• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    葡萄糖酸亞鐵固體脂質(zhì)納米粒的制備工藝研究

    2016-08-06 02:50:30王琳琳童群義
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年16期

    王琳琳,童群義

    (江南大學(xué)食品學(xué)院,江蘇無(wú)錫 214122)

    ?

    葡萄糖酸亞鐵固體脂質(zhì)納米粒的制備工藝研究

    王琳琳,童群義*

    (江南大學(xué)食品學(xué)院,江蘇無(wú)錫 214122)

    摘要[目的]探索葡萄糖酸亞鐵固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。[方法]采用兩步W/O/W乳化方式制備葡萄糖酸亞鐵固體脂質(zhì)納米粒(SLN)。以包埋率為指標(biāo),研究?jī)?nèi)外相、油水相體積比,卵磷脂濃度對(duì)SLN包埋率的影響。[結(jié)果]試驗(yàn)確定當(dāng)內(nèi)相中水相與油相的體積比為0.2,外水相與內(nèi)相乳狀液的體積比為5∶1,卵磷脂濃度為5%時(shí),SLN的包埋率取得最大值,為52.48%。在內(nèi)水相引入海藻酸鈉(1∶2,W/W)的結(jié)果表明,SLN的包埋率增大,為59.03%,粒徑、Zeta電位和多分散系數(shù)發(fā)生變化。體外釋放試驗(yàn)表明,SLN能起到保護(hù)葡萄糖酸亞鐵經(jīng)受胃酸環(huán)境的作用,并在模擬腸液中表現(xiàn)為突釋的釋放效果。[結(jié)論]固體脂質(zhì)納米粒對(duì)葡萄糖酸亞鐵有較好的保護(hù)及釋放效果,可為無(wú)機(jī)鐵補(bǔ)充劑的生產(chǎn)提供新的技術(shù)手段。

    關(guān)鍵詞固體脂質(zhì)納米粒;葡萄糖酸亞鐵;海藻酸鈉

    缺鐵癥,是常見(jiàn)的營(yíng)養(yǎng)素缺乏癥之一,是引起貧血的重要營(yíng)養(yǎng)因素[1]。據(jù)預(yù)測(cè),有20億人口正面臨貧血的危機(jī),其中大部分是由于缺鐵造成的[2]。缺鐵會(huì)降低成人勞動(dòng)能力,引起孕婦早產(chǎn)以及新生兒體重過(guò)低甚至死亡[3]。服用鐵強(qiáng)化劑和鐵補(bǔ)充劑是目前應(yīng)對(duì)缺鐵問(wèn)題的主要手段[4]。

    盡管親水性亞鐵鹽具有生物利用性高和成本低的優(yōu)點(diǎn),但是當(dāng)隨食物攝入時(shí),會(huì)刺激消化道,造成感官不適,嚴(yán)重的甚至引起惡心、腹痛[1]。另外,食品中的成分,諸如植酸和多酚,可以在消化道內(nèi)結(jié)合鐵離子并與之形成復(fù)合物,降低了無(wú)機(jī)鐵鹽的生物利用率,從而限制了親水性無(wú)機(jī)鐵鹽的使用[5]。

    固體脂質(zhì)納米體(solidlipidnanoparticle,SLN),是一種以酯類(lèi)或類(lèi)酯類(lèi)作為載體的膠體運(yùn)載系統(tǒng),具有生物相容性和降解性好,毒性低,適用于在親水性和親油性成分的包埋和運(yùn)輸?shù)忍攸c(diǎn),目前已應(yīng)用在多肽、蛋白質(zhì)、抗癌藥物等物質(zhì)的包埋。因此,將SLN技術(shù)應(yīng)用于裝載亞鐵鹽,可以避免藥物的泄露,防止鐵離子與食品中成分發(fā)生沉淀反應(yīng),起到保護(hù)鐵離子的作用,并潛在提高亞鐵離子的生物利用率。

    葡萄糖酸亞鐵是親水性芯材,不易被SLN包載。近年來(lái),以W/O/W兩步乳化方法制備固體脂質(zhì)納米粒的技術(shù),已成功用于包埋蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)[6]。鑒于此,筆者探索該法制備葡萄糖酸亞鐵SLN的可能性,以硬脂酸作為固相,大豆軟磷脂作為乳化劑,探究各工藝因素對(duì)SLN包埋率的影響,并考察在SLN內(nèi)相中引用海藻酸鈉對(duì)體系包埋率、粒徑和Zeta電位的影響以及包埋體的體外釋放情況。

    1材料與方法

    1.1材料

    1.1.1主要原料及試劑。葡糖糖酸亞鐵(FeG)、大豆卵磷脂、菲羅嗪、胃蛋白酶、胰蛋白酶、海藻酸鈉(~ 250cps)、聚乙烯醇(分子量30 000~70 000),Sigma公司;乙醇,為分析純?cè)噭?/p>

