高原型藏羊多疫苗聯(lián)合免疫與單苗免疫效果對比試驗

才仁卓瑪 鐵富萍 劉文清 祁果 林永霞 李長云 孫靜 羅延洪 李成 華青本 蘇必亮 河生德

摘要：對成年藏羊進行O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘組合和口蹄疫、小反芻獸疫、布魯氏菌病組合聯(lián)合免疫，與單苗免疫效果進行比較。結(jié)果顯示，2種組合的安全性較好，未發(fā)生明顯免疫副反應，同時表現(xiàn)出了與單苗一致或稍好于單苗的免疫效果，抗體合格率達到或超過了國家規(guī)定的70%的標準，相互干擾和拮抗作用不明顯。

關(guān)鍵詞：藏羊;多疫苗聯(lián)合免疫;單苗免疫

中圖分類號：S858.26? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2021）07-0013-04

隨著分子生物學、細胞生物學、醫(yī)學生物技術(shù)等相關(guān)學科的飛速發(fā)展，新疫苗不斷被研究和開發(fā)，疫苗種類大量增加。截至2005年底，我國已經(jīng)生產(chǎn)使用的人用疫苗多達40余種。疫苗數(shù)量的增多，在預防多種傳染病的同時，也伴隨著一系列問題的產(chǎn)生，如兒童預防接種次數(shù)增加、疫苗管理難度加大、預防接種工作成本增高等。因此，開發(fā)并推廣應用一劑可以預防多病的聯(lián)合疫苗勢在必行[1]。在家畜疫病防控方面，也面臨同樣問題，做到一劑可以預防多病的聯(lián)合疫苗開發(fā)較少，目前常見的有羊四聯(lián)疫苗、羊痘-小反芻獸疫苗等極少數(shù)疫苗。

隨著羊肉價格的提高，海晏縣高原型藏羊（以下統(tǒng)稱藏羊）養(yǎng)殖發(fā)展迅速，流通日益頻繁，導致藏羊疫病日趨復雜化，疫病防控難度增大。統(tǒng)計表明，海晏縣藏羊每年注射病毒類、細菌類及寄生蟲類疫苗近10種，需要抓羊進行預防注射及驅(qū)蟲次數(shù)在12次以上，雖然通過注射欄建設等能夠緩解免疫注射過程中的部分勞動力不足等問題，但依然存在農(nóng)牧民防疫過程中抓羊負擔重、基層防疫員免疫工作任務多等問題，增加了養(yǎng)殖成本，降低了經(jīng)濟效益。為探討藏羊免疫新方法，創(chuàng)新免疫程序，降低免疫成本，減少應激反應，提高經(jīng)濟效益，對O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘及布魯氏菌病等4種青海省強制性免疫疫苗的聯(lián)合免疫與單苗免疫進行了對比試驗，以期為多疫苗聯(lián)合免疫和獸用聯(lián)合疫苗的開發(fā)研究提供相關(guān)理論依據(jù)。

1 試驗區(qū)基本情況

96351牧場位于海晏縣東部，草原面積4萬hm2，屬高寒草甸草場。全場年存欄藏羊4.8萬只，年產(chǎn)羔羊3萬余只。根據(jù)地理布局牧場分為3個牧業(yè)生產(chǎn)大隊，屬集體管理體制。藏羊飼養(yǎng)采取放牧為主，冬春季節(jié)適量補飼玉米（按每只0.2 kg/d補飼），不同年齡、性別單獨組群，統(tǒng)一生產(chǎn)、統(tǒng)一疫病預防的飼養(yǎng)管理方法。

2 材料與方法

2.1 試驗時間與材料

2.1.1 試驗時間及地點 2019年9月至2020年3月在96351部隊牧場三大隊進行。

2.1.2 供試藏羊 牧場三大隊一牧戶6歲經(jīng)產(chǎn)母羊群，飼養(yǎng)數(shù)量550余只。選擇有角、大小基本一致、膘情較好、臨床檢查健康母羊120只，在耳根皮下埋入電子耳標，同時在羊角涂抹油漆加以區(qū)分不同分組。

