復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬繁殖性能、血清生化指標(biāo)和腸道菌群的影響

沈?qū)W懷，張丹俊，趙瑞宏，潘孝成，尹 磊，戴 銀，胡曉苗，周學(xué)利，侯宏艷

（安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽省畜禽疫病研究中心，畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031）

多年來，抗生素作為促生長(zhǎng)類飼料添加劑在保證畜禽健康和提高畜禽生產(chǎn)性能方面起到很大的作用，但大量抗生素的使用帶來了畜禽產(chǎn)品抗生素超標(biāo)、致病細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)等問題[1-3]。隨著近年來獸用抗生素使用的嚴(yán)格監(jiān)管，我國已經(jīng)在2020 年7 月1 日規(guī)定禁止使用抗生素藥物作為畜禽飼料添加劑[4]。中藥作為綠色無公害的飼料添加劑逐漸受到重視，其具有毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性、作用效果持久、無殘留污染等特點(diǎn)，其在提高畜禽生產(chǎn)性能、調(diào)節(jié)畜禽免疫力、降低料肉比等方面已得到很多的研究和實(shí)踐證實(shí)[5-8]。

隨著中藥加工技術(shù)的發(fā)展，以傳統(tǒng)中藥為基礎(chǔ)的現(xiàn)代中藥發(fā)酵技術(shù)迅速成為研究熱點(diǎn)。單方或復(fù)方中藥通過益生菌發(fā)酵可以代謝產(chǎn)生各種功效的酶，可能會(huì)將中藥的某些成分分解轉(zhuǎn)化成新的有效成分，并能將某些中藥的毒性成分分解，以降低使用中藥的毒副作用，從而提高療效、改變藥物性能和擴(kuò)大藥物適應(yīng)癥[9]。因此，發(fā)酵中藥作為飼料添加劑在未來養(yǎng)殖畜牧等行業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究采用商品名為“茶酵肽”的復(fù)方中藥發(fā)酵飼料飼喂母豬，對(duì)母豬的繁殖性能、血液生化指標(biāo)和腸道微生物進(jìn)行分析和測(cè)定，探討復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬生產(chǎn)性能的影響及其作用機(jī)制，以期為復(fù)方中藥發(fā)酵飼料在母豬生產(chǎn)上的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料（茶酵肽）的主要中藥成分包括黃芪、黃芩、金銀花、連翹、桔梗、紫花地、板藍(lán)根、魚腥草、甘草、陳皮、女貞子。將中藥粉碎后加入豆粕、葡萄糖、茶粉、蛋白粉，經(jīng)乳酸菌發(fā)酵而成。復(fù)方中藥發(fā)酵飼料的主要成分如表1 所示。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取20 頭2 胎齡經(jīng)產(chǎn)母豬（安徽祥泰農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司），隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10 頭。對(duì)照組母豬飼喂基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)組母豬飼喂含20% 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料的混合飼料。復(fù)方中藥發(fā)酵飼料在使用時(shí)是將常規(guī)基礎(chǔ)飼料和復(fù)方中藥發(fā)酵飼料按比例充分混合后使用，復(fù)方中藥發(fā)酵飼料的添加比例為混合飼料總量的20%。2 組母豬的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致。基礎(chǔ)飼料的營(yíng)養(yǎng)成分如表2 所示。

表2 基礎(chǔ)飼料主要營(yíng)養(yǎng)成分 %

1.3 母豬繁殖性能分析 試驗(yàn)期從母豬妊娠第30 天開始至分娩后第30 天結(jié)束，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)組和對(duì)照組母豬的平均產(chǎn)活仔數(shù)、平均弱仔率和仔豬腹瀉率。平均活仔數(shù)=總活仔數(shù)/窩數(shù)；平均弱仔率=總?cè)踝袛?shù)/總活仔數(shù)；仔豬腹瀉率=腹瀉仔豬數(shù)/總活仔數(shù)。

1.4 血清生化指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)期30 d，分別在試驗(yàn)的第0、15、30 天通過前腔靜脈采集兩組母豬血液。血液經(jīng)2 000 r/min 離心5 min，分離出血清、保存。所有血清樣品中的總超氧化物歧化酶（T-SOD）、還原型谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙二醛（MDA）含量測(cè)定和結(jié)果計(jì)算均參考各自檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究院）的說明書執(zhí)行。

