發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋性能、抗氧化能力和雌二醇的影響

曾佳佳，陳 靜，陳 振，王麗榮，黨士坤，徐海燕，谷 巍，曹 斌

（山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司，山東省動(dòng)物微生態(tài)制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安 271000）

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告1773 號(hào)文件公布了115種可飼用天然植物可作為飼料原料?？娠曈锰烊恢参餅樗庯曂吹娘暳显希踩暂^高[1]。已有研究表明，可飼用天然植物具有緩解蛋雞免疫抑制和應(yīng)激，控制生殖系統(tǒng)炎癥和增強(qiáng)非特異性免疫功能[2-4]。將可飼用天然植物用益生菌發(fā)酵后可發(fā)揮兩者的協(xié)同作用，發(fā)酵后能促進(jìn)植物有效成分溶出，將大分子成分轉(zhuǎn)化為易直接吸收的小分子，可提高效果甚至產(chǎn)生新的功效。同時(shí)，中藥能促進(jìn)益生菌增殖，益生菌在動(dòng)物體內(nèi)可發(fā)揮改善腸道健康、提高生產(chǎn)性能等作用[5-6]。產(chǎn)蛋后期的蛋雞會(huì)隨著自身素質(zhì)的下降、機(jī)能老化、產(chǎn)蛋次數(shù)和年齡的增大，或者感染疾病等原因，導(dǎo)致產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)下降[7]。本研究針對(duì)產(chǎn)蛋后期的蛋雞輸卵管功能下降或損傷、分泌生殖激素功能衰減等問(wèn)題，選取具有清熱解毒、燥濕涼血、消淤散積、補(bǔ)血活血等功能的天然植物經(jīng)植物乳酸菌發(fā)酵，探索其對(duì)產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、抗氧化性能和內(nèi)分泌的影響，為發(fā)酵可飼用天然植物的應(yīng)用提供參考依據(jù)，為提高產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋性能提供一種解決思路。

1 材料與方法

1.1 材料 可飼用天然植物（黃芪、益母草、魚(yú)腥草、川芎、甘草、蒲公英、當(dāng)歸等）均購(gòu)自泰安市永春堂永興藥店，檢驗(yàn)合格。植物乳桿菌為山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司菌種保藏中心保存并應(yīng)用于生產(chǎn)的菌株，活菌數(shù)≥3×109CFU/g。

1.2 植物乳桿菌發(fā)酵可飼用天然植物的方法

1.2.1 制備可飼用天然植物水提液 復(fù)方I：黃芪、益母草、魚(yú)腥草、川芎、甘草等（益氣活血，通絡(luò)化瘀，利水）；復(fù)方II：黃芪、益母草、當(dāng)歸、魚(yú)腥草、蒲公英等（活血化瘀，清熱解毒）。水提方法：天然植物提前加入8～10 倍水浸泡2 h，用大火煮沸后文火水提30 min，過(guò)濾得到第1 次水提液。再加入水水提30 min，過(guò)濾得到第2 次水提液，2 次水提液合并后濃縮至所需濃度。

1.2.2 植物乳桿菌發(fā)酵可飼用天然植物 在MRS 液體培養(yǎng)基中添加中藥水提液，使中藥濃度為0.2 g/mL，按接菌量2%接入植物乳桿菌，在最適條件下發(fā)酵12～16 h得到植物乳桿菌發(fā)酵可飼用天然植物。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取180 只健康、體重基本一致、產(chǎn)蛋高峰后期的498 日齡海蘭褐蛋雞（山東寶來(lái)利來(lái)巴夫巴夫農(nóng)業(yè)科技有限公司），采用單因子分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分成3 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20 只雞。所有組均飼喂基礎(chǔ)日糧。采取集中飲水的方式，對(duì)照組正常飲水，試驗(yàn)組分別在飲水中加入3.33 mL/（d·只）乳酸菌發(fā)酵可飼用天然植物復(fù)方I、復(fù)方II。第1 次連續(xù)用藥為505～509 日齡，第2 次連續(xù)用藥為525～529 日齡。預(yù)試期7 d，正試期27 d。預(yù)試期時(shí)，所有處理組均飼喂基礎(chǔ)日糧，正常飲水，記錄各平行組的產(chǎn)蛋數(shù)，并根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，使對(duì)照組和試驗(yàn)組產(chǎn)蛋率差異不顯著。

