蟾藥業(yè)股份有限公司，安徽 淮北 235000 ；2.華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東 深圳 518000)

菟絲子是南方菟絲子CuscutaaustralisR.Br.或菟絲子CuscutachinensisLam.的成熟種子。味辛、甘，平，具有固精縮尿，安胎，明目的功效[1～3]。菟絲子的主要化學(xué)成分有黃酮、有機(jī)酸、氨基酸及腦磷脂等[2,4～5]。臨床上多用于腎虛胎漏，胎動(dòng)不安，目昏耳鳴，脾腎虛瀉；外治白癜風(fēng)[1～2]。金絲桃苷是菟絲子的主要單體成分之一，具有較強(qiáng)的抗氧化功能[6]。菟絲子鹽炙后能引藥歸腎，增強(qiáng)補(bǔ)腎固澀的作用，用于下元虛弱、腰膝酸軟等。臨床常用的炮制品為鹽菟絲子，通常采用鹽炙法進(jìn)行加工炮制[2,7～9]?！吨袊?guó)藥典》2015版描述的鹽菟絲子炮制工藝缺少可控的工藝參數(shù)[10]。目前，關(guān)于鹽菟絲子炮制工藝研究的文獻(xiàn)[7～8]，多以金絲桃苷、槲皮素等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，缺少對(duì)鹽菟絲子外觀性狀的描述評(píng)價(jià)。而筆者研究以外觀性狀及金絲桃苷為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)[11]，考察悶潤(rùn)時(shí)間，鹽炙溫度，鹽炙時(shí)間3個(gè)因素，優(yōu)選菟絲子鹽炙的炮制工藝，以期為菟絲子鹽炙的擴(kuò)大生產(chǎn)提供參考。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀色譜系統(tǒng)，包括四元梯度輸液泵、色譜柱溫箱、二極管陣列紫外檢測(cè)器、Chromeleon 7 色譜管理系統(tǒng)；C18色譜柱、超聲清洗儀、XP26型百萬(wàn)分之一電子天平、粉碎機(jī)

1.2 試劑

菟絲子(批號(hào)：2003001)、金絲桃苷(批號(hào)：111521-201809；中國(guó)食品藥品檢定研究院)、乙腈(色譜級(jí))、甲醇(色譜級(jí))；研究用的菟絲子飲片購(gòu)自亳州某飲片公司，經(jīng)鑒定為：旋花科植物菟絲子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟種子[1,7～8]。

2 方法

2.1 金絲桃苷的測(cè)定

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性 C18色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)，檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；流速為 1.0mL.min-1，柱溫：25℃，進(jìn)樣量為10 μL。理論板數(shù)應(yīng)≥5 000(以金絲桃苷峰計(jì)算)，色譜峰對(duì)稱性較好[1]。見(jiàn)圖1。

t/min

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取對(duì)照品金絲桃苷適量，參照《中國(guó)藥典》(2015版)菟絲子藥材標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)對(duì)照品溶液的制備方法制備對(duì)照品溶液，即得[1]。

2.1.3 供試品溶液的制備 參照《中國(guó)藥典》(2015版)菟絲子藥材標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，即可[1]。

2.2 正交試驗(yàn)

2.2.1 鹽菟絲子工藝的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 基于菟絲子鹽炙加工文獻(xiàn)檢索綜述[5，7～8]及單因素試驗(yàn)考察，利用L9(34) 正交設(shè)計(jì)，考察悶潤(rùn)透心時(shí)間(A)、鹽炙溫度(B)、鹽炙時(shí)間(C) 3個(gè)因素，以外觀性狀及金絲桃苷為指標(biāo)，優(yōu)選鹽菟絲子的炮制工藝。各因素水平見(jiàn)表1。

表1 正交設(shè)計(jì)因素水平

2.2.2 外觀性狀的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》及《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》2005版[10]鹽菟絲子性狀項(xiàng)下描述：形如菟絲子，表面棕黃色，裂開(kāi)，略有香氣[1,12]。筆者試驗(yàn)研究按照正交設(shè)計(jì)制備加工菟絲子鹽炙品，參照2015版藥典及炮制規(guī)范確定評(píng)分：棕黃色，略有香氣，計(jì)10分；棕黃色，有香氣及灰棕色，略有香氣，均計(jì)8分；灰棕色，無(wú)香氣，計(jì)6分。