1.5 腸道微生物菌群測(cè)定 在試驗(yàn)第15 天，收集2 組母豬新鮮糞便樣品，每組8 份，共計(jì)16 份，每份樣品約150 mg，放入無菌EP 管中，密封，立即投入干冰中保存、運(yùn)輸，后置于-80℃冰箱進(jìn)行保存。采用 DNA抽提試劑盒（Omega Bio-tek，Norcross，GA，U.S.）對(duì)樣本的基因組 DNA 進(jìn)行提取，之后利用瓊脂糖凝膠電泳和NanoDrop2000 檢測(cè) DNA 的完整性和濃度[10]。在Illumina MiSeq 平臺(tái)上，以基因組 DNA 為模板，針對(duì)區(qū)域16S V3-V4 區(qū)（引物 343F 和 798R）進(jìn)行擴(kuò)增，使用帶 barcode 的特異引物，TaKaRa 公司的 Tks Gflex DNA Polymerase 進(jìn)行PCR，確保擴(kuò)增效率和準(zhǔn)確性。PCR 產(chǎn)物使用電泳檢測(cè)，檢測(cè)后使用磁珠純化，純化后作為二輪 PCR 模板，并進(jìn)行二輪 PCR 擴(kuò)增，并再次使用電泳檢測(cè)，檢測(cè)后使用磁珠純化，純化后對(duì) PCR產(chǎn)物進(jìn)行 Qubit 定量。根據(jù) PCR 產(chǎn)物濃度進(jìn)行等量混樣后上機(jī)進(jìn)行Illumina 高通量測(cè)序。通過barcode 分揀數(shù)據(jù)并且將PE reads 拼接成Tag[11]。測(cè)序工作在上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司進(jìn)行。原始數(shù)據(jù)為 FASTQ 格式。使用 Trimmomatic 軟件對(duì)原始雙端序列進(jìn)行去雜。去雜后的雙端序列利用 FLASH 軟件進(jìn)行拼接并去除上、下游引物。同時(shí)，利用 UCHIME 檢測(cè)并去除序列中的嵌合體序列。測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理生成優(yōu)質(zhì)序列之后，采用 Vsearch 軟件，根據(jù)序列的相似性，對(duì)所有樣品的Effective tags 進(jìn)行聚類，以97%的一致性將序列聚類成為OTUs（Operational Taxonomic Units）?；谏鲜? 個(gè)軟件計(jì)算樣品的α多樣性及稀釋曲線，涉及到的指數(shù)有Shannon、Chao、Simpson、PD whole tree等。通過Unifrac 距離矩陣進(jìn)行β多樣性分析，并分別繪制加權(quán)與非加權(quán)的主坐標(biāo)分析圖（PCoA）。物種比對(duì)注釋使用 Blast[12]軟件，在分類學(xué)各水平上（門、綱、目、科、屬）進(jìn)行物種注釋，并繪制相應(yīng)的柱狀圖。在Qiime 中利用對(duì)各組的核心菌群進(jìn)行篩選，并繪制相應(yīng)的柱狀圖。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2007 進(jìn)行初步整理，利用 SPSS 16.0 軟件進(jìn)行以上統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同組之間的顯著性差異通過進(jìn)行 One-Way ANOVA 進(jìn)行判斷（t檢驗(yàn)），試驗(yàn)結(jié)果均用平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＞0.05表示差異不顯著，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。各指標(biāo)間的相關(guān)性采用SPSS 16.0 軟件中的相關(guān)系數(shù)矩陣Pearson 方法進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬繁殖性能的影響 如表3所示，使用復(fù)方中藥發(fā)酵飼料母豬的平均窩產(chǎn)活仔數(shù)由原來的9.90 頭升高到10.50 頭，試驗(yàn)組平均窩產(chǎn)弱仔率較對(duì)照組降低2.74%；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組仔豬平均腹瀉率降低（P＜0.05）。結(jié)果表明，飼喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料可提高母豬的均窩產(chǎn)活仔數(shù)，降低平均窩產(chǎn)弱仔率和仔豬腹瀉率。

