CD44、CD166在潰瘍性結(jié)腸炎上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及臨床意義

李瑩 楊蔚峰 寧燕華 黃芳菊 胡馨予

1廣西壯族自治區(qū)欽州市第一人民醫(yī)院病理科 535000；2廣西壯族自治區(qū)欽州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科 535000

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是臨床常見炎性疾病，上皮內(nèi)瘤變（IN）是結(jié)直腸常見息肉，UC-IN是結(jié)直腸癌患者癌前病變階段，是導(dǎo)致結(jié)直腸癌發(fā)生的重要因素。通過分析UC-IN階段腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)并采取針對性干預(yù)措施，對預(yù)防結(jié)直腸癌發(fā)生或提早干預(yù)有重要意義。相關(guān)研究指出，腫瘤組織內(nèi)存在極少數(shù)具有自我更新及無限繁殖能力、促進(jìn)腫瘤發(fā)生的細(xì)胞——腫瘤干細(xì)胞，可分化為不同表型腫瘤細(xì)胞，在腫瘤形成階段通過分裂增加數(shù)量，從而促使腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移［1］。分析、尋找、分離、鑒定腫瘤干細(xì)胞是目前臨床研究熱點。CD44是結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物，CD166是間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志，在結(jié)直腸癌上皮細(xì)胞內(nèi)呈異質(zhì)性分布，CD166即可作為單獨結(jié)直腸癌標(biāo)志，又與CD44存在協(xié)同關(guān)系［2］。本研究選取欽州市第一人民醫(yī)院UC-IN患者，旨在從CD44、CD166臨床表達(dá)方面分析其與腫瘤病理學(xué)之間的關(guān)系，為臨床診療、預(yù)后評估提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取欽州市第一人民醫(yī)院2018年10月至2021年1月UC-IN患者53例為研究對象，均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為UC-IN，術(shù)前未進(jìn)行放化療干預(yù)，其中男38例，女15例；年齡范圍為32～64歲，年齡（47.95±7.16）歲。標(biāo)本切除后24 h內(nèi)采集對應(yīng)癌組織，甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋、切片，厚度4μm。正常腸黏膜組織者14例（與癌組織相距＞5 cm，且HE染色確定腸黏膜組織正常），其中男10例，女4例；年齡范圍為30～67歲，年齡（49.05±7.31）歲。UC-IN患者與正常腸黏膜組織者性別、年齡等資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。患者及家屬知情同意，且簽署知情同意書；本研究經(jīng)欽州市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法（1）制作組織芯片：標(biāo)本組織常規(guī)病理切片，行常規(guī)HE染色，經(jīng)2名病理學(xué)專家（病理科主任醫(yī)師1名，擅長軟組織、淋巴組織及皮膚腫瘤的病理診斷；病理科副主任醫(yī)師1名，擅長食管癌、肺癌、胸壁腫瘤外科治療及綜合治療）以雙盲法切片，HE切片上標(biāo)記典型病變位置，并與蠟塊對照，蠟塊相應(yīng)位置做標(biāo)記；制作2 cm×4 cm空白蠟塊，通過組織芯片制備儀對空白蠟塊打孔，直徑為1.5 cm，根據(jù)HE切片標(biāo)記位置在標(biāo)本組織蠟塊對應(yīng)位置獲取索要組織置入空白蠟塊中，記錄組織編號里重復(fù)上述步驟制作3塊標(biāo)本組織芯片蠟塊。（2）免疫組化法：標(biāo)本組織芯片進(jìn)行4μm切片，敷貼在經(jīng)3-氨基丙基三乙氧基硅烷處理的載玻片，置入烤箱，加熱30～60 min，采用免疫組化法標(biāo)記CD44、CD166。具體步驟：①活檢組織標(biāo)本切片應(yīng)用乙醇進(jìn)行脫水，梯度分別為75%、85%、90%、95%、100%；②行二甲苯透明處理，浸蠟，所有操作在組織處理機(jī)中進(jìn)行；③石蠟包埋，切片，厚度控制在4～5μm；④應(yīng)用二甲苯及100%、95%、90%、85%、75%梯度乙醇行脫蠟處理；⑤4μm常規(guī)蠟塊切片脫蠟至水；⑥以蘇木精實施3 min染色處理，沖洗；⑦以鹽酸酒精（1%）行分化處理，沖洗；⑧以氨水（1%）實施5 s返藍(lán)處理，沖洗；⑨以伊紅實施1 min染色，沖洗；⑩應(yīng)用乙醇進(jìn)行脫水，梯度分別為75%、85%、90%、95%、100%；?行二甲苯透明處理后，中性樹膠封片。（3）判定標(biāo)準(zhǔn)。CD44：陽性表達(dá)于細(xì)胞膜，少量表達(dá)于胞漿，以半定量法計數(shù)，＞25%記為（+++），5%～25%記為（++），＜5%記為（+），未見陽性細(xì)胞記為（-）。CD166：陽性染色為胞膜或胞漿存在棕黃色顆粒沉著，根據(jù)陽性細(xì)胞百分比確定陽性強度，＞10%記為（++），5%～10%記為（+），＜5%記為（-）。每個視野查100個細(xì)胞，40×物鏡下查10個視野，統(tǒng)計陽性細(xì)胞數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)（1）統(tǒng)計CD44、CD166染色結(jié)果。（2）分析比較CD44、CD166在UC-IN及正常腸黏膜中的表達(dá)。（3）分析UC-IN患者不同病灶浸潤深度CD44、CD166的臨床表達(dá)。（4）分析不同病理分級UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 通過SPSS22.0處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，組間行獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料以例（%）表示，行χ2檢驗，等級資料比較采用Ridit檢驗，檢驗標(biāo)準(zhǔn)α＝0.05。

