三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗抗體檢測實驗探討

梁瓊文

(岑溪市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動物疫病預(yù)防控制中心，廣西 岑溪 543200)

0 引言

根據(jù)《國家動物疫病強制免疫計劃》的通知要求，明確將高致病性禽流感納入強制免疫計劃，并要求對高致病性禽流感免疫密度達到100%，免疫抗體合格率達到70%以上。

目前針對免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗，其免疫效力水準一直有待評價。現(xiàn)就實際檢測情況，具體分析如下。

1 材料以及方法

1)實驗用活體。23日齡沒有特定病原的生產(chǎn)用雞。

2)實驗用疫苗。三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗(H5N1 Re-12株，H7N9 H7-Re3株)，試2019008以及試20201118共2個批次。

3)檢驗用標(biāo)準抗原。三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)H7亞型-Re3株標(biāo)準抗原，批號為20201118。

4)實驗方法。按照三黃雞免疫重組禽流感病毒體H7亞型-Re3株三價滅活疫苗制造及檢驗試行規(guī)程中成品檢驗的血清學(xué)效力檢驗方法：兩批防護性抗原制劑分別免疫10只沒有特定病原的生產(chǎn)用雞，每只胸部肌肉注射防護性抗原制劑0.3 mL；另設(shè)空白對照組的生產(chǎn)用雞5只，不免疫防護性抗原制劑。免后14 d、21 d、28 d，分別采血分離血清，血清分別用三黃雞免疫重組禽流感病毒H7亞型-Re3株標(biāo)準抗原，按微量法禽流感血凝抑制(HI)實驗計算測定HI起保護作用的抗體效價。實驗分組設(shè)置詳見表1。

表1 試驗分組設(shè)置

2 結(jié)果以及討論

1)各實驗雞免后14 d、21 d、28 d，分別測定H7亞型-Re3株的HI起保護作用的抗體效價，計算各組的HI起保護作用的抗體效價均值(GMT)。具體如表2所示。

表2 試驗各組抗體效價 單位：log2

2)三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗血清學(xué)效力檢驗合格的判定標(biāo)準：每批三價滅活疫苗按照劑量免疫，0.3 mL/只，免后21 d，免疫雞血清的H7亞型-Re3株的HI起保護作用的抗體效價均值(GMT)均應(yīng)不低于6(log2)；空白對照組的生產(chǎn)用雞的HI起保護作用的抗體效價應(yīng)不高于2(log2)。

從本次檢驗的結(jié)果看，空白對照組的生產(chǎn)用雞的HI起保護作用的抗體效價在各個采血點均<2(log2)，檢驗的空白對照成立；實驗組的生產(chǎn)用雞的H7亞型-Re3株的HI起保護作用的抗體效價均值在免后14 d均大于7(log2)，在免后21 d均大于9(log2)。由此可知，防護性抗原制劑可誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，免后14 d已產(chǎn)生較好的免疫力，免后21 d的HI起保護作用的抗體效價比合格標(biāo)準高3個滴度以上，防護性抗原制劑的免疫效果良好。

3)免后28 d的H7亞型-Re3株的HI起保護作用的抗體效價均值均大于10(log2)，對比免后21 d，起保護作用的抗體水平呈繼續(xù)升高的趨勢，這與禽用油乳劑滅活三價滅活疫苗起保護作用的抗體上升規(guī)律一致。

3 結(jié)語

本次實驗計算結(jié)果顯示：三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗(H5N1 Re-12株，H7N9 H7-Re3株)的毒種免疫原性良好，按現(xiàn)有生產(chǎn)工藝制備的防護性抗原制劑，免疫力產(chǎn)生快，免疫起保護作用的抗體蛋白質(zhì)水準高。當(dāng)然，三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗實驗制作工藝有一個持續(xù)改善以及優(yōu)化的階段，相信隨著其實驗制作工藝的進一步優(yōu)化，防護性抗原制劑的質(zhì)量水準可進一步增強。

根據(jù)有關(guān)單位的研究結(jié)果，我國目前H5亞型禽流感流行以H5N6亞型為主，伴隨少量的H5N1亞型；從H5亞型基因進化樹來看，以2.3.4.4d分支為主，伴隨少量2.3.2.1d分支。據(jù)報道的攻毒實驗計算結(jié)果表明，對2.3.4.4d分支的H5N6亞型禽流感流行毒株，原來的H5N1Re-8株防護性抗原制劑僅能提供20%的保護，H5N1Re-12株防護性抗原制劑則能夠完全保護。三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗，對我國高致病性禽流感流行毒株的針對性強，免疫保護效果好。

我國對高致病性禽流感采取免疫以及撲殺相結(jié)合的防控策略，其中全面免疫是關(guān)鍵技術(shù)措施。三黃雞免疫重組禽流感病毒(H5+H7)三價滅活疫苗的推出使用，為防控高致病性禽流感提供了強有力的保障。