2016-2020年北京市某醫(yī)院金黃色葡萄球菌藥敏結(jié)果分析

劉志遠(yuǎn),安屹然,康利新,張婷菊,趙 娟,潘 健*

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院 檢驗科，北京100053；2.北京世青國際學(xué)校，北京100012)

金黃色葡萄球菌(S.aureus)是醫(yī)院感染的常見病原菌之一,可引起肺炎、菌血癥、心內(nèi)膜炎、創(chuàng)口感染、泌尿系統(tǒng)感染等，嚴(yán)重時可危及患者生命，在老年患者、免疫力低下及長期住院患者中多見[1]。本研究回顧了2016-2020年中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院分離金黃色葡萄球菌的臨床標(biāo)本情況、抗菌藥物耐藥情況，并觀察了木犀草素對甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌作用。

1 資料與方法

1.1 菌株收集2016-2020年期間中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院分離的非重復(fù)S.aureus 254株(將7天內(nèi)同一病人同一標(biāo)本來源的分離株視為同一株菌)。質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC29213、大腸埃希菌ATCC8739。

1.3 木犀草素最小抑菌濃度(MIC)、最小殺菌濃度(MBC)隨機(jī)選擇16株MRSA菌株觀察木犀草素的抗菌活性。將木犀草素以滅菌 M-H 肉湯倍比稀釋32、16、…0.25 mg/mL 8個濃度于96孔板中，加菌液至最終菌液濃度5×105CFU/mL，放置在微量震蕩儀震蕩3 min,35℃過夜培養(yǎng)。能抑制細(xì)菌生長的最低濃度為MIC;每孔取菌液，劃線法接種于血平板，無細(xì)菌生長的最小濃度即為藥物MBC。

1.4 聯(lián)合藥敏試驗將不同濃度的木犀草素和不同抗菌藥物(慶大霉素、左氧氟沙星、頭孢西丁)分別按棋盤法設(shè)計，兩兩組合加入 96 孔平板中，加菌液至最終菌液濃度5×105CFU/mL，35℃過夜培養(yǎng)，觀察結(jié)果。記錄單獨應(yīng)用兩藥的最低抑菌濃度MIC A和MIC B，并選擇最佳組合效應(yīng)時兩藥聯(lián)合時各自的 MIC A+B，計算部分抑菌濃度指數(shù)(FICI),FICI=MIC A藥聯(lián)用/MIC A藥單用+MIC B藥聯(lián)用/MIC B藥單用。FICI≤0.5，協(xié)同作用；0.52，拮抗作用。

2 結(jié)果

2.1 不同標(biāo)本來源金黃色葡萄球菌分離情況近5年S.aureus主要分離自痰、膿液、傷口分泌物等標(biāo)本，見表1。

表1 金黃色葡萄球菌樣本類型分布

2.2 2016-2020年金黃色葡萄球菌耐藥率2016-2019年MRSA陽性率呈上升趨勢，2020年則出現(xiàn)明顯下降。除紅霉素外，2020年其他抗菌藥物的耐藥率也有不同程度下降，見表2。

表2 2016-2020年金黃色葡萄球菌耐藥率

2.3 木犀草素微量稀釋法藥敏結(jié)果ATCC29213最小抑菌濃度為0.25 mg/mL，16株臨床分離S.aureus中，15株菌的木犀草素的最小抑菌濃度為0.25 mg/mL，1株為0.5 mg/mL。木犀草素對16株MRSA的最小殺菌濃度2株為0.5 mg/mL，6株為1 mg/mL,8株為2 mg/mL。

2.4 聯(lián)合藥敏試驗隨機(jī)選擇了3株MRSA菌株，進(jìn)行木犀草素和左氧氟沙星、木犀草素和慶大霉素、木犀草素和頭孢西丁的聯(lián)合藥敏試驗，木犀草素和左氧氟沙星、慶大霉素為無關(guān)作用，木犀草素和頭孢西丁為相加作用(表3)。

表3 聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果

3 討論

S.aureus是臨床常見的病原菌之一，可引起多種感染。由于傳統(tǒng)的微生物標(biāo)本送檢習(xí)慣，痰標(biāo)本仍然是送檢最多的標(biāo)本，所以S.aureus以分離自痰標(biāo)本居多[1-2]，本院情況類似，2016-2020年 S.aureus分離自痰液居多，其次是膿液、傷口分泌物。隨著院感防控意識、抗菌藥物規(guī)范使用意識的提高，標(biāo)本送檢結(jié)構(gòu)逐步改進(jìn)，傷口分泌物中的S.aureus所占比重逐年提高，中國細(xì)菌耐藥監(jiān)測研究2017-2018年的數(shù)據(jù)中，分泌物標(biāo)本已經(jīng)成為S.aureus的主要來源，其次是血液和痰液[3]。

隨著抗生素的大量使用，導(dǎo)致S.aureus的耐藥性升高，尤其是 MRSA 的出現(xiàn)，對臨床的抗感染治療帶來挑戰(zhàn)。但近年來我國抗菌藥物管理日益嚴(yán)格，臨床使用抗菌藥物趨于規(guī)范，MRSA陽性率出現(xiàn)了下降的趨勢[4]。我院MRSA分離情況2016-2019年呈上升趨勢，2019年達(dá)到最高34.8%，2020年下降到22.7%(表2)，與CHINET中國細(xì)菌耐藥監(jiān)測數(shù)據(jù)MRSA下降的趨勢一致。2020年S.aureus對其他抗生素如慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、復(fù)方新諾明、克林霉素、四環(huán)素的耐藥率也明顯下降。

近幾年來，隨著細(xì)菌耐藥問題日益嚴(yán)峻，研究者開始探索可能替代或補充抗菌藥物的一些制劑或方法，如抗生物膜活性的制劑生物表面活劑、磁性納米顆粒、細(xì)菌素、組蛋白及一些天然藥物成分等[5-6]。木犀草素是野菊花的有效成分之一，具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等多種藥理活性[7]。本研究通過微量肉湯稀釋法也觀察到木犀草素對臨床分離MRSA菌株具有良好的抗菌作用，16株MRSA除1株MIC為0.5 mg/mL外，其他15株MIC 均為0.25 mg/mL，最小殺菌濃度在0.5-2 mg/mL之間。同時本研究中聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果提示木犀草素與慶大霉素、左氧氟沙星、頭孢西丁均沒有協(xié)同作用，其中與前兩者表現(xiàn)為無關(guān)作用，僅與頭孢西丁表現(xiàn)為相加作用。

綜上所述，隨著抗菌藥物管理、使用的規(guī)范，S.aureus耐藥率呈現(xiàn)下降趨勢，在耐藥性控制方面取得了一定的成效，提示加強細(xì)菌耐藥性監(jiān)測，結(jié)合醫(yī)院感染預(yù)防控制措施，對控制耐藥細(xì)菌的流行播散是行之有效的[4]。木犀草素對S.aureus的體外抗菌活性，直接證實了野菊花通過煎湯外洗或制膏外涂治療疔瘡癰腫的可行性、有效性。未來包括植物性藥物在內(nèi)的抗菌藥物替代性療法在解決細(xì)菌耐藥問題上可能發(fā)揮重要作用。