辛伐他汀對急性腦梗死患者血漿中PTEN、HIF-1α表達(dá)和預(yù)后的影響

宋曉英，馮 麗

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 延安 716000)

腦梗死又稱為缺血性腦卒中，屬于神經(jīng)科常見疾病，是由多種原因造成腦供血突然不足而引起的局部腦組織出現(xiàn)缺氧、缺血，組織壞死等癥狀。該疾病多發(fā)于中老年人群，具有發(fā)病率高、致殘致死率高的特點(diǎn)[1]。有研究顯示[2]，腦梗死患者約占全部腦卒中的70%左右，且死亡率可達(dá)5%～15%，存活者致殘率高達(dá)約50%，嚴(yán)重危害人們的身體健康及生存質(zhì)量。急性腦梗死的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，目前普遍認(rèn)為與動脈粥樣硬化、腦血栓形成等有關(guān)[2]。靜脈溶栓作為臨床治療該疾病的首選方案，具有一定的療效，但部分患者在接受治療后癥狀并未明顯緩解，且病情并未好轉(zhuǎn)，因此臨床急需尋找一種溶栓效果佳的藥物來提高治療效果，改善患者預(yù)后[3]。辛伐他汀屬于羥甲基戊二酰輔酶A(hydroxy methylglutaryl coenzyme A ,HMG-CoA)還原酶抑制劑，具有降低膽固醇的作用，已在抗血栓、降血脂、延緩動脈粥樣硬化等方面被廣泛應(yīng)用[4]。基于此，本研究旨在探討辛伐他汀對急性腦梗死患者血漿中10號染色體上缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表達(dá)和預(yù)后的影響，以便為臨床提供更多的選擇治療方案。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年4月至2019年4月延安大學(xué)附屬醫(yī)院接治的80例急性腦梗死患者作為研究對象，隨機(jī)分為辛伐他汀組和對照組各40例。其中辛伐他汀組男25例，女15例；年齡48～75歲，平均(60.86±7.34)歲；病程：2～24 h，平均(7.87±2.54)h；高血壓病17例，糖尿病8例，高脂血癥14例。對照組男26例，女14例；年齡50～78歲，平均(61.14±7.27)歲；病程：1～23 h，平均(8.14±2.47)h；高血壓病19例，糖尿病8例，高脂血癥13例。兩組性別、年齡、病程、合并高血壓、糖尿病及高脂血癥病例數(shù)等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

診斷參照中華神經(jīng)科學(xué)會制定的《各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)》中關(guān)于急性腦梗死的相關(guān)規(guī)定[5]。

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合上述診斷要點(diǎn)，并經(jīng)頭顱CT或MRI檢查確診為急性腦梗死患者；②所有患者均在發(fā)病24 h內(nèi)入院治療；③能耐受本次藥物患者。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并有嚴(yán)重心、肝、腎等疾病患者；②有其他腦部損傷，對本研究有干擾的患者；③合并惡性腫瘤、自身免疫性疾病或全身感染性疾病患者；④精神障礙，無法配合完成研究者。該研究所有患者均簽署知情同意書，并經(jīng)本院倫理委員會審核通過。

1.3 治療方法

對照組：給予患者常規(guī)治療，包括控制血糖、血壓，進(jìn)行營養(yǎng)支持，糾正水電解質(zhì)失衡、調(diào)節(jié)酸堿平衡等，連續(xù)治療2個月。辛伐他汀組：在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上配合辛伐他汀治療，患者口服辛伐他汀片(規(guī)格：20 mg，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字J20180007，廠家：杭州默沙東制藥有限公司)，20 mg/次，1次/d，連續(xù)治療2個月。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器

Trizol試劑(貨號：BYX1617P，規(guī)格：100 mL)于常州貝源鑫生物科技有限公司購買；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號：BPI01030)購于北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司；引物購于美國GeneCopoeia；實(shí)時熒光定量PCR試劑盒(貨號：DEM202-50T)購于北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司；ELISA試劑盒(貨號：GU-032)來自上海古朵生物科技有限公司。美國羅氏Light Cyclerreg 96實(shí)時熒光定量PCR儀(型號：JM1966-018500)購自上海聚慕醫(yī)療器械有限公司。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 血漿PTEN mRNA表達(dá)水平 分別于治療前后采集兩組患者空腹?fàn)顟B(tài)下外周靜脈血5.0 mL，離心15 min后(速率為3000 r/min)，分離血清，并置于-80℃低溫下保存待檢。采用實(shí)時熒光定量(Real-time Quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)技術(shù)檢測患者血清中PTEN mRNA水平。具體操作如下：①按照Trizol操作說明書提取細(xì)胞中總RNA；②取0.1 μg 總RNA，加入一定量逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase抑制劑及緩沖液等，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄以合成cDNA，該過程反應(yīng)條件為：42℃下50 min，95℃下5 min；③加入5.0 μL cDNA，1.0 μL正向和反向引物(如表1所示)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。循環(huán)反應(yīng)條件如下：95℃下預(yù)變性5 min，95℃下變性20 s，50℃下退火40 s，72℃下延伸40 s，循環(huán)40次后，再于72℃下延伸5 min；④每個樣品重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，采用2-△△Ct法計算血清PTEN mRNA的表達(dá)水平。