表3 母豬飼喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬生產(chǎn)性能的影響（n=10）

2.2 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬血液生化指標(biāo)的影響 如表4 和表5 所示，試驗(yàn)組血清T-SOD 水平在使用復(fù)方中藥發(fā)酵飼料后逐漸升高（P＜0.05）；試驗(yàn)組血清T-SOD水平在第15 天和30 天極顯著高于對(duì)照組。試驗(yàn)組血清GSH-Px 水平與T-SOD 變化一致，并且試驗(yàn)組血清GSH-Px 水平在第15 天和30 天極顯著高于對(duì)照組。試驗(yàn)組CAT 水平在第15 天和30 天呈逐漸升高的趨勢(shì)（P＜0.05）；在第15 天和30 天試驗(yàn)組血清CAT 水平極顯著高于對(duì)照組。在試驗(yàn)第15 天和30 天，試驗(yàn)組血清MDA、ALT/GPT 和AST/GOT 水平均顯著或極顯著低于對(duì)照組。生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明，飼喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料可顯著升高母豬的血清抗氧化水平，降低機(jī)體應(yīng)激損傷。

表4 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬血清抗氧化指標(biāo)的影響（n=10）

表5 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬血清應(yīng)激損傷指標(biāo)的影響（n=10）

2.3 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬腸道微生物多樣性的影響對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組16 頭母豬的糞便微生物所提取的總DNA 進(jìn)行16 S rDNA 的V3～V4 區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，結(jié)果16 個(gè)樣品獲得clean tags 數(shù)量在89 960～93 642，平均長(zhǎng)度為410.37～414.42，樣品OUT 數(shù)量為2 972～3 686（圖1）。所有樣品中微生物包括24 個(gè)門、45 個(gè)綱、111 個(gè)目、179 個(gè)科和391 個(gè)屬。糞便樣品微生物Alpha 多樣性是對(duì)單個(gè)樣品中物種多樣性的分析，包括Chao指數(shù)、PD whole tree指數(shù)，Shannon 指數(shù) 和Simpson 指數(shù)等，結(jié)果如表6 所示，與對(duì)照組相比，復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬糞便微生物的 OUT 數(shù)、chao指數(shù)、PD whole tree 指數(shù)和Shannon 指數(shù)均有升高，Simpson 指數(shù)略有降低（P＞0.05）。糞便樣品Beta 多樣性分析結(jié)果表明，對(duì)照組和試驗(yàn)組表現(xiàn)出了較明顯的組內(nèi)聚集，樣品根據(jù)所處組別相互聚集到一起，說明飼喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬腸道微生物菌群有明顯影響。PCoA 聚類分析顯示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組樣品聚集的范圍更小，說明試驗(yàn)組的組內(nèi)微生物結(jié)構(gòu)與組成的相似性更高，結(jié)果提示，喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料可以在一定程度上增加母豬腸道微生物的穩(wěn)定性。以上結(jié)果表明，喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料可以提高母豬腸道微生物菌群的多樣性和穩(wěn)定性。

表6 Alpha 多樣性指數(shù)比較統(tǒng)計(jì)結(jié)果（n=8）

圖1 母豬糞便樣品微生物菌群OUT 數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.4 復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬腸道微生物菌群組成和結(jié)構(gòu)的影響 圖2 結(jié)果顯示，在門水平上，厚壁菌門（Firmicutes）和擬桿菌門（Bacteroidetes）相對(duì)豐度較高，其次是螺旋菌門（Spirochaetes）、纖維桿菌門（Fibrobacteres）和變形桿菌門（Proteobacteria），其中厚壁菌門母豬的糞便樣品微生物菌群中占比最高，其和擬桿菌門的占比超過80%，為母豬的糞便樣品的優(yōu)勢(shì)菌群門類。

圖2 母豬糞便樣品微生物門水平的相對(duì)豐度

母豬糞樣品屬水平微生物菌群組成如圖3 所示，屬水平微生物相對(duì)豐度超過1% 的共有17 個(gè)菌屬，其中1 個(gè)屬于螺旋體菌門、9 個(gè)屬于厚壁菌門、7 個(gè)屬于擬桿菌門；其中相對(duì)豐度最高的是瘤胃菌科屬（Ruminococcaceae）菌群。復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬腸道微生物菌群相對(duì)豐度的影響如表7 所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的厚壁菌門和纖維桿菌門的相對(duì)豐度升高，擬桿菌門、螺旋體菌門、變形桿菌門和脫鐵菌門的豐度降低，其中厚壁菌門顯著高于對(duì)照組，螺旋體菌門、變形桿菌門和脫鐵菌門顯著低于對(duì)照組。

