運動點刺血療法對坐骨神經(jīng)損傷大鼠運動功能和NGF、IGF-1 表達(dá)的影響*

蔡 任 錢佳佳 王 憑 陳 穎

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)體育部；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿養(yǎng)生康復(fù)學(xué)院，江蘇 南京 210023）

周圍神經(jīng)損傷是導(dǎo)致患者運動功能障礙的重要原因，也是致殘的因素之一。隨著顯微外科技術(shù)和康復(fù)治療技術(shù)的進(jìn)步，在促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)方面取得了一定進(jìn)展，但患者往往出現(xiàn)不同程度的感覺及功能喪失，嚴(yán)重者可出現(xiàn)肌肉萎縮及關(guān)節(jié)攣縮[1]。如何促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷的再生是神經(jīng)修復(fù)的基礎(chǔ)和臨床研究熱點。我們在治療周圍神經(jīng)損傷后功能障礙的過程中發(fā)現(xiàn)當(dāng)采用綜合物理治療效果不佳時輔以運動點刺血療法往往能收到出奇制勝的療效，并對此進(jìn)行了相關(guān)病例報道[2]。但目前關(guān)于刺血治療周圍神經(jīng)損傷的機制未見報道。本實驗采用經(jīng)典的神經(jīng)鉗夾傷制備大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型，通過對相關(guān)肌肉進(jìn)行運動點刺血治療后觀察腓腸肌恢復(fù)率，并檢測損傷神經(jīng)中神經(jīng)神經(jīng)生長因子（nerve growth factor,NGF）和胰島素樣生長因子1（insulin like growth factor-1，IGF-1）的表達(dá)，初步探討刺血對周圍神經(jīng)損傷后運動功能恢復(fù)的作用及可能機制，為臨床治療周圍神經(jīng)損傷后功能障礙提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

實驗動物采用雄性SD 大鼠36 只，質(zhì)量為230g-250g，SPF 級，均由上海實驗動物中心提供［許可證號：SCKX（滬）2013-0016］。普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，行坐骨神經(jīng)損傷模型制備，造模完成后將大鼠隨機分為刺血組與模型組，每組18 只大鼠，觀察時相點為治療后2、4、6 周，各6 只大鼠。

1.2 大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型制作

25%烏拉坦腹腔注射麻醉后將大鼠俯臥位固定于手術(shù)臺上，常規(guī)備皮，消毒。暴露大鼠左后肢坐骨神經(jīng)，在坐骨切跡下方10mm處用14cm直血管鉗完全閉合鉗夾坐骨神經(jīng)30s，鉗夾段長度為3mm。，造成SeddenⅡ度損傷[3]。將神經(jīng)放回原位置，分層縫合肌肉和皮膚。造模后大鼠左側(cè)后肢無自主活動，不能支撐身體，左膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)不能屈曲而下垂，依賴其他肢體拖動前行，標(biāo)志造模成功[4]。建模成功后將兩組大鼠進(jìn)一步隨機分為干預(yù)2周組、干預(yù)4周組和干預(yù)8周組，每組6只。

1.3 干預(yù)方法

刺血組于手術(shù)后4 周，取脛前肌和腓腸肌內(nèi)外側(cè)頭運動點，采用一次性采血針進(jìn)行點刺放血。刺血前按摩肌腹30s，每個運動點刺2-3針，刺后進(jìn)行輕柔擠壓以出血1-2 滴為宜。模型組同樣進(jìn)行動物抓取并進(jìn)行假刺。每周刺血2-3 次。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.4.1 腓腸肌恢復(fù)率

治療結(jié)束后剖取腓腸肌組織，進(jìn)行腓腸肌濕重測定:分別從腓腸肌的近端（股骨內(nèi)外髁起點）和腓腸肌的遠(yuǎn)端（跟腱止點處）剪斷，取下全部腓腸肌，立即用濾紙吸干水分，在天平上精確記錄左右兩邊的腓腸肌濕重?；謴?fù)率=左側(cè)（傷側(cè)）腓腸肌濕重均值/右側(cè)（健側(cè)）腓腸肌濕重均值×100%[5]。

1.4.2 ELISA 檢測損傷坐骨神經(jīng)中NGF 及IGF-1 表達(dá)

分別于每一療程結(jié)束后當(dāng)天，將各組大鼠深度麻醉后快速切開，暴露坐骨神經(jīng)損傷區(qū)，取各組大鼠神經(jīng)損傷部位遠(yuǎn)側(cè)坐骨神經(jīng)干10mm，迅速置入4%多聚甲醛溶液固定待測。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）以全自動多功能酶標(biāo)儀檢測坐骨神經(jīng)組織中NGF 和IGF-1 的含量，并考察兩者的相關(guān)性。檢測波長為450nm，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS19.0 統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t 檢驗。以P＜0.05 為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果

