延安地區(qū)女性宮頸HPV感染特征及基因分型研究

石 芳，趙建芳

(北醫(yī)三院延安分院病理科，延安市中醫(yī)醫(yī)院，陜西 延安 716000)

HPV是一種屬于乳多空病毒科的乳頭狀瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。已分離出130多種HPVDNA，其中30多種與宮頸感染和病變有關。根據(jù)其致病力的大小分為高危型和低危型兩種。低危型主要引起生殖道肛周皮膚和陰道下部的外生性濕疣類病變、扁平濕疣類病變和宮頸低級別上皮內(nèi)病變(CIN I級)，多呈一過性，可自然逆轉(zhuǎn)；高危型主要導致宮頸高級別上皮內(nèi)病變(CIN II-III級)和宮頸癌的發(fā)生，持續(xù)高危型HPV感染的CINⅠ極易進展為CIN Ⅱ～Ⅲ。因此，對HPV進行篩查，統(tǒng)計HPV感染數(shù)據(jù)，對比分析，可為臨床預防宮頸病變、宮頸癌篩查及治療提供重要依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2020年5月期間在北醫(yī)三院延安分院(延安市中醫(yī)醫(yī)院)進行HPV檢測的體檢、“兩癌”篩查及就診患者，共計5472例。年齡20～74歲，平均年齡38.17歲。

1.2 儀器與試劑

核酸芯片檢測儀(型號BHF-VI)、人乳頭狀瘤病毒核酸檢測試劑盒(生物芯片法)均購自北京博暉創(chuàng)新生物技術股份有限公司。PCR擴增與斑點法均采用該儀器和試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集 以專用宮頸脫落細胞采集器進行采樣。臨床醫(yī)師先以窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去，取出宮頸刷置于宮頸口，單方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲得足量的上皮細胞樣本，然后將宮頸刷頭部放入洗脫管中，沿刷柄折痕處將宮頸柄刷折斷，旋緊洗脫管蓋，做好樣本標識，并保持洗脫管直立放置。樣本一經(jīng)采集，應盡快送檢；樣本室溫保存不超過2 h，2～8℃保存不超過1 d，-20℃保存不超過3個月，避免反復凍融。

1.3.2 檢測方法 ①樣品處理充分洗脫宮頸刷，并在管壁上擠干。取1 mL洗脫液轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中，13000 rpm離心10 min，棄部分上清液，保留約100 μL，使用移液器輕輕吸打3～5次，混勻待用。②將前期處理好的樣本，手動使用移液器取200 μL加入微流控芯片加樣孔，關閉儀器艙門。③核酸提取、PCR擴增、反向斑點雜交參考儀器說明書進行。

1.3.3 結果判定 采用微量點樣技術，將各位點檢測探針與各種質(zhì)控探針固定在雜交膜上，其中24種亞型HPV檢測探針、空白對照、陰性對照各1個點，內(nèi)參質(zhì)控探針有3個不同濃度，每個濃度各1個點，顯色質(zhì)控探針重復3個點。探針排布圖如圖所示(見表1)。

表1 探針排布圖

①陽性結果判定：雜交膜的SP點(3個)均有陽性斑點，內(nèi)參質(zhì)控點(3個)的GB-50點有陽性斑點，且有HPV探針陽性斑點出現(xiàn)，提示樣本為該探針對應亞型陽性；

②陰性結果判定：雜交膜的SP點(3個)均有陽性斑點，內(nèi)參質(zhì)控點(3個)的GB-50點有陽性斑點，且無HPV探針陽性斑點出現(xiàn)，提示該樣本HPV為陰性。

1.3.4 HPV檢測類型 檢測24種人乳頭狀瘤病毒核酸亞型(18種高危型：HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，83；6種低危型：HPV6，11，42，43，44，81)。

1.4 統(tǒng)計學方法

用Excel 2007錄入2018年1月至2020年5月所有數(shù)據(jù)資料建立數(shù)據(jù)庫，分析和計算HPV不同亞型感染率、不同年齡組HPV感染率。采用SPSS 20統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。

2 結果

2.1 HPV檢出情況分析

受檢婦女5472例中HPV感染者1043例，感染率19.06%。主要為單一高危HPV感染，感染率為12.02%；低危單一HPV感染率為2.19%；多重感染HPV率為4.82%(見表2)。