2 結(jié) 果

2.1 CD44、CD166染色結(jié)果統(tǒng)計 53例UC-IN患者CD44陽性細(xì)胞沿腺管基底側(cè)呈小灶性弱陽性染色，CD166陽性細(xì)胞沿腺管基底側(cè)呈黃色胞漿染色；14例正常腸黏膜組織者CD44均為陰性染色，CD166基本為陰性染色，部分可見腺管基底側(cè)小灶性淺黃色胞漿染色，見圖1～2。

圖1 CD44在正常腸黏膜（A）及潰瘍性結(jié)腸炎上皮內(nèi)瘤變（B）中的表達(dá) ×40

2.2 CD44、CD166在UC-IN及正常腸黏膜中的表達(dá)UC-IN患者CD44、CD166表達(dá)水平明顯高于正常腸黏膜者（均P＜0.05），見表1。

表1 CD44、CD166在UC-IN及正常腸黏膜中的表達(dá)[例（%）]

2.3 不同病灶浸潤深度UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達(dá) 病灶浸潤至漿膜層者CD44、CD166表達(dá)水平明顯高于病灶浸潤至肌層者（均P＜0.05），見表2。

表2 不同病灶浸潤深度的UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達(dá)[例（%）]

2.4 不同病理分級UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達(dá) 病理分級為中的UC-IN患者CD44、CD166表達(dá)水平均低于病理分級為低的UC-IN患者（均P＜0.05），見表3。

表3 不同病理分級的UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達(dá)[例（%）]

圖2 CD166在正常腸黏膜（A）及潰瘍性結(jié)腸炎上皮內(nèi)瘤變（B）中的表達(dá) ×40

3 討 論

UC是病因尚未明確的結(jié)直腸慢性非特異性炎性反應(yīng)，病變位置多局限于大腸黏膜及黏膜下層，可延伸至整個結(jié)腸，且病程較長，易反復(fù)發(fā)作。UC-IN是結(jié)腸癌惡性病變前的特殊階段，在細(xì)胞排列及細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面與正常組織相比具有顯著改變，生物學(xué)上具有侵襲性，細(xì)胞學(xué)及組織結(jié)構(gòu)學(xué)上具有異型性。結(jié)直腸癌的發(fā)生是多階段、多步驟、多基因參與的疾病，近年來發(fā)病率明顯上升，其中80%以上的結(jié)直腸癌患者均由UC-IN惡性病變進(jìn)展所致［3］。因此，分析UC-IN患者腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)水平具有重要臨床意義。