    1.1.2主要儀器設(shè)備。細(xì)胞超聲破碎儀,美國(guó)SONICS公司;恒溫水浴鍋,美國(guó)Fisher公司;超速離心機(jī)SorvallTMLYNX,美國(guó)ThermoScientific公司;動(dòng)態(tài)散射納米粒度分析儀,美國(guó)馬爾文公司;酶標(biāo)儀SynergyHT,美國(guó)biotek公司。

    1.2方法

    1.2.1固體脂質(zhì)納米粒的制備。將一定量大豆卵磷脂和50mg硬脂酸在60 ℃條件下溶于5mL乙醇中,加入濃度為5mg/mL的葡萄糖酸亞鐵,濃度為10mg/mL的抗壞血酸,提前預(yù)熱至相同溫度的0.01mol/L鹽酸溶液,超聲乳化1min形成W/O型乳狀液。將一定體積的同溫度的1%聚乙烯醇溶液加入到乳狀液中,相同超聲間斷處理2min,得到W/O/W乳狀液。待冷卻至室溫,離心(20 644r/min,30min)處理乳狀液,將得到的沉淀重新溶于5mL1%的聚乙烯醇溶液中,冰浴條件下,超聲處理10min,得到固體脂質(zhì)納米?;鞈乙?SLN)。將10mg/mL的海藻酸鈉按不同質(zhì)量比加入到內(nèi)水相中,室溫條件下攪拌混合2h后,用相同方法制備SA-SLN。

    1.2.2包埋率的測(cè)定。采用菲羅嗪測(cè)定離心后的上清液中的鐵離子濃度,間接測(cè)定鐵離子含量,由下式計(jì)算包埋率:

    式中,m1為原料中葡萄糖酸亞鐵的質(zhì)量;m2為上清液中葡萄糖酸亞鐵的質(zhì)量。

    鐵離子標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:取10μL1mol/L標(biāo)準(zhǔn)氯化鐵溶液用0.2mol/L鹽酸稀釋為1mmol/L,取出0、2、4、6、8和10μL置于 96孔板,用10%醋酸胺溶液(pH4.5)補(bǔ)充至100μL,加入10μL10%抗壞血酸溶液和40μL3mg/mL菲羅嗪顯色劑,室溫下放置30min后,用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)560nm下測(cè)定其吸光度A560 nm。以A560 nm值為縱坐標(biāo),鐵離子摩爾濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。回歸方程:y=0.087 3x+0.002 3,r=0.999 7;線性范圍:0~10nmoL。

    圖1 鐵離子摩爾濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1  Iron ion molar concentration standard curve

    1.2.3粒徑和Zeta電位的測(cè)定。采用粒徑/Zeta分析儀測(cè)定粒徑以及Zeta電位。 將1mL樣品裝入比色皿和Zeta電位比色皿。設(shè)定儀器參數(shù):分散介質(zhì)的折射指數(shù)為1.33,分散相折射指數(shù)為1.43,溫度測(cè)定條件為25 ℃,散射角為173°。

    1.2.4模擬釋放試驗(yàn)。取一定體積的固態(tài)脂質(zhì)納米體與等體積模擬胃液或腸液混合,移入37 ℃、100r/min的恒溫振蕩水浴鍋中釋放,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量設(shè)定時(shí)刻下鐵離子的釋放率。

    模擬胃酸(pH2)由0.4% 氯化鈉,0.5%胃蛋白酶和去離子水組成。模擬腸液(pH6.8)由6.8mg/mL磷酸二氫鈉,5mg/mL胰蛋白酶和去離子水配制而成。

    1.2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。文中數(shù)據(jù)為3次平行測(cè)定值的平均值。采用GraphPadPrism軟件在0.05顯著性水平下進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

    2結(jié)果與分析

    2.1葡萄糖酸亞鐵對(duì)SLN包埋率的影響由圖2可以看出,SLN的包埋率隨著葡萄糖酸亞鐵的用量增加而降低。當(dāng)葡萄糖酸亞鐵用量為2.5mg時(shí),SLN的包埋率為79.1%,而用量為5.0mg時(shí),包埋率下降為52.47%,當(dāng)亞鐵鹽用量繼續(xù)增加時(shí),包埋率降低。這與前人的研究具有相同結(jié)論[7-8],Zariwala等研究發(fā)現(xiàn),鐵用量與SLN的包埋率有負(fù)相關(guān)性,并推測(cè)造成此現(xiàn)象的原因可能是由于葡萄糖酸亞鐵的強(qiáng)電解質(zhì)屬性影響了脂質(zhì)囊體壁組成[7]。綜合以上,選擇葡萄糖酸亞鐵的添加量為5.0mg。