表2 2018年1月至2020年5月延安地區(qū)5472例婦女HPV感染情況分析

2.2 陽性標本中HPV亞型分型情況

1043例HPV感染者中，占前五位的高危型分別為：HPV16(12.8%)、HPV52(8.8%)、HPV58(7.6%)、HPV56(4.9%)、HPV51(3.9%)；占前三位低危分型分別為HPV42(3.3%)、HPV6(2.2%)、HPV44(2.2%)(見表3)。

表3 2018年1月至2020年5月1043例HPV感染各亞型分布情況

續(xù)表3

2.3 不同年齡組HPV感染的情況分析

將1043例感染者按5個年齡組的劃分，5組中30～39歲年齡組感染陽性占比最高，為40.27%；40～49歲年齡組感染陽性占比次之，為27.52%；20～29歲年齡組感染陽性占比為14.77%；20～59歲年齡組感染陽性占比為4.31%(見表4)。

表4 1043例HPV感染者不同年齡組HPV感染情況分析

3 討論

本次研究通過對延安地區(qū)體檢、“兩癌”篩查及就診患者5472例婦女進行HPV檢測，發(fā)現(xiàn)HPV陽性標本1043例，總體檢出率為19.06%。主要為單一高危HPV感染，檢出率為12.02%；單一低危HPV檢出率為2.19%；多重感染HPV率為4.82%。低于王蕾，等[1]對陜西地區(qū)9749例女性HPV基因分型檢測的總體感染率31.26%，也比廣東東莞30.18%的HPV感染率低[2]。這些差異可能與當?shù)氐慕?jīng)濟水平、人文環(huán)境、人員流動性有關。

本研究發(fā)現(xiàn)HPV高危感染中，HPV16、HPV52、HPV58位居前三位，與2012年至2016年原榮，等[3]對延安地區(qū)高危型別感染前三位基本一致；但與其對低危分型前三位HPV81、HPV11、HPV6不一致，本次研究發(fā)現(xiàn)低危感染中，HPV42、HPV6、HPV44占據(jù)前三位，應該與HPV低危型多呈一過性感染、反復感染、可自然逆轉(zhuǎn)有關。同時研究發(fā)現(xiàn)，30～39歲、40～49歲的婦女，感染率遠高于其他年齡組，這可能與這個年齡段婦女的性生活比較活躍有關，感染風險較高。通過研究對比，發(fā)現(xiàn)近十年，延安地區(qū)HPV感染亞型分布比例基本相差不大。

HPV感染普遍存在，79%的普通人會在一生中感染至少一種HPV亞型，而首次HPV感染時間往往與首次性行為相近，性傳播是肛門和生殖器HPV傳播的主要途徑。我們知道宮頸癌、女陰癌，肛門癌及口咽癌都與高危型HPV感染相關，其中85%以上感染有16/18型HPV；低危型HPV則主要誘發(fā)非惡性病變，其中90%生殖器疣與6/11型HPV感染有關。要避免這些疾病的發(fā)生，就需要人體產(chǎn)生相應的抗體。但人體感染HPV后，并不一定產(chǎn)生相應的抗體，2006年澳大利亞一項血清學調(diào)查表明，感染HPV的女性中只有大概60%的人能夠產(chǎn)生相應的抗體。因此HPV疫苗成為宮頸癌及其他HPV相關疾病預防的另一有效手段。目前全球已上市HPV疫苗有三種，分別為2價(預防HPV16/18亞型)、4價(預防HPV6/11/16/18亞型)和9價(預防HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58)HPV疫苗，這些疫苗覆蓋了現(xiàn)階段最高風險的HPV致病亞型。因此，應該提倡適齡人群大范圍接種。

但是有一個問題值得大家重視，在HPV疫苗大范圍接種后，可能改變自然界中的HPV亞型分布比例，HPV疫苗非覆蓋的其它高危亞型可能發(fā)展成為新的優(yōu)勢亞型。因此需要重視定期進行地區(qū)及全國范圍內(nèi)的HPV基因分型研究，為HPV新型疫苗研發(fā)及與HPV相關疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療提供可靠數(shù)據(jù)支持及重要臨床證據(jù)。