2.2.3 綜合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 為了更客觀地評(píng)價(jià)菟絲子鹽炙品的質(zhì)量，研究以鹽菟絲子外觀性狀和金絲桃苷為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用綜合評(píng)分法來(lái)評(píng)定試驗(yàn)[13]。金絲桃苷是《中華人民共和國(guó)藥典》(2015版)規(guī)定的指標(biāo)性成分，所以其權(quán)重系數(shù)擬定為0.6；飲片外觀性狀是中藥飲片的傳統(tǒng)質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，是評(píng)價(jià)飲片質(zhì)量?jī)?yōu)劣的關(guān)鍵性因素之一[10,14,15]，故將其作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，并擬定其權(quán)重系數(shù)為0.4。綜合的評(píng)分=外觀性狀評(píng)分×0.4+金絲桃苷×0.6[13]。試驗(yàn)安排和結(jié)果如表2，方差分析如表3。

表2 鹽菟絲子工藝的L9 (34) 正交試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

表3 綜合評(píng)分方差分析

由直觀分析的結(jié)果可知，各個(gè)因素對(duì)菟絲子鹽炙加工工藝的影響順序?yàn)?B >C > A。由方差分析可知鹽炙溫度(B因素)對(duì)菟絲子鹽炙加工工藝有顯著性影響，悶潤(rùn)透心時(shí)間及炒制時(shí)間(A及C 因素)則對(duì)菟絲子鹽炙加工工藝無(wú)顯著性影響[16]。故從直觀分析及方差分析結(jié)果可知菟絲子鹽炙的最佳工藝為 A1B2C3，即取凈菟絲子適量，加入2%鹽水拌勻，悶潤(rùn)0.5 h，置于130℃的炒藥機(jī)中，炒制25 min，取出，晾涼，過(guò)篩即可[17]。

2.3 驗(yàn)證性試驗(yàn)

取凈菟絲子2 kg，按優(yōu)選的鹽炙工藝制備鹽菟絲子樣品 3 份[16]，觀察飲片外觀性狀及測(cè)定金絲桃苷含量，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，采用該優(yōu)選工藝鹽炙加工的鹽菟絲子性狀及金絲桃苷含量均較穩(wěn)定，表明該鹽炙工藝較穩(wěn)定、可控。即菟絲子鹽炙的最佳工藝為：取凈菟絲子適量，加入2%鹽水拌勻[7]，悶潤(rùn)0.5h，置于130℃的炒藥機(jī)(CY-25炒藥機(jī))中，炒制25 min，取出，晾涼，篩去碎屑即可。

3 討論

菟絲子鹽炙加工品炒至表面棕黃色，裂開(kāi)，略有香氣時(shí)，成品質(zhì)量較優(yōu)，這也與菟絲子鹽炙加工成品傳統(tǒng)外觀性狀及現(xiàn)行版藥典描述相一致[8]。表明外觀性狀是中藥飲片的關(guān)鍵評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，是傳統(tǒng)意義上飲片內(nèi)在化學(xué)成分及化學(xué)成分集群不能替代的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[10,14,18]。

菟絲子鹽炙加工文獻(xiàn)[5，7～8]優(yōu)選的工藝各不相同，本研究以外觀性狀及內(nèi)在含量指標(biāo)代替單一內(nèi)在指標(biāo)來(lái)考察鹽菟絲子的炮制工藝，結(jié)果更具科學(xué)性和實(shí)用性。該研究以外觀性狀及指標(biāo)性成分金絲桃苷為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選出的菟絲子鹽炙加工工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性良好，可為菟絲子鹽炙的擴(kuò)大生產(chǎn)提供技術(shù)參考[19]。將來(lái)，還應(yīng)結(jié)合藥代及藥動(dòng)優(yōu)選炮制工藝，以便優(yōu)選工藝更客觀實(shí)用。