    圖2 葡萄糖酸亞鐵含量對(duì)SLN包埋率的影響Fig.2 The effect of ferrous gluconate content on the entrapment efficiency of SLN

    2.2內(nèi)相水相油相體積比對(duì)包埋率的影響由圖3可以看出,隨著內(nèi)相水相與油相的比例增大,固體脂質(zhì)納米體對(duì)鐵的包埋率先增大,在水相與油相體積比達(dá)到0.2時(shí),包埋率取得最大值;當(dāng)水相與油相體積比繼續(xù)增大時(shí),包埋率減小。這可能是由于油相體積不變,水相增大導(dǎo)致分散在水相外的油膜層變小,水相容易沖破油層而導(dǎo)致體系不穩(wěn)定[10]。綜合以上,選取內(nèi)相中水相與油相的體積比為0.2。

    圖3 內(nèi)相中水相與油相的體積比對(duì)固體脂質(zhì)納米體包埋率的影響Fig.3 Entrapment efficiency of SLN with different ratios(V/V)of aqueous and oil phase in internal phase

    2.3外水相與內(nèi)相乳狀液的體積比對(duì)包埋率的影響由圖4可以看出,隨著外水相體積的增大,固體脂質(zhì)納米體對(duì)鐵的包埋率逐漸增大,當(dāng)外水相與內(nèi)相乳狀液的體積比大于5∶1時(shí),包埋率基本穩(wěn)定。這可能由于當(dāng)外相水相體積逐漸增大時(shí),被分散的內(nèi)相乳滴相互之間碰撞的機(jī)會(huì)減少,穩(wěn)定性提高。所以,選取5∶1作為外水相與內(nèi)相乳狀液的體積比。

    圖4 外水相與內(nèi)相乳狀液的體積比對(duì)固體脂質(zhì)納米體包埋率的影響Fig.4 Entrapment efficiency of SLN with different volume ratio of aqueous phase of external phase to W/O emulsion of internal phase

    2.4大豆卵磷脂含量對(duì)包埋率的影響磷脂,尤其大豆卵磷脂,廣泛用作有效成分和藥物的塑形劑[6]。因其具有兩親分子特性和較好的生理兼容性,常被用于SLN的制備中。由圖5可以看出,隨著卵磷脂用量的上升,包埋率逐漸并且顯著增加。當(dāng)達(dá)到3.5%時(shí),包埋率緩慢增大。這可能是由于芯材表面的乳化層已有效地穩(wěn)定了內(nèi)相液滴的結(jié)構(gòu),乳化層增厚帶來(lái)的效果逐漸不顯著。

    2.5大豆卵磷脂含量對(duì)粒徑和多分散系數(shù)的影響由圖6可以看出,卵磷脂濃度增加,固體脂質(zhì)納米體的粒徑逐漸減小,這是因?yàn)殡S著乳化劑用量的增加,乳滴表面聚集的乳化層增加,降低了油水界面間的表面張力,提高了穩(wěn)定性。同時(shí),分散系數(shù)減小,說(shuō)明體系中的粒子形態(tài)更均勻。綜合圖5的結(jié)果,選擇卵磷脂濃度5%為最佳條件。

    圖6 卵磷脂濃度對(duì)固體脂質(zhì)納米體粒徑和多分散系數(shù)的影響Fig.6 The influence of lecithin concentration on the size and PDI of SLN

    2.6海藻酸鈉的引入對(duì)SLN包埋率的影響海藻酸鈉,是一類(lèi)多糖大分子,其溶液中帶有大量陰離子。當(dāng)海藻酸鈉分子與亞鐵離子混合后形成海藻酸鈉與亞鐵的絡(luò)合物,引入固體脂質(zhì)納米粒時(shí),可能會(huì)影響亞鐵的包埋率及SLN的性質(zhì)。

    由圖7可以看出,海藻酸鈉的引入對(duì)SLN的包埋率產(chǎn)生了顯著的影響。隨著海藻酸鈉用量的增加,SLN對(duì)葡萄糖酸亞鐵的包埋率減?。划?dāng)海藻酸鈉與葡萄糖酸亞鐵的質(zhì)量比為1∶2和1∶1時(shí),SA-SLN的包埋率高于對(duì)照組,而當(dāng)比值為2∶1時(shí),包埋率明顯低于對(duì)照組。造成此現(xiàn)象的原因可能是海藻酸鈉分子中的羧基基團(tuán)使其帶有大量負(fù)電荷,通過(guò)靜電作用與帶正電荷的二價(jià)鐵離子發(fā)生交聯(lián)[11],二價(jià)鐵離子分布在海藻酸鈉分子鏈上,同時(shí)海藻酸鈉的線性網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)阻止了內(nèi)水相液滴的聚集,維持了體系的穩(wěn)定,提高了固體納米體對(duì)Fe2+的包埋率。但是,當(dāng)鐵離子濃度一定,多糖分子濃度增大,海藻酸鈉作為多糖大分子,對(duì)鐵離子的空間阻礙作用增大,并與二價(jià)鐵離子爭(zhēng)奪乳化劑的親水端,破壞了乳狀液的穩(wěn)定性,導(dǎo)致包埋率降低。