圖3 母豬糞便樣品微生物屬水平的相對(duì)豐度

母豬糞便樣品主要差異菌群屬水平相對(duì)豐度比較結(jié)果如圖4 所示，與對(duì)照組相比，飼喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料可顯著提高糞便樣品中克里斯滕森氏菌屬R-7 群（Christensenellaceae R-7 group）、乳桿菌屬（Lactobacillus）、瘤胃菌科UCG-002（Ruminococcaceae_UCG-002）、擬桿菌屬（Bacteroides）、毛螺菌科NK4A136 群（Lachnos piraceae NK4A136 group）和Candidatus Soleaferre 的相對(duì)豐度，顯著降低密螺旋體屬2（Treponema 2）、鏈球菌屬（Streptococcus）、副擬桿菌屬（Parabacteroide）和大腸桿菌-志賀氏菌屬（Escherichia -Shigella）的豐度。結(jié)果表明，復(fù)方中藥發(fā)酵飼料對(duì)母豬腸道微生物菌群組成和結(jié)構(gòu)具有顯著影響。

圖4 母豬糞便樣品主要差異菌群屬水平相對(duì)豐度比較

2.5 母豬繁殖性能、血清生化指標(biāo)和糞便微生物菌群豐度之間的相關(guān)性分析 采用相關(guān)系數(shù)矩陣Pearson 方法評(píng)價(jià)飼喂發(fā)酵中藥飼料對(duì)母豬繁殖性能、血清生化指標(biāo)（第15 天）和糞便微生物菌群門水平豐度的影響及其指標(biāo)之間變化的相關(guān)性，結(jié)果如表8 所示，平均窩產(chǎn)活仔數(shù)與血清抗氧化指標(biāo)（T-SOD、GSH-Px 和CAT）存在一定水平的正相關(guān)，但均未達(dá)到顯著性水平，而與應(yīng)激損傷指標(biāo)（ALT、AST 和MDA）之間存在不同程度的負(fù)相關(guān)，其中與ALT 之間為顯著負(fù)相關(guān)，平均窩產(chǎn)活仔數(shù)與糞便微生物菌群門水平豐度之間沒有顯著的相關(guān)；窩產(chǎn)弱仔率與應(yīng)激損傷指標(biāo)之間存在不同程度正相關(guān)，其中與ALT 之間為顯著正相關(guān)；仔豬腹瀉率與GSH-Px 和CAT存在顯著負(fù)相關(guān)，與MDA 和AST 之間存在顯著正相關(guān)，仔豬腹瀉率與螺旋菌門和脫鐵桿菌門之間存在顯著正相關(guān)；血清抗氧化指標(biāo)（T-SOD、GSH-Px 和CAT）之間存在顯著正相關(guān)，而與MDA 和AST 之間存在顯著負(fù)相關(guān)，血清抗氧化指標(biāo)與厚壁菌門的豐度存在顯著正相關(guān)，與螺旋菌門、變形桿菌門和脫鐵桿菌門豐度之間存在顯著負(fù)相關(guān)；血清MDA 和AST 水平與螺旋菌門、變形桿菌門和脫鐵桿菌門豐度之間存在顯著正相關(guān)，血清AST水平與厚壁菌門的豐度存在顯著負(fù)相關(guān)。相關(guān)性分析結(jié)果表明，飼喂發(fā)酵中藥飼料對(duì)母豬繁殖性能、血清生化指標(biāo)和糞便微生物菌群的影響存在廣泛的相關(guān)性。

表8 母豬繁殖性能、血清指標(biāo)和糞便微生物菌群門水平豐度之間的相關(guān)性分析（n=8）

3 討 論

益生菌發(fā)酵中藥可有效改善傳統(tǒng)中藥炮制加工繁瑣、中藥的利用率低和適口性差等問題[13]。本試驗(yàn)所用的復(fù)方發(fā)酵中藥飼料包括十幾種中藥成分，并加入豆粕、葡萄糖、茶粉和蛋白粉通過乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵制成。益生菌在生長(zhǎng)代謝過程中，可破壞植物的細(xì)胞壁，使中藥的有效成分進(jìn)一步釋放[14]。本研究復(fù)方發(fā)酵中藥飼料中的粗蛋白質(zhì)含量較常規(guī)飼料更高，中藥植物成分的存在使其粗纖維含量也較高。李瑜[15]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)酵母菌和乳酸菌共同發(fā)酵后的中藥發(fā)酵液中多酚、多糖、黃酮和蛋白質(zhì)含量明顯升高。