1.4 試驗(yàn)日糧與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1（參考NRC2000）。試驗(yàn)期間，海蘭褐蛋雞在全封閉雞舍中籠養(yǎng)，雞籠為4 階梯式金屬籠，機(jī)械縱向通風(fēng)，高溫時(shí)開(kāi)窗和灑水降溫。光照時(shí)間16 h/d，舍內(nèi)溫度控制在19～23℃，相對(duì)濕度為40%～60%。所有的雞均為人工飼喂，每天08:00、11:00、14:00、17:00 各喂料1 次，每天15:00 撿蛋。記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 產(chǎn)蛋性能 試驗(yàn)期每次用藥第2 天開(kāi)始每天15:00左右定時(shí)撿蛋，以重復(fù)為單位每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、不良蛋殼數(shù)（黑點(diǎn)、沙殼、白點(diǎn)、破殼、軟殼、畸形），分別統(tǒng)計(jì)6 d（506～511、526～531 日齡）。計(jì)算蛋雞每天的平均蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)以及6 d 的不良蛋殼的雞蛋總數(shù)。

1.5.2 蛋品質(zhì) 于蛋雞511 日齡和531 日齡時(shí)，每組隨機(jī)抽取15 枚（每個(gè)重復(fù)5 枚）雞蛋用以色列ORKA 多功能蛋品質(zhì)分析儀（型號(hào)EA1351，北京天翔飛域儀器設(shè)備有限公司）測(cè)定雞蛋的蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位、蛋黃比重。蛋黃比重=蛋黃重/總蛋重

1.5.3 總抗氧化能力、丙二醛和雌二醇 于蛋雞511 日齡和531 日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)分別選擇接近平均體重的蛋雞2 只，翅下靜脈采血，37℃恒溫培養(yǎng)箱中平放1 h左右，離心分離血清，分裝成2 份于1.5 mL 離心管中，-20℃保存。用總抗氧化能力測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）、丙二醛測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）和雞雌二醇ELISA 檢測(cè)試劑盒（上海勁馬試驗(yàn)設(shè)備有限公司）測(cè)定血清中的總抗氧化能力、丙二醛和雌二醇。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 使用Excel 2007 軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件（One-Way ANOVA）進(jìn)行顯著性分析，并采用LSD 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 由表2 可知，在506～511 日齡和526～531 日齡，與對(duì)照組相比，復(fù)方I 組、II 組產(chǎn)蛋率有所提高（P＞0.05），復(fù)方I 組平均蛋重略有降低（P＞0.05），復(fù)方II 組平均蛋重有所提高（P＞0.05）。526～531 日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，復(fù)方I 組、復(fù)方II 組平均蛋重皆有提高（P＞0.05）。

表2 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率和平均蛋重的影響

2.2 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋品質(zhì)的影響 由表3 可以看出，511 日齡時(shí)，復(fù)方I 組的蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位均高于對(duì)照組（P＞0.05）。531 日齡時(shí)，復(fù)方I 組和復(fù)方II 組的蛋黃比重、蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位也高于對(duì)照組（P＞0.05）。

表3 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)不良蛋殼雞蛋數(shù)量的影響

2.3 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)雞蛋不良蛋殼的影響 從表4 中可以看出，506～511 日齡時(shí)，對(duì)照組、復(fù)方I 組和復(fù)方II 組的不良蛋殼的雞蛋總數(shù)差別不大。526～531 日齡時(shí)，復(fù)方I 組比對(duì)照組少28 枚，復(fù)方II 組比對(duì)照組少23 枚。使用發(fā)酵可飼用天然植物后不良蛋殼情況有所改善。

表4 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)不良蛋殼雞蛋數(shù)量的影響（6 d 的總量） 枚