    圖7 SA-SLN在不同海藻酸鈉與葡萄糖酸亞鐵的質(zhì)量比下的包埋率Fig.7 Entrapment efficiency of SA-SLN with different ratios(W/W)to ferrous gluconate

    2.7海藻酸鈉對(duì)SLN粒徑、Zeta電位以及多分散系數(shù)的影響表1顯示,海藻酸鈉的加入對(duì)固體納米粒的粒徑、Zeta電位以及多分散系數(shù)產(chǎn)生顯著影響。隨著海藻酸鈉與葡萄糖酸亞鐵的質(zhì)量比增大,粒徑明顯增大,多分散系數(shù)顯示粒徑分布混亂不均一。這是由多糖大分子海藻酸鈉以及與二價(jià)鐵離子形成的絡(luò)合物造成的空間體積增大的緣故。Zeta電位表現(xiàn)為隨著海藻酸鈉濃度的增大而降低,原因是海藻酸鈉帶有大量陰離子,一部分大分子裸露在外表面而引起表面電位的降低。添加海藻酸鈉的固體脂質(zhì)納米粒的Zeta電位值大于-30mV,而對(duì)照組為-22.27mV,說(shuō)明引入海藻酸鈉使得粒子間排斥力強(qiáng)于對(duì)照組,預(yù)示著體系更加穩(wěn)定。

    2.8SLN和SA-SLN的體外釋放在模擬胃液釋放試驗(yàn)中,由于樣品的流體性質(zhì),SLN懸濁液在胃液環(huán)境停留的時(shí)間短,故采用30min作為釋放時(shí)間[12]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),SLN在pH2的模擬胃液環(huán)境下釋放3.79%的芯材鐵,SA-SLN在相同條件下釋放3.43%,低于未加海藻酸鈉的SLN,說(shuō)明SLN在低pH的胃酸環(huán)境下穩(wěn)定,且有效保護(hù)芯材,防止泄漏。

    圖8的結(jié)果顯示,SLN和SA-SLN在模擬腸液中呈現(xiàn)出快速釋放的現(xiàn)象,并且在30min的釋放時(shí)間之后緩慢釋放。此現(xiàn)象的原因可能是,在釋放介質(zhì)環(huán)境下,附在固脂粒表層的二價(jià)鐵離子逐漸釋放出來(lái)。與SLN在30min釋放18.57%藥物相比,SA-SLN呈現(xiàn)出更高的釋放率,為22.32%,推測(cè)原因?yàn)楫?dāng)SLN在釋放時(shí),由于聚合物的參與,聚合物在顆粒表面逐漸舒展溶解,形成通路,F(xiàn)e2+與外界介質(zhì)的接觸增大,釋放率提高,從而為固體脂質(zhì)納米粒在無(wú)機(jī)鐵離子吸收部位釋放提供了可能性。

    表1 SLN的物理化學(xué)特征

    圖8 SLN 和SA-SLN在模擬腸液中的釋放Fig.8 Release of SLN and SA-SLN in simulated intestinal fluid

    3結(jié)論

    該試驗(yàn)運(yùn)用W/O/W乳化法成功制備了葡萄糖酸亞鐵固體脂質(zhì)納米粒,并考察了內(nèi)外相、油水相體積比以及卵磷脂濃度對(duì)SLN包埋率的影響,確定當(dāng)內(nèi)相中水相與油相的體積比為0.2,外水相與內(nèi)相乳狀液的體積比為5∶1,卵磷脂濃度為5%時(shí),SLN的包埋率取得最大,為52.48%。海藻酸鈉的引入,由于與二價(jià)鐵離子發(fā)生靜電作用,對(duì)SLN的包埋率、粒徑及Zeta電位產(chǎn)生了影響。當(dāng)海藻酸鈉與葡萄糖酸亞鐵的質(zhì)量比為1∶2時(shí),SLN的包埋率取得最大,為59.03%,優(yōu)于對(duì)照組。釋放試驗(yàn)結(jié)果顯示,SLN在模擬胃液中可以保護(hù)藥物,并且在模擬腸液介質(zhì)中實(shí)現(xiàn)釋放。綜上,固體脂質(zhì)納米體作為新型藥物傳遞釋放系統(tǒng),為無(wú)機(jī)亞鐵的包埋提供了新的技術(shù)手段。

    參考文獻(xiàn)

    [1]BURCHUMJ,ROSENTHALL.Lehne’spharmacologyfornursingcare[M].Elsevier-HealthSciencesDivision,2015.