近年來腫瘤疾病發(fā)病率有上升趨勢，關(guān)于腫瘤干細(xì)胞的研究逐漸成為臨床研究熱點，分析腫瘤標(biāo)志物特性的研究逐漸受到臨床重視。既往研究證實，多種腫瘤細(xì)胞內(nèi)均存在不同程度CD44、CD166表達(dá)，可作為腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物，對臨床診療、預(yù)后評估有一定價值［4-5］。但目前關(guān)于從腫瘤干細(xì)胞角度分析CD44、CD166與腫瘤進(jìn)展的機(jī)制研究相對較少。CD44是跨膜糖蛋白，同時是細(xì)胞表面黏附分子，多在腫瘤細(xì)胞表面或間質(zhì)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、正常組織內(nèi)表達(dá)，有研究指出CD44可作為白血病腫瘤標(biāo)志物，同時可作為胃癌、肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等腫瘤標(biāo)志物［6-7］。CD44具有黏附性，可促使腫瘤細(xì)胞呈浸潤性生長，對促進(jìn)腫瘤發(fā)生、進(jìn)展及轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)有重要關(guān)系［8］。本研究數(shù)據(jù)顯示，正常腸黏膜者未見CD44表達(dá)，UC-IN患者沿腺管基底側(cè)呈小灶性表達(dá)，主要表達(dá)于細(xì)胞膜，部分胞漿部位存在淺染色。通過數(shù)據(jù)分析顯示，CD44表達(dá)與病灶浸潤深度、病理分級密切相關(guān)，病灶浸潤至漿膜層者、病理分級較低者CD44呈高表達(dá)。

CD166是淋巴細(xì)胞抗原CD6配體、免疫球蛋白基因超家族的跨膜蛋白，是活化白細(xì)胞黏附分子，廣泛分布于多分化潛能間葉祖細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、胸腺上皮細(xì)胞，具有較強侵襲性，是評估腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志物，在結(jié)直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌等多種腫瘤中均存在過度表達(dá)［9-10］。CD166過度表達(dá)可加快腫瘤細(xì)胞繁殖，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展［11-12］。本研究數(shù)據(jù)顯示，正常腸黏膜者CD166基本為陰性染色，UC-IN患者CD166陽性細(xì)胞沿腺管基底側(cè)呈黃色胞漿染色，同時病灶浸潤深度、病理分級與CD166過度表達(dá)密切相關(guān)，其中病灶浸潤至漿膜層者、病理分級較低者則CD166表達(dá)越明顯。

上述數(shù)據(jù)及分析結(jié)果表明CD44、CD166與UC-IN患者病變程度密切相關(guān)，可反映UC-IN患者病灶浸潤情況及分化程度，提示在UC-IN患者病變過程中CD44、CD166存在重要促進(jìn)作用，二者可能存在相關(guān)聯(lián)系共同對腫瘤細(xì)胞惡性分化、浸潤起到促進(jìn)作用。本研究通過分析CD44、CD166兩種抗體，同時標(biāo)記雙陽性細(xì)胞，得出在UC-IN病變過程中CD44、CD166均存在明顯變化，提示二者對腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用，可作為腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物。CD44、CD166與UC-IN病灶惡化、浸潤程度關(guān)系密切，但通過臨床檢測是否可評估結(jié)腸癌患者生物學(xué)行為，尚需進(jìn)一步數(shù)據(jù)證實。

綜上，CD44、CD166在UC-IN患者中呈高表達(dá)，且與病灶浸潤深度、病理分級關(guān)系密切，通過檢測其水平對UC-IN臨床診療、預(yù)后評估具有一定價值，有助于分析UC-IN患者病灶惡性病變風(fēng)險，臨床應(yīng)用價值較高。