延邊地區(qū)豬O型口蹄疫抗體水平監(jiān)測與免疫效果分析

韓 悅，張 燕，周博宇，于龍政

延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林延吉 133000

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性高度接觸性發(fā)熱性傳染病。它主要感染蹄類動(dòng)物，例如豬和牛。受感染動(dòng)物的典型臨床特征為口舌黏膜、蹄部皮膚形成水皰、糜爛或潰瘍性病變，可導(dǎo)致幼畜死亡、并導(dǎo)致成年畜生產(chǎn)性能下降[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織把口蹄疫列為A類中的第一傳染病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病[2]。近幾年，北美洲、大洋洲、歐洲等地區(qū)的畜牧業(yè)發(fā)達(dá)國家始終保持無口蹄疫狀態(tài)，只有亞洲和非洲為口蹄疫高發(fā)區(qū)。目前已知的口蹄疫有A型、O型、SAT1、SAT2、SAT3 型和 Asia I型、C 型等七個(gè)血清型[3]。

口蹄疫病毒在我國民間俗稱“鵝口瘡”“五號(hào)病”“脫靴癥”[4]。此病多發(fā)生于與患病動(dòng)物密切接觸，主要通過消化道、生殖系統(tǒng)、呼吸道、破損的皮膚、黏膜和人工授精等進(jìn)行直接或間接傳播。該病病程急，傳播速度快，所以一旦發(fā)生，常表現(xiàn)為大流行。因此，口蹄疫病毒的防制工作仍然是我國獸醫(yī)衛(wèi)生工作的重要部分。

1 材料和方法

1.1 血清樣品

來自延邊州龍井市地區(qū)，不同規(guī)模的27個(gè)養(yǎng)殖場戶的豬全血樣品846份，其中10月份采集血清600份，11月份采集186份，12月份共采集60份。

1.2 主要儀器設(shè)備與試劑

產(chǎn)自北京吉田生物科技有限公司的口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒。單道移液器、多道移液器、加樣槽、洗板機(jī)、振動(dòng)器、離心機(jī)、自動(dòng)酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌器、便攜式超純水系統(tǒng)、pH測試儀、超級潔凈工作臺(tái)、實(shí)驗(yàn)室冰箱,待測血清。

1.3 方法

1.3.1 試劑準(zhǔn)備

準(zhǔn)備25×PBST濃縮液，用去離子水稀釋。磷酸鹽-吐溫緩沖液因低溫保存有結(jié)晶，使用前微熱溶化。底物溶液配制：1片檸檬酸-磷酸鹽片劑+100 mL去離子水，避光溶解。取50 mL+1片鄰苯二胺（OPD）片劑充分溶解，分裝，-20 ℃避光保存。使用前每次1 mL底物溶液加3%雙氧水10 μL制備。

1.3.2 操作步驟

在稀釋板上稀釋樣品血清及陽性對照血清，陰性對照血清，50 μL/孔；在樣品血清和陰陽性對照血清中加入抗原，50 μL/孔；封板，震蕩，將稀釋板4 ℃過夜或37 ℃90 min；包被 ELISA板每孔用50 μL兔抗病毒血清包被，U型反應(yīng)板。將抗原抗體混合液從U型反應(yīng)板上按次序轉(zhuǎn)移至已包被口蹄疫O型兔抗的ELISA板上。封板，37 ℃ 60 min。洗板3～5次，拍干，加口蹄疫O型豚鼠抗體工作液（紅色）封板，37 ℃ 30 min。洗板3～5次，拍干，加兔抗豚鼠lgG-HRP工作液（藍(lán)色）封板，37 ℃ 30 min。洗板3～5次，拍干，加入底物溶液 50 μL/ 孔 37 ℃ 15 min；加入終止液，50 μL/ 孔，輕輕震搖混勻；測定讀取酶標(biāo)儀OD492 nm讀數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果判定