    [2]WorldHealthOrganization.Micronutrientdeficiencies[EB/OL].(2014)[2016-04-01].http://www.who.int/nutrition/topics/ida/en/.

    [3]BRABINBJ,PREMJIZ,VERHOEFFF.AnanalysisofAnemiaandchildmortality[J].Journalofnutrition,2001,131(2):636-645.

    [4]ZIMMEIMANMB,HURRELLRF.Nutritionalirondeficiency[J].Lancet,2007,370(9586):511-520.

    [5]HURRELLR.Howtoensureadequateironabsorptionfromiron-fortifiedfood[J].Nutritionreviews,2002,60(7):7-15.

    [6]FRICKERG,KROMPT,WENDELA,etal.Phospholipidsandlipid-basedformulationsinoraldrugdelivery[J].Pharmaceuticalresearch,2010,27(8):1469-1486.

    [7]ZARIWALAMG,ELSAIDN,JACKSONTL,etal.Anovelapproachtooralirondeliveryusingferroussulphateloadedsolidlipidnanoparticles[J].Internationaljournalofpharmaceutics,2013,456(2):400-407.

    [8]XIASQ,XUSY.Ferroussulfateliposomes:Preparation,stabilityandapplicationinfluidmilk[J].Foodresearchinternational,2005,38(3):289-296.

    [9]MEHNERTW,MADERK.Solidlipidnanoparticlesproduction,characterizationandapplications[J].Advanceddrugdeliveryreviews,2012,64:83-101.

    [10] 王傳好,曹光群,孫謙.W/O/W型多重乳狀液的制備及應(yīng)用概述 [J].日用化學(xué)工業(yè),1991,3(8):23-32.

    [11]XINYJ,BLIGHMW,KINSELAAS,etal.Effectofirononmembranefoulingbyalginateintheabsenceandpresenceofcalcium[J].Journalofmembranescience,2016,497:289-299.

    [12]LINHC,PRATHERC,F(xiàn)ISHERRS,etal.Measurementofgastrointestinaltransit[J].Digestivediseasesandsciences,2005,50(6):989-1004.

    [13]MUKHIJAK,SINGHALK,ANGMOS,etal.Potentialofalginateencapsulatedferricsaccharatemicroemulsionstoameliorateirondeficiencyinmice[J].Biologicaltraceelementresearch,2016,172(1):179-192.

    作者簡(jiǎn)介王琳琳(1992-),女,北京人,碩士研究生,研究方向:食品資源與利用。*通訊作者,教授,博士,從事碳水化合物資源與利用研究。

    收稿日期2016-04-22

    中圖分類(lèi)號(hào)TS 201.1

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

    文章編號(hào)0517-6611(2016)16-090-04

    StudyonPreparationTechniqueofFerrousGluconate-LoadedSolidLipidNanoparticles

    WANGLin-lin,TONGQun-yi*

    (FoodScienceSchool,JiangnanUniversity,Wuxi,Jiangsu214122)

    Abstract[Objective] The aim was to explore preparation method of ferrous gluconate-loaded solid lipid nanoparticles. [Method] The ferrous gluconate solid lipid nanoparticles (SLN) was prepared by W/O/W double emulsion techniques. The influences of volume ratio of outer/ inner phase, aqueous/oil phase of internal phase and concentration of lecithin applied as the surfactant on the entrapment efficiency of SLN were investigated. [Result] The maximal entrapment efficiency, 52.48%, was obtained under the circumstances of 0.2 as the aqueous/oil phase of internal phase, 5∶1 as the volume ratio of outer/ inner phase, and 5% as concentration of lecithin. The addition of sodium alginate with weight ratio of 1∶2 to ferrous gluconate posed a positively impact on the entrapment efficiency, which was 59.03% and affected the size, Zeta potential and polydispersion index as well. The in vitro release profile showed that SLN could keep integrity in simulated gastric fluid and went through a burst release in simulated intestinal fluid. [Conclusion] SLN could protect the drug from disintegration and release in the active site and be a new method to produce inorganic iron salts supplementation.