2.4 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞抗氧化能力的影響 總抗氧化能力越高代表機(jī)體的抗氧化能力越強(qiáng)。從表5 中看出，511、531 日齡時(shí)，復(fù)方I 組抗氧化能力較對(duì)照組分別提高36.15%、31.89%（P＜0.05），復(fù)方II 組有所提高（P＞0.05）。511、531 日齡時(shí)，復(fù)方I 組的丙二醛較對(duì)照組分別降低7.61%、16.17%（P＜0.05）；復(fù)方II組也有所降低（P＞0.05）。

表5 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)血清中的總抗氧化能力和丙二醛含量的影響

2.5 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞血清中雌二醇含量的影響 從表6 中可以看出，511 日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，復(fù)方I 組血清中雌二醇含量降低（P＞0.05），復(fù)方II 組升高（P＞0.05）。531 日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，復(fù)方I組血清中雌二醇含量提高24.73%（P＞0.05），復(fù)方II組提高60.71%（P＜0.05）。

表6 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞血清中雌二醇含量的影響 pg/mL

3 討 論

3.1 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 蛋雞在產(chǎn)蛋后期身體機(jī)能下降、激素分泌不足、輸卵管炎癥等原因都會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)蛋性能降低。益母草具有活血化瘀的功效，可以調(diào)節(jié)激素分泌。黃芪具有提高免疫的功能[8]。當(dāng)歸常用于血虛萎黃、風(fēng)濕痹痛、癰疽瘡瘍等，發(fā)揮抗炎、抗氧化的作用[9]。蒲公英有清熱解毒、消癰散癤、退黃、通淋利尿等功效[10]。本研究的復(fù)合配方采用黃芪、益母草、當(dāng)歸、蒲公英等可飼用天然植物，可發(fā)揮清熱利濕、補(bǔ)血活血、散瘀解毒的作用，有助于提高抵抗力和緩解修復(fù)輸卵管炎癥，進(jìn)而提高產(chǎn)蛋性能。已有研究表明，發(fā)酵可飼用天然植物可發(fā)揮益生菌和中藥的協(xié)同作用，提高畜禽的免疫力和生長(zhǎng)性能等[11]。郭春生等[12]利用可飼用天然植物黃芪、當(dāng)歸等具有補(bǔ)中益氣、健脾生津、補(bǔ)血活血、斂陰養(yǎng)血、升陽(yáng)舉陷的作用，能夠顯著提高蛋重，增加經(jīng)濟(jì)效益，并且能在外界環(huán)境變化引發(fā)的應(yīng)激下快速恢復(fù)產(chǎn)蛋性能。本研究結(jié)果表明，2 個(gè)復(fù)方發(fā)酵中藥對(duì)提高產(chǎn)蛋率、蛋重有幫助，但效果不顯著，可降低不良蛋殼的雞蛋數(shù)量?？赡苁沁x取的這些植物中包含生物堿、黃酮、皂苷等成分，經(jīng)益生菌發(fā)酵后活性成分變得更易吸收，因此改善了蛋雞的生產(chǎn)性能[13]。

3.2 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)雞蛋蛋品質(zhì)的影響 蛋黃比重、蛋黃顏色、蛋白高度和哈氏單位等影響雞蛋的新鮮度，是衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)。賈紅杰等[14]用山黃粉和黃芪多糖配伍使用對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)無(wú)顯著影響，但增強(qiáng)了抗氧化能力，與本研究結(jié)果相似?？赡苁堑鞍追置谕?，鈣和磷吸收率高，受添加的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)物質(zhì)的影響小。孫曉蛟[15]研究表明，在綠殼蛋雞日糧中添加益母草粉能顯著提高蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色、哈夫單位，添加1.0%益母草還能顯著提高蛋形指數(shù)、降低蛋黃總膽固醇含量，益母草對(duì)蛋殼厚度、蛋殼相對(duì)重、蛋黃相對(duì)重、蛋黃粗脂肪無(wú)顯著影響。可能益母草改善了卵巢微循環(huán)，疏通了輸卵管的內(nèi)淤血，修復(fù)了機(jī)體，提高了免疫力。閆民朝[16]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加經(jīng)微生物發(fā)酵的黃芪、當(dāng)歸、甘草等可顯著提高哈氏單位和蛋殼相對(duì)重。Anas等[17]研究表明，在基礎(chǔ)日糧中添加益生菌有助于提高產(chǎn)蛋率、雞蛋重量、蛋殼及蛋白質(zhì)量，降低蛋黃膽固醇含量。本研究采用植物乳酸菌發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋黃比重、蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位有改善，但不顯著。原因可能是蛋品質(zhì)受蛋白、鈣和磷的影響較大，而本研究中添加的飼用植物對(duì)蛋白、鈣和磷的影響較小。

