PRRS減毒活疫苗抗體消長(zhǎng)規(guī)律及仔豬最佳首免日齡探究

高 勝，李 洋，馬志倩，李志偉，徐樂樂，焦 點(diǎn)，馮英桐，杜興乾，肖書奇 (西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome viius,PRRSV)引起的一種重要?jiǎng)游飩魅静?，能引起全年齡段豬感染，對(duì)生豬養(yǎng)殖業(yè)造成巨大打擊[1-4]。PRRS具有免疫抑制的特點(diǎn)，會(huì)對(duì)豬的免疫系統(tǒng)造成破壞，從而繼發(fā)其他疾病而加重對(duì)感染豬的危害[5]。PRRSV屬動(dòng)脈炎病毒科，為單股正鏈RNA病毒，基因組全長(zhǎng)約15 kb，可分為歐洲型PRRSV毒株(Ⅰ型)與北美型PRRSV(Ⅱ型)2個(gè)亞型。我國(guó)流行的主要是北美型PRRSV，但歐洲型PRRSV也偶呈散點(diǎn)狀零星出現(xiàn)[6-7]。PRRSV是已知變異速度最快的RNA病毒之一，其基因組替換率可達(dá)(4.71～9.80)×10-2堿基/年[8]。PRRSV基因組變異速度快、不同型毒株間同源性較低、流行毒株種類多樣。盡管采取了很多措施，但PRRS在我國(guó)養(yǎng)豬場(chǎng)中仍時(shí)有暴發(fā)，且經(jīng)常出現(xiàn)具有新的基因組特性和致病性的PRRSV毒株[9-13]。

最新發(fā)布的《關(guān)于調(diào)整完善動(dòng)物疫病防控支持政策的通知》強(qiáng)調(diào)將PRRS和豬瘟退出國(guó)家強(qiáng)制免疫，即不再由國(guó)家統(tǒng)一采購(gòu)疫苗[14]。盡管如此，疫苗接種仍是我國(guó)大部分豬場(chǎng)防控PRRS的主要手段[15]。據(jù)報(bào)道，現(xiàn)階段我國(guó)約有72%的養(yǎng)豬場(chǎng)通過接種疫苗防控PRRS，而有67%的豬場(chǎng)會(huì)免疫2～3次[16]。目前商品化PRRS疫苗主要有9種，其中2種為PRRSV滅活苗，7種為減毒活疫苗。一般而言，減毒活疫苗較滅活疫苗具備更好的免疫原性和保護(hù)效果，而運(yùn)用較廣的也主要是HP-PRRS減毒活疫苗及經(jīng)典PRRS減毒活疫苗[17]。

養(yǎng)殖生產(chǎn)中，多在妊娠母豬分娩前注射1次 PRRS疫苗，以便仔豬在娩出后通過吮吸初乳獲得母源抗體。母源抗體能對(duì)初生仔豬提供充足的保護(hù)作用，但隨著仔豬日齡的增加，體內(nèi)的母源抗體水平會(huì)逐漸下降至有效濃度之下[18-19]。因此，在母源抗體消失前對(duì)仔豬進(jìn)行PRRS疫苗免疫，并使其達(dá)到有效保護(hù)水平是較為合理的免疫方案。本研究對(duì)妊娠母豬注射PRRS減毒活疫苗，對(duì)其分娩仔豬體內(nèi)的母源抗體進(jìn)行了測(cè)定分析，以探究母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律；在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)不同日齡的仔豬進(jìn)行PRRS疫苗的首次免疫，并在免疫后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定了其PRRSV抗體水平，以期探究仔豬接種PRRS疫苗的最佳首免日齡。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及疫苗本試驗(yàn)所用動(dòng)物為山東省某規(guī)?；i場(chǎng)的健康二元母豬及其所產(chǎn)仔豬。PRRS減毒活疫苗為勃林格殷格翰公司生產(chǎn)的PRRS減毒活疫苗(VR2332株)；PRRS抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自愛德士(IDEXX)公司。

1.2 仔豬PRRS母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律隨機(jī)選擇5頭健康妊娠母豬，在其分娩前35 d肌肉注射1頭份PRRS減毒活疫苗，隨機(jī)選擇分娩仔豬30頭，于0，4，7，10，16，21，28，35日齡時(shí)采集前腔靜脈血分離血清，測(cè)定各組仔豬的PRRS抗體水平及陽(yáng)性率。

