超高效液相色譜法同時檢測丹參中14 種水溶性成分

陳慧芝，任君，尹予希

（烏海市檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 烏海 016000）

0 引言

丹參屬于唇形科植物丹參的干燥根與根莖，其屬于傳統(tǒng)中藥材，在我國中醫(yī)治療上具備悠久的應(yīng)用歷史，具備廣泛的用途[1]。根據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》上有相關(guān)記載，丹參主要用于“心腹邪氣”治療，可發(fā)揮“破癥除瘕，止煩滿，益氣”的功效[2]。目前在對丹參水溶性成分進(jìn)行檢測時，應(yīng)用的方法主要為高效液相色譜法，當(dāng)水溶性成分分離類型較多時，各個樣品的運行時間會達(dá)到60～70min，不但會造成檢測的時間漫長，無法完成大量樣品檢測工作，同時還會導(dǎo)致資源被大量浪費[3]。本次研究就采用超高效液相色譜法對丹參中14 種水溶性成分進(jìn)行檢測，探討超高效液相色譜法同時檢測丹參中14 種水溶性成分的效果。報告如下。

1 儀器與藥物

1.1 檢測儀器與試劑

本次研究應(yīng)用的檢測儀器包括美國費麗頓公司生產(chǎn)的超高效液相色譜檢測儀、上?？仆毓旧a(chǎn)的MD-500 型電子分析天平、浙江諾豪器械有限公司生產(chǎn)的LK 型超聲波清洗機、北京天科設(shè)備有限公司生產(chǎn)的ME200 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、浙江海林器械有限公司生產(chǎn)的SP-200 型中藥粉碎機以及真空干燥箱。

本次研究應(yīng)用的試劑包括美國Honeywell Burdick﹠Jackson 公司生產(chǎn)的乙腈，批號為S28M6D；上海斯諾威亞公司生產(chǎn)的乙酸，批號為18 625641；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或?qū)φ掌钒ǖ⑺剽c、丹酚酸B、原兒茶酸、迷迭香酸、原兒茶醛、咖啡酸、阿魏酸、異阿魏酸、丹酚酸A、9'丹酚酸B 單甲酯、9? 丹酚酸B 單甲酯、丹酚酸C、紫草酸、丹酚酸B 二甲酯。丹參樣品購自山東萊蕪市艾山、羅漢峪、九龍、密埠等區(qū)域。

1.2 方法

色譜條件為：色譜柱長寬為2.1×50mm，內(nèi)徑為1.7μm，柱體溫度控制為30℃；進(jìn)樣量為1μL，在檢測時將波長設(shè)置為286nm；流動相為：0.5%乙酸溶液（A）-乙腈（B），流速控制為0.6mL/min。

制備對照品溶液的方法：分別對對照品進(jìn)行稱取，稱取量為10mg 左右，然后采用80%甲醇溶液進(jìn)行溶解，然后進(jìn)行定容，總?cè)萘繛?0mL，配置濃度分別為：丹參素（1.126mg/mL）、丹酚酸B（0.982mg/mL）、原兒茶酸（0.944mg/mL）、迷迭香酸（0.962mg/mL）、原兒茶醛（1.06mg/mL）、咖啡酸（1.011mg/mL）、阿魏酸（1.010mg/mL）、異阿魏酸（1.020mg/mL）、丹酚酸A（0.968mg/mL）、9' 丹酚酸B單甲酯（1.049mg/mL）、9?丹酚酸B 單甲酯（1.067mg/mL）、丹酚酸C（0.996mg/mL）、紫草酸（0.973mg/mL）、丹酚酸B 二甲酯（0.904mg/mL）。

制備供試品溶液的方法：對樣品粉末進(jìn)行稱取，稱取量為1g 左右，放置于250mL 錐形瓶內(nèi)，添加100mL 純化水，加熱回流4h 后，放于室溫下待其冷卻后，對續(xù)濾液減壓濃縮，并對其實施定容處理，最終容量為25mL。

1.3 方法學(xué)驗證

首先，開展專屬性實驗，采用對照品溶液與供試品溶液，按照1.2 色譜條件進(jìn)樣，對色譜圖予以記錄。其次，開展線性關(guān)系考察，將各對照品溶液分別取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL 至50mL 量瓶內(nèi)，定容后搖勻，獲得5 份梯度濃度的混合對照品溶液，根據(jù)1.2 色譜條件實施分析，橫坐標(biāo)為各成分的濃度，縱坐標(biāo)為峰面積。并開展精密度實驗、穩(wěn)定性實驗、重復(fù)性實驗、重復(fù)性實驗，在進(jìn)行樣品檢測時，采用不同的樣品及不同的部位，對供試品溶液進(jìn)行制備，每份樣品制備3 份，開展色譜分析。

2 結(jié)果

2.1 水溶性成分回收率分析

超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分的平均回收率均超過97%，如表1。

表1 水溶性成分回收率分析

2.2 丹參不同部位含量測定結(jié)果

超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分時不同部位的含量存在差異，如表2。

表2 丹參不同部位含量測定結(jié)果

2.3 不同直徑丹參根含量測量結(jié)果

直徑為0.1～0.5cm 的丹參藥材和丹參周皮中14 種成分含量較高，如表3。

表3 不同直徑丹參根含量測量結(jié)果（cm）

3 討論

丹參屬于常用中醫(yī)藥物，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，丹參中具備的物質(zhì)達(dá)到100 余種，其具備的多種水溶性成分，可發(fā)揮抗菌、抗氧化以及對心腦血管疾病起到治療的作用[4]。丹酚酸類成分具備的結(jié)構(gòu)單元主要為咖啡酸以及丹參素，其具備較為相似的結(jié)構(gòu)，分離的難度較大，因此目前研究報道中未見較多的水溶性成分分離的報道[5]。前人研究報道顯示，在對丹參水溶性成分進(jìn)行測量時，流動相的有機相大部分為乙腈或者甲醇，非有機相主要為乙酸溶液或磷酸溶液，柱溫控制為20～40℃，波長為200～290nm，為分析最佳色譜條件，當(dāng)流動相為甲醇-0.5%乙酸溶液時，所測成分間的分離度較低。當(dāng)波長控制為210nm 時，能夠取得最好的溶劑效應(yīng)[6]。

丹參的部位會對丹參內(nèi)的水溶性成分水平產(chǎn)生影響，相較于根部，莖葉中具備的水溶性成分較多[7]。除丹參素外，其余不同水溶性成分的總量也明顯低于根[8]。直徑為0.1～0.5cm 的丹參藥材和丹參周皮中14 種成分含量較高，統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示直徑是影響14 種水溶性成分含量的重要因素。在丹參的部位和根的直徑會影響到丹參中水溶性成分的含量，直徑為0.1～0.5cm 丹參根所含各種水溶性成分均較高，總量上也表現(xiàn)出優(yōu)勢，莖葉中水溶性成分總量大大低于根，除丹參素外，其余單個成分含量也低于根。檢查開展的8min 內(nèi)，超高效液相色譜法可完全分離14 種水溶性成分，超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分的平均回收率均超過97%；超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分時不同部位的含量存在差異。

綜上所述，超高效液相色譜法同時檢測丹參中14種水溶性成分的效果好，具備較好的分離度以及靈敏度。同時，超高效液相色譜法檢測耗費的時間較短，可使資源得到節(jié)約也有利于做好質(zhì)量控制。