2.1 腓腸肌恢復(fù)率

兩組大體標(biāo)本觀察顯示，健側(cè)腓腸肌肌肉飽滿紅潤、富有彈性。術(shù)側(cè)腓腸肌均出現(xiàn)萎縮，彈性減弱，色澤欠佳。刺血組治療2 周后腓腸肌恢復(fù)率偏低，治療4 周起恢復(fù)率逐漸升高，4 周與6 周組與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。

表1 各組大鼠腓腸肌濕重的恢復(fù)率比較（n=6，±s）

表1 各組大鼠腓腸肌濕重的恢復(fù)率比較（n=6，±s）

（與模型組比，*P＜0.05）

組別 干預(yù)2 周 干預(yù)4 周 干預(yù)6 周刺血組 0.68±0.05 0.86±0.01* 0.90±0.01*模型組 0.71±0.02 0.76±0.03 0.81±0.01

2.2 刺血組與模型組NGF、IGF-1 表達(dá)水平

ELISA 檢測結(jié)果顯示兩組大鼠坐骨神經(jīng)中NGF 和NGF 及IGF-1 含量在2 周時較低，后逐漸增加，其中4 周組、6 周組的NGF 含量明顯增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 各組大鼠干預(yù)不同時間后坐骨神經(jīng)組織中NGF 與IGF-1 表達(dá)比較（n=6,±s）

表2 各組大鼠干預(yù)不同時間后坐骨神經(jīng)組織中NGF 與IGF-1 表達(dá)比較（n=6,±s）

（與模型組比，*P＜0.05）

組別 干預(yù)2 周 干預(yù)4 周 干預(yù)6 周NGF IGF-1 NGF IGF-1 NGF IGF-1刺血組 4.68±0.82 4.40±0.20*模型組 4.87±0.13 1.54±0.14 17.06±0.30*3.02±0.21 18.24±1.45*1.69±0.26 13.09±1.40 2.49±0.28 10.45±3.52 2.47±0.94

3 討論

刺血療法是用三棱針等刺破人體某些腧穴、病理反應(yīng)點或淺表小靜脈，放出少量血液，使邪毒隨敗血而出，瘀血去則新血生，使筋脈得以濡養(yǎng)[6]。因肌肉運動點的本質(zhì)為終末小神經(jīng)密集區(qū)而并非運動終板密集區(qū)[7]，故我們推測刺血可能的作用在于其有別于其它非手術(shù)療法的獨特有效的祛瘀生新作用促進(jìn)了損傷終末神經(jīng)的血液再灌注、血管再生[8]從而促進(jìn)了某些營養(yǎng)因子的釋放，促進(jìn)神經(jīng)再生及功能的恢復(fù)。

NGF 是最早被發(fā)現(xiàn)與研究的神經(jīng)營養(yǎng)因子，NGF 能維持神經(jīng)細(xì)胞的存活和功能，促進(jìn)損傷神經(jīng)纖維的修復(fù)，在神經(jīng)再生中起引導(dǎo)和營養(yǎng)作用。因此，對NGF 的檢測將直接獲得關(guān)于神經(jīng)損傷后再生與修復(fù)的信息[9]。同時，由于失神經(jīng)性骨骼肌萎縮嚴(yán)重影響神經(jīng)損傷后患者肢體功能的恢復(fù)，研究的失神經(jīng)萎縮的發(fā)病機制及其防治，已成為醫(yī)學(xué)界的重要任務(wù)[10]。IGF-1 作為肌肉生長正向調(diào)節(jié)信號，是刺激肌衛(wèi)星細(xì)胞活性和增殖、再塑肌肉的重要細(xì)胞因子[11]，它的高表達(dá)不僅能導(dǎo)致肌肉肥大，還可抑制骨骼肌萎縮[12]。

本研究結(jié)果顯示兩組NGF 表達(dá)水平隨著時間的推移均逐漸增高，與顧曉松等研究結(jié)果吻合[13]。刺血4 周及6 周組NGF 和IGF-1 的表達(dá)均較對照組有明顯升高，提示刺血可以增加損傷神經(jīng)處NGF 的表達(dá)水平，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)，通過改善IGF-1 的分泌水平從而起到保護靶肌肉的功能，實現(xiàn)靶器官的重支配。

腓腸肌是坐骨神經(jīng)主要控制的肌肉。本研究結(jié)果顯示隨著時間推移兩組大鼠的腓腸肌恢復(fù)率均逐漸提高，提示周圍神經(jīng)損傷本身具有很強的再生能力[14]，但刺血組大鼠腓腸肌恢復(fù)率從第4 周開始較對照組均有顯著改善，印證了刺血對于周圍神經(jīng)損傷后功能恢復(fù)獨特具有特優(yōu)勢。

非手術(shù)療法特別是刺血這一簡單易行的治療方法能夠促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷修復(fù)對于周圍神經(jīng)損傷的治療具有重要意義。但刺血是單獨起作用還是在綜合物理療法的基礎(chǔ)上啟動了某種修復(fù)途徑有待進(jìn)一步探討。故本實驗旨在初步探討刺血促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)及功能恢復(fù)可能的機制，為后期進(jìn)一步深入研究打下基礎(chǔ)。