1.3 仔豬PRRS減毒活疫苗接種的最佳首免日齡選擇175頭健康仔豬，隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F和G共7組，每組25頭。分別于0(采食初乳前)，4，7，14，21，28，35日齡時(shí)對(duì)7組仔豬免疫PRRS減毒活疫苗，并于免疫后0，7，14，21，28，35 d時(shí)采集各組仔豬血清測(cè)定PRRS抗體水平及陽(yáng)性率，比較不同首免日齡免疫后仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)血清中PRRS抗體水平的判定以IDEXX公司抗體試劑盒的說(shuō)明書為準(zhǔn)，當(dāng)S/P≥0.4 時(shí)，血清中PRRS抗體為陽(yáng)性；當(dāng)S/P<0.4時(shí)，血清中PRRS抗體為陰性。

1.5 數(shù)據(jù)處理采用軟件GraphPad Prism 5.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及并繪制圖表。

2 結(jié)果

2.1 免疫PRRS減毒活疫苗母豬所產(chǎn)仔豬的PRRS母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定30頭仔豬在分娩后0，4，7，10，16，21，28，35 d時(shí)的PRRS抗體水平及陽(yáng)性率，結(jié)果如圖1和表1所示，仔豬在吸吮母乳后，體內(nèi)PRRS抗體水平逐漸升高，出生后4 d均值即可達(dá)峰值(S/P=1.19)，且陽(yáng)性率達(dá)100%；在7，10 d PRRS抗體均值仍穩(wěn)定在峰值附近，且陽(yáng)性率為96%；此后，豬群PRRS抗體均值及陽(yáng)性率隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，至出生28 d，PRRS抗體水平均值接近臨界值(S/P=0.44)，陽(yáng)性率僅為35%；出生35 d，仔豬體內(nèi)PRRS抗體平均值轉(zhuǎn)為陰性。

柱上方數(shù)字表示平均值。下同圖1 仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

表1 免疫仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

2.2 仔豬接種PRRS減毒活疫苗的最佳首免日齡將175頭仔豬隨機(jī)分為7組，每組25頭，分別于0，4，7，14，21，28，35 d接種1頭份PRRS減毒活疫苗，并于免疫后0，7，14，21，28，35 d采集血液，測(cè)定血清中的PRRS抗體及陽(yáng)性率，結(jié)果見圖2～8、表2～8。

圖2 0日齡免疫組仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

圖2和表2的結(jié)果表明：0日齡免疫組，即在分娩當(dāng)日未吃母乳前對(duì)仔豬接種PRRS減毒活疫苗后，仔豬在免疫后7 d即可產(chǎn)生高水平PRRS抗體(S/P=0.84)，且陽(yáng)性率達(dá)75%；PRRS抗體持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，截止到免疫后35 d時(shí)其平均值仍處于較高水平(S/P=1.32)，陽(yáng)性率達(dá)95%，且尚無(wú)衰減趨勢(shì)。

表2 0日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

圖3和表3的結(jié)果表明：4日齡仔豬免疫后，除免疫后7 d，PRRS抗體均值接近臨界值外(S/P=0.39)，其余各測(cè)定時(shí)間點(diǎn)PRRS抗體均值均為陽(yáng)性，且陽(yáng)性率均>70%；此外，該組仔豬在免疫后21 d PRRS抗體水平及陽(yáng)性率仍維持在較高水平，直至35 d。

圖3 4日齡免疫組仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

表3 4日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

圖4和表4的結(jié)果表明：7日齡仔豬免疫后，PRRS抗體水平隨時(shí)間推移逐漸增長(zhǎng)。除免疫后7 d 外，其余各時(shí)間點(diǎn)PRRS抗體均呈陽(yáng)性，且陽(yáng)性率同樣維持在較高水平。該組仔豬在免疫21 d后PRRS抗體水平迅速提升，直至免疫后35 d。

表4 7日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

圖4 7日齡免疫組仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

圖5和表5的結(jié)果表明：14日齡仔豬免疫后，至少14 d內(nèi)未產(chǎn)生有效PRRS抗體，免疫后21 d，仔豬產(chǎn)生了高水平的PRRS抗體(S/P=1.58)，且陽(yáng)性率達(dá)到了71%；免疫后35 d，PRRS抗體仍處于較高水平(S/P=1.78)，且陽(yáng)性率為86%。