3.3 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞抗氧化能力的影響 產(chǎn)蛋后期蛋雞體內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，自由基的清除依靠機(jī)體的抗氧化能力。丙二醛是脂質(zhì)氧化的最終產(chǎn)物，會(huì)抑制細(xì)胞活性，加劇細(xì)胞膜的損傷，致使機(jī)體衰老。川芎提取物具有抗氧化活性和抑菌活性[18]。甘草[19]和益母草[20]也具有抗氧化活性。黃芪主要有效成分包括黃芪多糖、皂苷、黃酮等，以及微量元素和氨基酸，具有抗氧化、抗應(yīng)激、提高免疫力等功效[21-22]。吳爽等[23]研究發(fā)現(xiàn)，酵母發(fā)酵黃芪發(fā)酵能顯著降低大鼠衰老模型中丙二醛等的生成，原因可能是黃芪具有抗自由基的作用，改善細(xì)胞能量代謝，能夠提高超氧化物歧化酶活性，進(jìn)而抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，使丙二醛含量降低。本研究發(fā)酵復(fù)方I 組中包含黃芪、益母草、魚(yú)腥草、川芎、甘草，飲用后顯著提高了蛋雞的抗氧化能力，并顯著降低了丙二醛含量。

3.4 發(fā)酵可飼用天然植物對(duì)蛋雞對(duì)雌二醇的影響 卵巢產(chǎn)生的雌二醇的高低與蛋雞產(chǎn)蛋率緊密相關(guān)，卵黃前體物質(zhì)在肝臟的合成受雌二醇調(diào)控。卵泡的生長(zhǎng)和發(fā)育受促卵泡激素、雌二醇的調(diào)節(jié)，從而影響產(chǎn)蛋率。在蛋雞衰老的過(guò)程中，血清雌二醇的降低會(huì)導(dǎo)致卵黃合成能力降低[24-26]。雌二醇還會(huì)影響鈣的吸收進(jìn)而提高蛋殼的強(qiáng)度和厚度[27-28]。張倚劍等[29]認(rèn)為添加雌二醇會(huì)從多個(gè)角度調(diào)節(jié)鈣的代謝，如影響維生素D3的合成，提高鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)、子宮中降鈣素的表達(dá)、腸道和腎臟中的鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)。陳楊超等[30]使用益母草超微粉后蛋雞的雌二醇顯著提高，原因是益母草具有刺激垂體分泌激素的作用，促進(jìn)了雌二醇的分泌。張金漢等[31]研究發(fā)現(xiàn)，用含當(dāng)歸等補(bǔ)益肝腎的復(fù)方可提高蛋雞的雌二醇水平，并顯著提高產(chǎn)蛋率。本研究中，復(fù)方II 組通過(guò)添加益氣補(bǔ)虛、補(bǔ)血活血類(lèi)可飼用天然植物當(dāng)歸、益母草等，提高了雌二醇水平，可能原因是天然植物中含有雌激素樣類(lèi)作用的物質(zhì)，調(diào)節(jié)了卵巢衰老引起的體內(nèi)激素分泌不均和內(nèi)分泌紊亂。

4 結(jié) 論

本研究用植物乳桿菌發(fā)酵可飼用天然植物復(fù)方，采用集中飲水的方式供給，對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞的產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、抗氧化能力和雌二醇均有不同程度提高，說(shuō)明植物乳桿菌發(fā)酵可飼用天然植物能夠改善產(chǎn)蛋后期蛋雞的產(chǎn)蛋性能，提高機(jī)體的抗氧化能力和提升卵巢的功能。