近年來，國內(nèi)一些研究人員也關(guān)注到發(fā)酵中藥作為添加劑對(duì)畜禽生產(chǎn)和健康的影響。方磊涵等[16]研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵中藥制劑可改善育肥豬肉品質(zhì)，增強(qiáng)蛋白質(zhì)代謝，降低血清總膽固醇含量，提高豬的免疫力。研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵中藥復(fù)方可顯著提高仔豬的生長(zhǎng)性能，降低仔豬腹瀉率，并且其效果優(yōu)于未發(fā)酵中藥復(fù)方和抗生素[17]。吳道義等[18]研究結(jié)果顯示，益生菌發(fā)酵中藥能降低斷奶仔豬的耗料增重比和腹瀉率。王坤麗[19]研究發(fā)現(xiàn)使用2 種乳酸菌對(duì)清瘟敗毒散提取液進(jìn)行發(fā)酵并飼喂斷奶仔豬可顯著提高日增重，顯著降低耗料增重比，同時(shí)降低了斷奶仔豬的腹瀉率。喬宏興等[20]研究顯示，發(fā)酵黃芪物可顯著提高斷奶仔豬的平均采食量，降低耗料增重比，對(duì)斷奶仔豬有明顯的促生長(zhǎng)作用。本研究結(jié)果顯示，飼喂復(fù)方發(fā)酵中藥飼料可使母豬的平均窩產(chǎn)活仔豬數(shù)提高0.6 頭，窩產(chǎn)弱仔數(shù)降低3.37%，仔豬腹瀉率下降7.39%，但因?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物規(guī)模小，平均窩產(chǎn)活仔豬數(shù)和窩產(chǎn)弱仔數(shù)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)不顯著，有待于擴(kuò)大試驗(yàn)群體再做進(jìn)一步評(píng)價(jià)。研究發(fā)現(xiàn)，影響母豬繁殖性能的因素包括胎次、地域、品種特性和飼養(yǎng)管理等[21]。本研究中的試驗(yàn)?zāi)肛i總體的繁殖性能成績(jī)不高，而通過飼喂復(fù)方發(fā)酵中藥飼料可以有效提高母豬的繁殖性能，說明飼料營(yíng)養(yǎng)和母豬管理可能是影響該母豬群繁殖性能的主要原因。復(fù)方發(fā)酵中藥飼料在提高母豬繁殖性能方面具有積極作用。

血清抗氧化和應(yīng)激損傷指標(biāo)可以客觀反映機(jī)體的健康狀態(tài)[22]。飼喂中藥制劑可以影響畜禽血清生化指標(biāo)。朱買勛等[5]研究表明，飼喂中藥可以顯著升雛雞高血清總蛋白和球蛋白含量，顯著降低AST 含量。在肉雞生產(chǎn)上，發(fā)酵中藥可以降低熱應(yīng)激對(duì)肉雞產(chǎn)生的負(fù)面影響，提高熱應(yīng)激肉雞的生長(zhǎng)性能、免疫和抗氧化功能[23]；在蛋雞上應(yīng)用發(fā)酵中藥能提高其生產(chǎn)性能及抗氧化水平，并能改善蛋雞腸道結(jié)構(gòu)形態(tài)[24]。方磊涵等[17]研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方發(fā)酵劑可使斷奶仔豬血清總抗氧化能力（T-AOC）顯著提高，MDA 含量顯著降低。李琳倩等[25]研究表明，與對(duì)照組相比，中草藥添加劑顯著提高了后備母豬血清中葡萄糖、賴氨酸、蛋氨酸和甘氨酸含量。本研究結(jié)果顯示，飼喂復(fù)方發(fā)酵中藥飼料的母豬血清中抗氧化指標(biāo)T-SOD、GSH-Px 和CAT 含量顯著升高，血清中應(yīng)激損傷指標(biāo)ALT、AST、MDA 顯著降低，表明飼喂復(fù)方發(fā)酵中藥飼料可顯著提高母豬的抗氧化能力，降低應(yīng)激損傷水平。