圖5 14日齡免疫組仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

表5 14日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

圖6和表6的結(jié)果表明：21日齡仔豬免疫后7 d 內(nèi)并未產(chǎn)生PRRS抗體；血清轉(zhuǎn)化出現(xiàn)在免疫后14 d，但此時(shí)陽(yáng)性率較低，僅為17%；免疫后21 d，PRRS抗體均值進(jìn)一步升高，且陽(yáng)性率達(dá)到96%；此后，PRRS抗體水平及陽(yáng)性率均隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，直至免疫后35 d(S/P=1.89)。

圖6 21日齡免疫組仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

表6 21日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

圖7和表7的結(jié)果表明：28日齡仔豬免疫后至少7 d內(nèi)未產(chǎn)生PRRS抗體；血清轉(zhuǎn)化出現(xiàn)在免疫后14 d，PRRS抗體陽(yáng)性率達(dá)83%；此后PRRS抗體及陽(yáng)性率隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，持續(xù)至免疫后35 d(S/P=2.11，100%)。

圖7 28日齡免疫組仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

表7 28日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

圖8和表8的結(jié)果表明：35日齡仔豬免疫后7 d 內(nèi)未產(chǎn)生PRRS抗體，血清轉(zhuǎn)化出現(xiàn)在免疫后14 d，但PRRS抗體陽(yáng)性率僅為40%；此后PRRS抗體及陽(yáng)性率隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，持續(xù)至免疫后35 d(S/P=2.35，100%)。

圖8 35日齡免疫組仔豬體內(nèi)PRRS抗體水平

表8 35日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽(yáng)性率

3 討論

本研究探討了免疫PRRS減毒活疫苗的妊娠母豬所產(chǎn)仔豬PRRS抗體在仔豬體內(nèi)的消長(zhǎng)情況。周緒斌等[20]研究發(fā)現(xiàn)，PRRS疫苗免疫后14 d開始出現(xiàn)血清轉(zhuǎn)陽(yáng)。陸桂麗等[21]研究結(jié)果表明，PRRS母源抗體隨時(shí)間推移而呈遞減趨勢(shì)，28～35日齡時(shí)抗體水平靠近臨界值，并建議首免日齡為28日齡。本研究中，仔豬吮吸母乳后會(huì)逐漸產(chǎn)生高水平的PRRS抗體，在4日齡時(shí)即可達(dá)峰值，截止到21日齡時(shí)PRRS抗體仍處于較高水平，且陽(yáng)性率始終>70%；而28日齡時(shí)，雖然PRRS抗體均值仍為陽(yáng)性，但陽(yáng)性率僅為35%，表明仔豬PRRS疫苗的首次免疫應(yīng)放在28日齡之前。

對(duì)不同日齡的仔豬進(jìn)行PRRS減毒活疫苗的首次免疫，以期確定最合適的首免日齡。發(fā)現(xiàn)0日齡仔豬(采食初乳前)自免疫后7～35 d內(nèi)，PRRS抗體均值均處于陽(yáng)性范圍內(nèi)，且具有較高的陽(yáng)性率，單純考慮抗體水平而言，這一時(shí)間段是較為合理的免疫時(shí)間。4日齡免疫組在測(cè)定周期內(nèi)也基本具備較高水平的PRRS抗體均值，且陽(yáng)性率除免疫后7 d 外，均大于70%，也是較為合理的首免日齡。7日齡仔豬免疫后，PRRSV抗體水平隨時(shí)間推移逐漸增長(zhǎng)，除免疫后7 d外，其余各時(shí)間點(diǎn)PRRSV抗體均呈陽(yáng)性，且陽(yáng)性率同樣維持在較高水平，也可以作為合理的首免日齡。此后，14,21,28,35日齡首免組，均有一段較長(zhǎng)的空窗期，難以提供有效的保護(hù)，不作為推薦的免疫時(shí)間。

綜上，結(jié)合母源抗體消長(zhǎng)情況，在仔豬分娩當(dāng)天(采食初乳前)或分娩后4～7 d時(shí)進(jìn)行PRRS減毒活疫苗(VR2332)的首次免疫可能是較為合理的免疫方案。