2.1.3 供試疫苗 中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)的口蹄疫O型滅活疫苗，生產(chǎn)批號F190706J;新疆天康生物股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫活疫苗，生產(chǎn)批號2018037-2;青海生物藥品有限公司生產(chǎn)的羊痘活疫苗，生產(chǎn)批號201822;乾元浩生物股份有限公司南京生物藥廠生產(chǎn)的布魯氏菌活疫苗（S2株），生產(chǎn)批號190101。

2.1.4 檢測試劑盒 O型口蹄疫液相阻斷ELIAS抗體檢測試劑盒、小反芻獸疫競爭ELIAS檢測試劑盒、羊痘間接ELIAS抗原檢測試劑盒均購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所、批號分別為20200602133（10126）、20200527118、2020090419-1。布魯氏菌競爭ELIAS抗體檢測試劑盒，由廣州悅洋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號EB0220006，均在有效期內(nèi)。

2.2 試驗方法

2.2.1 試驗分組 試驗組分為A、B兩組，每組藏羊30只，共60只。其中，A組同時在頸部、臀部和尾根皮內(nèi)注射口蹄疫、小反芻獸疫及羊痘3種疫苗，B組同時在兩側(cè)頸部、臀部皮內(nèi)注射口蹄疫、小反芻獸疫及布魯氏菌病3種疫苗;對照組藏羊共60只，隨機分4個小組，每組15只，分別注射口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘及布魯氏菌病疫苗。

2.2.2 疫苗注射 每個組合3種疫苗由3人負責注射，分別在兩側(cè)頸部、臀部或尾根皮內(nèi)進行注射，劑量按照說明書要求足量注射;注射部位進行剪毛、消毒處理，注射針頭做到一畜一針。

2.2.3 免疫副反應觀察 注苗后安排專人觀察試驗藏羊精神、采食、運動等狀況，連續(xù)觀察7 d。

2.2.4 采血及血清分離 所有羊只第1個月分別采集注射疫苗前和注射疫苗后7、14、21、28 d的頸靜脈血液，從第2個月開始每月采血1次，連續(xù)采集6個月，每次采集血液量不少于5 mL，血清分離后在 -20 ℃冰箱保存待檢。

2.2.5 實驗室檢測 對O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘、布魯氏菌均采用ELIAS方法進行血清抗體水平檢測。根據(jù)ELIAS檢測試劑盒說明書進行檢測，對檢測數(shù)據(jù)進行詳細記錄并統(tǒng)計分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 免疫副反應觀察

供試羊注射疫苗1 d后臨床抽檢，注射部位稍有紅腫，精神稍差，但均未出現(xiàn)明顯的精神不振、飲食欲減退、行動緩慢或跛行等副反應，也未發(fā)現(xiàn)應激死亡羊只。

3.2 O型口蹄疫免疫抗體水平檢測結(jié)果

由表1可見，A、B 兩組口蹄疫抗體水平均在注射疫苗7 d后迅速而穩(wěn)步上升，達到70%以上的陽性率，而對照組7 d后陽性率僅為57.14%。注射疫苗后，試驗A、B 組抗體水平相較于對照組明顯更高且穩(wěn)定。

3.3 小反芻獸疫免疫抗體水平

試驗藏羊在2019秋季防疫注射了小反芻疫苗，由表2可見，對照組和試驗A、 B組小反芻獸疫抗體水平在注射疫苗前均處于100%高水平狀態(tài)。注射疫苗后第184天時抗體水平仍處于穩(wěn)定和持續(xù)的高水平狀態(tài)。

3.4 布魯氏菌病抗體水平

由表3可見，羊群藏羊在2018年秋季注射布魯氏菌病S2號疫苗后，到次年秋季仍然達到了60%以上的抗體陽性率。試驗組藏羊注射疫苗后在第7天時抗體陽性率已達100%，對照組在第15天時陽性率達到100%。2個組第184天時抗體陽性率依然維持在極高的水平。