判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體效價(jià)≥1:128 口蹄疫O型抗體陽性；抗體效價(jià)＜1:64口蹄疫O型陰性；抗體效價(jià)1:64～1:128 可疑，重測后抗體效價(jià)≥1:128時(shí)，判定為陽性；抗體效價(jià)＜1:128時(shí)為陰性。ELISA抗體效價(jià)與免疫動(dòng)物攻毒保護(hù)關(guān)系：抗體滴度以50%終滴定表示，即該稀釋度50%孔的抑制率大于抗原對照孔抑制率均數(shù)的50%。

2.2 豬O型口蹄疫免疫抗體個(gè)體合格率

10～12月份，對龍井市27個(gè)養(yǎng)殖場點(diǎn)的846份樣品進(jìn)行了監(jiān)測，抗體合格數(shù)789份，抗體合格率93.26%，其中10～12月份的抗體合格數(shù)分別為91.66%、97.85%、95.00%（監(jiān)測結(jié)果詳見表1）。龍井市本地豬養(yǎng)殖場豬O型口蹄疫抗體水平趨勢（見圖1）。

表1 龍井市豬場2019年10～12月份豬O型口蹄疫免疫抗體合格率

圖1 龍井市豬O型口蹄疫抗體水平趨勢圖

2.3 分析

調(diào)查結(jié)果表明，近期本地養(yǎng)殖豬場豬O型口蹄疫抗體水平一直處于較高的水平，都在80%（國家規(guī)定水平）以上，雖然結(jié)果看著相差不大，但我國口蹄疫抗體水平都維持在較高的抗體水平，這樣使得抗體功能有效化，從而讓易感動(dòng)物處于長期保護(hù)狀態(tài)。

3 討論

當(dāng)前，我國預(yù)防口蹄疫的主要途徑是使用合成肽疫苗和滅活疫苗，兩者均是由基礎(chǔ)疫苗合成。在疫苗質(zhì)量上作比較，國產(chǎn)疫苗價(jià)格優(yōu)惠，免疫期短，但是在生產(chǎn)工藝上仍存在很多問題,例如可能引起副反應(yīng)、疫苗抗原含量不符合標(biāo)準(zhǔn)，疫苗運(yùn)輸與存儲(chǔ)沒有按照相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。另外，出現(xiàn)不合格樣品有很多原因：可能是免疫操作不規(guī)范、操作過程中出現(xiàn)漏免、免疫間隔會(huì)影響疫苗的免疫效果。對于這些問題豬場的工作人員仍然不能松懈，從疫苗質(zhì)量、注射操作、豬群的狀況等幾個(gè)方面處理，找到原因并進(jìn)行解決，保障豬群及養(yǎng)豬業(yè)更快更好的發(fā)展。

建議加強(qiáng)對口蹄疫免疫抗體的監(jiān)測工作，采用病原體監(jiān)測和抗體監(jiān)測相結(jié)合的方式，實(shí)施定期監(jiān)控?？谔阋呒膊》乐伪O(jiān)測任務(wù)困難，每年采集的樣本量較多，動(dòng)物面臨著多次的免疫和抽血，易出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，養(yǎng)殖戶對采血產(chǎn)生抵觸情緒。建議探索實(shí)施引進(jìn)哨兵動(dòng)物策略[5]，進(jìn)行口蹄疫等疾病監(jiān)測。要提高大眾對飼養(yǎng)化管理的認(rèn)識(shí)，首先讓群眾了解什么是飼養(yǎng)化管理，從基本出發(fā)，打好“把飼養(yǎng)化管理落實(shí)群眾”這一根本基石。實(shí)行科學(xué)免疫，嚴(yán)格引種，強(qiáng)化監(jiān)督?？茖W(xué)免疫至關(guān)重要，近年來，不少豬場對免疫不夠重視，為疫病暴發(fā)留下隱患。豬口蹄疫危害巨大，應(yīng)加大重視，采取及時(shí)有效的免疫接種措施，這樣才能有所防護(hù),還要根據(jù)每個(gè)豬場的實(shí)際情況對免疫程序進(jìn)行制定調(diào)整，嚴(yán)格按規(guī)定進(jìn)行免疫接種工作[6]。