表1 PTEN及內(nèi)參GAPDH引物

1.5.2 血清HIF-1α蛋白水平 取適量1.5.1中處理后的血清，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immuno sorbent Assay，ELISA)檢測患者血清中HIF-1α蛋白水平；上述檢測操作均由專業(yè)實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格依照說明書完成。

1.5.3 NIHSS評分 依據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale，NIHSS)評分標(biāo)準(zhǔn)對兩組患者治療前后的神經(jīng)功能進(jìn)行評價，總分42分，評分越高，表示患者神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重。

1.5.4 預(yù)后情況 采用改良Rankin量表(Modified Rankin Scale,MRS)評估兩組患者治療后神經(jīng)功能缺損程度，其中0～2分表示預(yù)后良好，3～5分表示預(yù)后不良，統(tǒng)計并分析兩組患者治療后的預(yù)后情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 24.0分析處理，用均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式描述計量資料，行t檢驗(yàn)；用百分率(%)描述計數(shù)資料，行χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后血漿PTEN mRNA表達(dá)水平比較

治療前，兩組患者血漿PTEN mRNA表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者血漿PTEN mRNA表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)，且治療后辛伐他汀組血漿PTEN mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組(P<0.05，見表2)。

表2 兩組患者治療前后血漿PTEN mRNA表達(dá)水平比較

2.2 兩組患者治療前后血清HIF-1α蛋白水平比較

治療前，兩組患者血清HIF-1α蛋白水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者血清HIF-1α蛋白水平均比治療前顯著降低(P<0.05)；且治療后辛伐他汀組血清HIF-1α水平明顯低于對照組(P<0.05，見表3)。

表3 兩組患者治療前后血清HIF-1α水平比較

2.3 兩組患者治療前后NIHSS評分比較

治療前，兩組患者NIHSS評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組患者NIHSS評分均比治療前明顯降低(P<0.05)；且治療后辛伐他汀組NIHSS評分明顯低于對照組(P<0.05，見表4)。

表4 兩組患者治療前后NIHSS評分比較

2.4 兩組患者治療后預(yù)后情況比較

治療后，辛伐他汀組預(yù)后良好率為87.50%(35/40)顯著高于對照組67.50%(27/40)，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表5)。

表5 兩組患者治療后預(yù)后情況比較 [n(%)]

3 討論

目前臨床上主要使用他汀類藥物來治療腦梗死，包括阿托伐他汀、辛伐他汀等。有研究[6]顯示，他汀類藥物在治療心腦血管疾病方面有明顯優(yōu)勢，其對心腦血管具有一定的保護(hù)作用。辛伐他汀因具有多效性已成為臨床治療腦梗死應(yīng)用最廣泛的藥物。它可有效控制HMG-CoA的活性，降低患者的血脂水平。此外，辛伐他汀還可明顯降低缺血性腦卒中的發(fā)生概率，改善患者的預(yù)后。本研究中，辛伐他汀組預(yù)后良好率87.50 %，顯著高于對照組的67.50 %，提示辛伐他汀能改善患者預(yù)后，減輕患者的神經(jīng)功能損傷，這與前人研究一致[3]。

PTEN是目前為止發(fā)現(xiàn)的唯一具有蛋白脂酶和磷酸酶活性的基因，其在人類腫瘤中存在表達(dá)缺失或突變[7]。近來有研究顯示[8]，該基因可調(diào)控某些炎癥細(xì)胞，從而對炎癥反應(yīng)產(chǎn)生干預(yù)作用。本研究中，兩組患者血漿PTEN mRNA表達(dá)水平均顯著升高，且治療后辛伐他汀組血漿PTEN mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組，表明辛伐他汀可有效糾正PTEN的表達(dá)水平，減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)。HIF-1是一種異源二聚體，主要由HIF-1α和HIF-1β兩個亞單位組成，是至今發(fā)現(xiàn)的唯一一個能在特定缺氧環(huán)境中發(fā)揮活性的轉(zhuǎn)錄因子[9]。有研究[9]顯示，腦梗死患者外周血中HIF-1α水平會明顯升高，其在此時對患者的機(jī)體起到保護(hù)作用，以減輕缺氧、缺血造成的損傷。本研究中，兩組患者血清HIF-1α水平、NIHSS評分均比治療前顯著降低，且辛伐他汀組血清HIF-1α水平、NIHSS評分明顯低于對照組，提示辛伐他汀治療可有效地保護(hù)患者神經(jīng)功能，使患者盡快恢復(fù)正常。

綜上所述，辛伐他汀在急性腦梗死患者治療中療效顯著，可有效地降低患者神經(jīng)功能損傷程度，減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，改善患者預(yù)后，臨床價值較高，值得推廣應(yīng)用。但本研究因納入樣本量有限，結(jié)果可能存在一定偏倚，尚待大樣本量研究的驗(yàn)證。