    Key wordsSolid lipid nanoparticle (SLN); Ferrous gluconate; Sodium alginate

    中文字幕制服av| 涩涩av久久男人的天堂| 久久久久精品久久久久真实原创| 99re6热这里在线精品视频| 国产久久久一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 精品一区在线观看国产| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久精品国产自在天天线| 2022亚洲国产成人精品| 国产高清不卡午夜福利| 欧美高清成人免费视频www| 欧美成人午夜免费资源| 日本欧美国产在线视频| 男的添女的下面高潮视频| 99久久人妻综合| 免费观看性生交大片5| 成人国产麻豆网| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品成人久久久久久| 黄色日韩在线| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美成人午夜免费资源| 美女视频免费永久观看网站| 97精品久久久久久久久久精品| 国产在视频线精品| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 国产成人91sexporn| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲欧美清纯卡通| 日本色播在线视频| 岛国毛片在线播放| 3wmmmm亚洲av在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲国产色片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 综合色av麻豆| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲av中文av极速乱| 人妻 亚洲 视频| 免费在线观看成人毛片| 男男h啪啪无遮挡| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久国产乱子免费精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲美女搞黄在线观看| 下体分泌物呈黄色| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲精品色激情综合| 九九在线视频观看精品| 国产高清三级在线| 久久精品久久久久久久性| 婷婷色综合www| 一区二区三区乱码不卡18| 大片免费播放器 马上看| 天美传媒精品一区二区| av在线天堂中文字幕| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲电影在线观看av| 十八禁网站网址无遮挡 | 日韩一本色道免费dvd| www.av在线官网国产| 在线观看一区二区三区激情| 久久久a久久爽久久v久久| 国产日韩欧美亚洲二区| 伊人久久国产一区二区| 欧美成人午夜免费资源| 又爽又黄a免费视频| 黄色欧美视频在线观看| 国产成人a区在线观看| 国产成人a区在线观看| 精品久久久噜噜| 国产综合懂色| 久久久精品94久久精品| 日日啪夜夜撸| 国产黄片美女视频| 美女高潮的动态| 久久久久久久午夜电影| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日本黄大片高清| 永久免费av网站大全| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲av日韩在线播放| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 午夜免费鲁丝| 精品午夜福利在线看| 黄片wwwwww| 亚洲av中文av极速乱| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产免费一级a男人的天堂| 久久鲁丝午夜福利片| 人人妻人人看人人澡| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲欧美清纯卡通| 一级毛片我不卡| 亚洲高清免费不卡视频| 国精品久久久久久国模美| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 各种免费的搞黄视频| 少妇丰满av| 午夜日本视频在线| av在线蜜桃| 寂寞人妻少妇视频99o| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产午夜精品一二区理论片| 黄色欧美视频在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 久久久久久久国产电影| 国产久久久一区二区三区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美 日韩 精品 国产| 99热全是精品| 国产精品99久久99久久久不卡 | 又爽又黄无遮挡网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 最近手机中文字幕大全| 一级毛片我不卡| 日韩亚洲欧美综合| 一本久久精品| 精品久久久久久久末码| 校园人妻丝袜中文字幕| 高清av免费在线| 欧美精品国产亚洲| www.色视频.com| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲av欧美aⅴ国产| 成人亚洲精品一区在线观看 | 午夜爱爱视频在线播放| 亚洲最大成人手机在线| 大片免费播放器 马上看| 综合色丁香网| 激情五月婷婷亚洲| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲av福利一区| 少妇人妻久久综合中文| 日本午夜av视频| 久久久午夜欧美精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲欧美精品自产自拍| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产精品一区www在线观看| 免费观看的影片在线观看| 嫩草影院入口| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 校园人妻丝袜中文字幕| av国产精品久久久久影院| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 色哟哟·www| 国国产精品蜜臀av免费| 麻豆国产97在线/欧美| 大片电影免费在线观看免费| 99久久精品热视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日韩伦理黄色片| 日韩伦理黄色片| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲真实伦在线观看| 深夜a级毛片| 亚洲av国产av综合av卡| 国内精品美女久久久久久| 亚洲av二区三区四区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久精品人妻少妇| 26uuu在线亚洲综合色| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲精品视频女| 亚洲真实伦在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 交换朋友夫妻互换小说| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国产精品一区二区三区四区免费观看| 中文资源天堂在线| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲三级黄色毛片| 国产免费又黄又爽又色| 男女那种视频在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品一区www在线观看| 大香蕉97超碰在线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲av免费高清在线观看| 插阴视频在线观看视频| 亚洲国产最新在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 成年女人在线观看亚洲视频 | 久久热精品热| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产毛片在线视频| 日本熟妇午夜| 成人免费观看视频高清| 网址你懂的国产日韩在线| 欧美日韩综合久久久久久| av.