腸道微生物菌群從功能上可以分為共生、益生和病原微生物三大類，其中最主要的是細(xì)菌，還包括真菌、病毒和噬菌體，它們?cè)谀c道中保持著一種動(dòng)態(tài)平衡[26]。腸道微生物發(fā)揮多種重要功能，包括物質(zhì)代謝、生物屏障、免疫調(diào)控及宿主防御等[27]。因此，腸道微生物和機(jī)體存在著互利共生的關(guān)系，對(duì)于維持機(jī)體健康發(fā)揮著重要作用。中藥作為潛在抗生素替代品在調(diào)節(jié)腸道微生物菌群方面具有顯著作用。邵志勇等[28]研究發(fā)現(xiàn)在蛋雞飼料中添加中藥可以顯著提高腸球菌屬、芽孢桿菌屬和梭菌屬的豐度，擬桿菌屬微生物豐度明顯降低。發(fā)酵中藥制劑所用的發(fā)酵菌種都是益生菌，益生菌在腸道內(nèi)生長(zhǎng)定植可競(jìng)爭(zhēng)性地排斥致病菌，更有利于平衡胃腸道菌群[9,13]。研究發(fā)現(xiàn)，飼喂中藥復(fù)方發(fā)酵飼料可顯著提高斷奶仔豬腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量，降低大腸桿菌數(shù)量[17]。本研究結(jié)果顯示，飼喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料可以在一定程度上增加母豬腸道微生物菌群的多樣性和穩(wěn)定性，并且可顯著提高母豬糞便樣品中厚壁菌門的豐度，降低螺旋體菌門、變形桿菌門和脫鐵菌門的豐度；在屬水平，試驗(yàn)組母豬糞便樣品中克里斯滕森氏菌屬R-7 群、乳桿菌屬、瘤胃菌科UCG-002 和擬桿菌屬等有益菌群的豐度顯著升高，鏈球菌屬、副擬桿菌屬和大腸桿菌-志賀氏菌屬的豐度顯著降低。

本試驗(yàn)?zāi)c道微生物菌群門水平豐度與母豬繁殖性能和血清生化指標(biāo)的相關(guān)性分析中，腸道菌群中螺旋菌門和脫鐵桿菌門的豐度與仔豬腹瀉率之間存在直接顯著正相關(guān)；而微生物菌群門水平豐度的變化與母豬血清生化指標(biāo)之間存在廣泛相關(guān)性，如厚壁菌門與血清抗氧化指標(biāo)顯著正相關(guān)，螺旋菌門、變形桿菌門和脫鐵桿菌門與其存在顯著負(fù)相關(guān)。Mardinoglu 等[29]研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生物可以調(diào)節(jié)宿主機(jī)體的谷胱甘肽和氨基酸的代謝，谷胱甘肽在機(jī)體免疫、營(yíng)養(yǎng)物代謝等方面具有重要的調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果與Mardinoglu 等[29]的研究結(jié)果一致，血清GSH-Px 水平與厚壁菌門顯著正相關(guān)，而與螺旋菌門、變形桿菌門和脫鐵桿菌門與其存在顯著負(fù)相關(guān)，說明腸道微生物菌群變化可以顯著影響血清的抗氧化水平。對(duì)母豬血清生化指標(biāo)與母豬繁殖性能之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩者之間存在較為緊密的相關(guān)性，其中ALT與平均窩產(chǎn)活仔數(shù)顯著負(fù)相關(guān)，與平均弱仔率顯著正相關(guān)，GSH-Px 和CAT 與仔豬腹瀉率顯著負(fù)相關(guān)，MDA和AST 則與仔豬腹瀉率顯著正相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，妊娠后期和泌乳期的母豬，尤其是初產(chǎn)母豬，代謝非常旺盛，這導(dǎo)致母豬在圍產(chǎn)期可能會(huì)產(chǎn)生氧化應(yīng)激，造成母豬產(chǎn)仔性能下降、泌乳力降低和仔豬成活率下降[30]。母豬血液中MDA、GSH-Px 和T-AOC 變化反映了母豬所處的氧化應(yīng)激狀態(tài)[31]，而微生物源性抗氧化劑[32]和復(fù)合有機(jī)鐵[33]等外源抗氧化物質(zhì)可有效提高母豬的機(jī)體抗氧化能力和繁殖性能。以上研究均表明，母豬的機(jī)體抗氧化水平與母豬的繁殖性能具有顯著相關(guān)性。本研究中飼喂的復(fù)方中藥發(fā)酵飼料具有豐富益生菌、中藥活性成分和高纖維素[34]的特性，其可能通過多種途徑對(duì)母豬繁殖性能進(jìn)行調(diào)節(jié)，但通過調(diào)節(jié)腸道微生物菌群和提高機(jī)體抗氧化能力可能是其提高母豬繁殖性能的重要途徑式之一。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼喂復(fù)方中藥發(fā)酵飼料可顯著提高母豬的繁殖性能，顯著提高母豬機(jī)體抗氧化水平，降低機(jī)體應(yīng)激損傷，并可顯著提高母豬腸道有益微生物菌群的豐度。