3.5 羊痘免疫抗體水平

該牧戶羊群在2018年秋季防疫期間進行了羊痘疫苗的免疫接種，從表4可以看出，試驗羊在免疫前羊痘的抗體水平處于較高水平，注射疫苗后一直維持較高的抗體陽性率。

4 小結(jié)與討論

（1）陳泳等〔2〕用正向間接血凝法對新疆綿羊進行了O型口蹄疫苗抗體消長情況研究，結(jié)果顯示免疫后30 d抗體陽性率達到98.6%，150 d后降到73%。姚菊霞等〔3〕研究表明，綿羊進行口蹄疫、羊痘、小反芻獸疫3種疫苗分點注射，15 d后O型口蹄疫抗體陽性率達到最高值，稍高于單苗注射組;上述3種病毒病疫苗和羊三聯(lián)苗分點注射，結(jié)果病毒病疫苗免疫抗體檢測結(jié)果基本一致。本試驗結(jié)果顯示口蹄疫苗免疫后15 d時對照組抗體水平達到較高水平，而試驗A、B組在7 d時就達到了較高水平;試驗組和單苗對照組在184 d時其抗體陽性率依然維持在86%以上的較高水平，顯著高于其他人的試驗結(jié)果，筆者認為多疫苗免疫對O型口蹄疫抗體產(chǎn)生具有促進和協(xié)同作用。

（2）徐雅萍等〔4〕對湖羊小反芻獸疫免疫效果的研究結(jié)果表明，90日齡以上湖羊免疫抗體合格率明顯高于90日齡以下羊只，免疫后14 d左右可達到峰值，7個月后呈緩慢下降趨勢。本試驗開始前藏羊小反芻獸疫抗體陽性率達到100%，無法反映試驗過程中試驗組與對照組的差異，但可以說明成年藏羊每年注射1次小反芻獸疫苗，羊群抗體陽性率在1年內(nèi)可以達到極高的水平，明顯比注射1次疫苗的湖羊陽性率更高且持久。祁廣儀等〔5〕研究結(jié)果顯示，羊口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘分點注射組合和小反芻獸疫、羊痘、羊三聯(lián)苗分點注射組合，小反芻獸疫抗體陽性率在30～45d達到最高值。筆者認為藏羊進行的多疫苗聯(lián)合免疫，對小反芻獸疫抗體產(chǎn)生沒有明顯的干擾和抑制作用。

（3）試驗組和對照組藏羊S2布魯氏菌病疫苗注射1年后抗體平均陽性率分別維持在70%和60%，試驗組注射疫苗后其布魯氏菌病抗體陽性率在第15天時達到了峰值，154～184 d時抗體合格率依然處在100%的穩(wěn)定狀態(tài)，這比申捷等[6]的研究結(jié)論（經(jīng)1次免疫后綿羊及山羊均在第20天時血清抗體陽性率達到最高峰，之后呈下降趨勢，免疫后90 d降至14%以下）不同，其抗體水平穩(wěn)定性強且維持時間更長。與李建玲等[7]的試驗結(jié)果（S2疫苗免疫羊后14 d其血清抗體水平達到峰值，2次免疫的布魯氏菌病抗體轉(zhuǎn)陽率明顯高于單次免疫）一致。

（4）吳婷等〔8〕研究認為湖羊羊痘疫苗免疫后第7天可產(chǎn)生較高水平的抗體，第28天左右達到峰值，第61天抗體水平合格率為85.7%。本試驗中藏羊注射羊痘疫苗1年后抗體水平仍然較高，表明每年強化免疫可以維持較高抗體水平。姚菊霞等[3]認為，口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫、羊痘同時分點免疫時羊痘抗體水平要優(yōu)于單苗免疫組，本試驗結(jié)果顯示試驗組和對照組藏羊羊痘免疫抗體均能達到較高水平，未發(fā)現(xiàn)明顯的相互干擾和拮抗作用。

5 結(jié)論

O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘及布魯氏菌病4種不同類型疫苗在成年藏羊中進行不同組合聯(lián)合免疫，其安全性較好，沒有發(fā)生明顯的副反應，同時表現(xiàn)出了與單苗一致或稍好于單苗的免疫效果，抗體合格率達到或超過了國家規(guī)定的70%標準，相互干擾、拮抗作用不明顯，在一定程度上還有協(xié)同促進作用，建議在海晏縣今后的藏羊免疫預防中推廣使用。

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