在线天堂| 精品熟女少妇av免费看| 成人毛片60女人毛片免费| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日韩人妻高清精品专区| 日本黄大片高清| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲精品,欧美精品| 中国三级夫妇交换| 大码成人一级视频| 久久久久久国产a免费观看| 一级二级三级毛片免费看| 深爱激情五月婷婷| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲四区av| 99热全是精品| 超碰97精品在线观看| av线在线观看网站| 国产高清三级在线| 看黄色毛片网站| 熟女电影av网| 久久精品人妻少妇| 亚洲av欧美aⅴ国产| 在线观看av片永久免费下载| 午夜福利高清视频| 久久久亚洲精品成人影院| 久久久亚洲精品成人影院| 神马国产精品三级电影在线观看| av在线观看视频网站免费| 中文欧美无线码| 亚洲美女视频黄频| 麻豆国产97在线/欧美| 久久久精品欧美日韩精品| 国精品久久久久久国模美| 一区二区三区免费毛片| 成人无遮挡网站| 春色校园在线视频观看| 国产爽快片一区二区三区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩视频在线欧美| 国产又色又爽无遮挡免| 色综合色国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 22中文网久久字幕| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 精品人妻视频免费看| 看非洲黑人一级黄片| 免费电影在线观看免费观看| 听说在线观看完整版免费高清| 美女内射精品一级片tv| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲人成网站在线播| 精品久久久噜噜| 内射极品少妇av片p| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99热国产这里只有精品6| 国产综合精华液| 熟女人妻精品中文字幕| 可以在线观看毛片的网站| 一个人看视频在线观看www免费| 国产av码专区亚洲av| 成人黄色视频免费在线看| av免费在线看不卡| 激情五月婷婷亚洲| 禁无遮挡网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲av成人精品一区久久| 国产成人一区二区在线| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品成人在线| www.色视频.com| 观看美女的网站| 亚洲四区av| 性色av一级| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久这里有精品视频免费| 九草在线视频观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| av在线观看视频网站免费| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 九色成人免费人妻av| 精品久久久久久久末码| 午夜激情福利司机影院| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲人成网站高清观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 制服丝袜香蕉在线| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲精品乱久久久久久| 日韩强制内射视频| 久久午夜福利片| 成年免费大片在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看 | 男女边吃奶边做爰视频| 久久午夜福利片| 啦啦啦啦在线视频资源| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲色图av天堂| 日日啪夜夜撸| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 麻豆久久精品国产亚洲av| 精品久久久久久久久亚洲| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 成人综合一区亚洲| 全区人妻精品视频| 久久精品国产自在天天线| 少妇的逼好多水| 性插视频无遮挡在线免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 国产淫语在线视频| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品视频女| 国产高潮美女av| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av一本久久久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久热这里只有精品99| 成人综合一区亚洲| 欧美最新免费一区二区三区| 久久99精品国语久久久| 国产av不卡久久| 在线观看免费高清a一片| 男人和女人高潮做爰伦理| 男人狂女人下面高潮的视频| 赤兔流量卡办理| 精品国产露脸久久av麻豆| 日本色播在线视频| 国产亚洲最大av| 在线 av 中文字幕| 中文在线观看免费www的网站| 国产高清不卡午夜福利| 视频区图区小说| 久久久精品欧美日韩精品| av女优亚洲男人天堂| 在线观看人妻少妇| 欧美激情久久久久久爽电影| 成人黄色视频免费在线看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 男人狂女人下面高潮的视频| 看黄色毛片网站| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 少妇人妻久久综合中文| 免费观看性生交大片5| 久久精品国产亚洲网站| 国产午夜精品一二区理论片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 日日撸夜夜添| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 最近的中文字幕免费完整| 国产成人精品一,二区| 国产有黄有色有爽视频| 亚州av有码| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 极品教师在线视频| 在线播放无遮挡| 免费看a级黄色片| 亚洲国产欧美人成| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久精品国产亚洲av天美| 国产毛片a区久久久久| 成人黄色视频免费在线看| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲国产色片| 一级爰片在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 色视频在线一区二区三区| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲精品一区蜜桃| 国产高清不卡午夜福利| 成人国产麻豆网| 欧美zozozo另类| 别揉我奶头 嗯啊视频| 女人久久www免费人成看片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产成人a∨麻豆精品| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧美日韩东京热| 欧美日韩视频精品一区| 观看美女的网站| 免费看日本二区| 久久久久久久久久成人| 国产一区二区三区av在线| 久久午夜福利片| 国产大屁股一区二区在线视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 精品一区二区三区视频在线| 联通29元200g的流量卡| 久久精品人妻少妇| 亚洲最大成人av| 国产精品一区www在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 色哟哟·www| 麻豆乱淫一区二区| 国产探花极品一区二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | freevideosex欧美| 我要看日韩黄色一级片| 中文字幕免费在线视频6| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲国产欧美在线一区| 国产中年淑女户外野战色| 黄色配什么色好看| 69人妻影院| 国产综合懂色| 国产永久视频网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| av线在线观看网站| 国产成人精品久久久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 激情五月婷婷亚洲| 内地一区二区视频在线| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 精品久久国产蜜桃| 丝袜喷水一区| 午夜日本视频在线| 一区二区三区免费毛片| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 色视频在线一区二区三区| 中文字幕亚洲精品专区| 高清午夜精品一区二区三区| 一级片'在线观看视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 只有这里有精品99| 亚洲高清免费不卡视频| 国产免费又黄又爽又色| 日韩一本色道免费dvd| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲美女搞黄在线观看| .国产精品久久| a级毛片免费高清观看在线播放| 婷婷色av中文字幕| 大陆偷拍与自拍| 成人特级av手机在线观看| 欧美3d第一页| 日本免费在线观看一区| 日韩强制内射视频| 99久久人妻综合| 久久精品人妻少妇| 舔av片在线| av在线app专区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 免费观看无遮挡的男女| 国产成人a区在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 听说在线观看完整版免费高清| 丝瓜视频免费看黄片| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久久久久精品精品| 亚洲国产精品国产精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产中年淑女户外野战色| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲国产精品成人综合色| 免费人成在线观看视频色| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产高清国产精品国产三级 | 秋霞在线观看毛片| 亚洲欧美日韩东京热| 大码成人一级视频| 又爽又黄无遮挡网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 嫩草影院精品99| 亚洲图色成人| 午夜福利在线在线| 嫩草影院入口| 国产午夜精品一二区理论片| 男女下面进入的视频免费午夜| 97精品久久久久久久久久精品| 一个人看的www免费观看视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 内地一区二区视频在线| 久久精品人妻少妇| 免费观看的影片在线观看| 色5月婷婷丁香| 欧美精品国产亚洲| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 2018国产大陆天天弄谢| 女人被狂操c到高潮| av天堂中文字幕网| 久久久精品94久久精品| 亚洲人成网站在线播| 天堂中文最新版在线下载 | 丰满少妇做爰视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩一本色道免费dvd| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 久久精品久久久久久久性| 欧美xxⅹ黑人| 69人妻影院| 国产日韩欧美亚洲二区| 少妇丰满av| av卡一久久| h日本视频在线播放| 大片免费播放器 马上看| 亚洲av二区三区四区| 午夜福利视频精品| 搞女人的毛片| 久久久久久久午夜电影| 日韩欧美一区视频在线观看 | 成人鲁丝片一二三区免费| 两个人的视频大全免费| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲精品一二三| 草草在线视频免费看| 女人被狂操c到高潮| 国产永久视频网站| 国产 精品1| 中文天堂在线官网| 婷婷色综合www| 在线精品无人区一区二区三 | 国产一区二区在线观看日韩| 69人妻影院| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久久久网色| 欧美日韩综合久久久久久| 一边亲一边摸免费视频| 中文字幕制服av| 日韩av不卡免费在线播放| 18禁在线播放成人免费| 新久久久久国产一级毛片| 中文欧美无线码| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产老妇女一区| a级毛片免费高清观看在线播放| 涩涩av久久男人的天堂| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 丝袜喷水一区| 亚州av有码| 国产在线一区二区三区精| 久久久久久久久大av| 亚洲人成网站在线播| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 51国产日韩欧美| 国产黄色免费在线视频| 亚洲精品第二区| 日韩人妻高清精品专区| 在线免费观看不下载黄p国产| 寂寞人妻少妇视频99o| 最后的刺客免费高清国语| 免费av不卡在线播放| 69av精品久久久久久| 不卡视频在线观看欧美| 嫩草影院精品99| 亚洲欧美成人精品一区二区| 丰满乱子伦码专区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲天堂国产精品一区在线| 各种免费的搞黄视频| 亚洲人成网站在线播| 日韩伦理黄色片| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 九九在线视频观看精品| av卡一久久| 老司机影院毛片| 久久6这里有精品| 一个人看视频在线观看www免费| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 我的女老师完整版在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 少妇丰满av| 亚洲图色成人| 国产伦精品一区二区三区视频9| 内地一区二区视频在线| 亚洲国产精品专区欧美| tube8黄色片| 大片电影免费在线观看免费| 青春草视频在线免费观看| 亚州av有码| 国产成人精品一,二区| 国产精品人妻久久久影院| 男女那种视频在线观看| 在线观看三级黄色| 一级爰片在线观看| 少妇的逼好多水| 午夜免费观看性视频| 精品一区在线观看国产| 成人午夜精彩视频在线观看| 日韩av免费高清视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产亚洲最大av| 伦精品一区二区三区| 国产高清有码在线观看视频| 黄色配什么色好看| 毛片一级片免费看久久久久| .国产精品久久| 婷婷色综合www| 制服丝袜香蕉在线| 精品人妻熟女av久视频|