預充式導管沖洗器中添加劑在氯化鈉注射液中的遷移研究*

李永貴，張錫霞，趙琦，胡瑞瑞，王晶，尹弢△，毋立華

(1.山東省藥學科學院 山東省化學藥物重點實驗室，濟南 250101；2.山東省榮軍總醫(yī)院，山東 濟南 250000；3.山東省食品藥品審評查驗中心，濟南 250014)

1 引 言

預充式導管沖洗器是一種新型封管液，內(nèi)充0.9%的氯化鈉注射液，臨床上可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的生理鹽水、肝素稀釋液等封管液使用，操作簡單、安全高效，在臨床上得到廣泛應用[1-2]。它由聚丙烯套筒、推桿、蓋帽及溴化丁基膠塞等組成。聚丙烯材料具有很好的滅菌適應性、透明度、藥物適應性以及較強的阻隔性能，已廣泛應用于藥品包裝。由于其在成型、儲存和使用過程中，會因熱、光、電場、射線、金屬離子或化學介質(zhì)等作用而老化，因此，生產(chǎn)過程中加入適量的添加劑(如抗氧劑、抗酸劑等)，以提高其穩(wěn)定性。常用的抗氧劑有抗氧劑1010( 四(3，5—二叔丁基—4—羥基)苯丙酸季戊四醇酯)、抗氧劑168(三(2，4—二叔丁基)亞磷酸苯酯)等，抗酸劑為水滑石(水合鋁酸碳酸鎂)。溴化丁基膠塞主要由陶土、鎂強粉、白炭黑及添加劑抗氧劑BHT(2，6—二叔丁基對甲酚)等經(jīng)過硫化處理制備而成[3-6]。

聚丙烯配件與溴化丁基膠塞均屬于與藥品直接接觸的材料，在接觸過程中，其添加劑均有遷移到藥品中的風險，從而導致藥品不良反應及臨床使用風險的增加。《化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術(shù)指導原則》中明確要求，需要對與藥品直接接觸的包裝材料中的添加劑進行控制。歐洲藥典也對聚丙烯材料中抗氧劑及水滑石用量作了要求，其中，抗氧劑用量不超過0.3%，水滑石用量不超過0.5%，相當于鋁元素不超過0.04%，鎂元素不超過0.12%。游離硫含量是評價溴化丁基膠塞配方與硫化程度的重要指標，《國家藥包材標準》“揮發(fā)性硫化物測定法”(YBB00302004-2015)及國內(nèi)外相關(guān)文獻也有檢測方法報道[7-10]。本研究在相關(guān)研究基礎上建立了HPLC法檢測預充式導管沖洗器中抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT和硫，以及ICP-MS法檢測鋁、鎂元素的遷移量。通過檢測加速試驗樣品中上述添加劑的遷移量，對預充式導管沖洗器安全性進行評估，為其臨床使用安全提供數(shù)據(jù)支持。

2 儀器及試藥

液相色譜儀(日本島津公司，配LC-20AT泵、SPD-M20A型PDA檢測器)；ICP-MS(PE公司NEXION2000)；電子天平(Sartorius BT125D)；超純水機(上海杲森儀器設備有限公司)；甲醇(色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司)；乙腈(色譜純，天津賽孚瑞科技有限公司)；四氫呋喃(色譜純，天津市光復科技發(fā)展有限公司)；硝酸(CMOS級,國藥集團)；固相萃取小柱(規(guī)格：60 mg/3 mL , Agela Technologies PEP-SPE )；預充式導管沖洗器(規(guī)格：10 mL)。

對照品：抗氧劑1010(純度：100%，AccuStandard，Lot：5692-01)；抗氧劑168(純度：100%，AccuStandard，Lot：5690-01)；抗氧劑BHT(純度：99.5%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，Lot：119389)；硫(純度：99.0%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，Lot：106536)；鋁單元素標準物質(zhì)(1 000 μg/mL，國家有色金屬及電子材料分析測試中心)；鎂元素標準物質(zhì)(1 000 μg/mL，國家有色金屬及電子材料分析測試中心)；Ge、In、Re、Sc多元素內(nèi)標溶液(100 μg/mL，國家有色金屬及電子材料分析測試中心)。

3 方法與結(jié)果

3.1 抗氧劑及硫檢測方法驗證[11-13]

3.1.1色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6 mm×150 mm，5 μm， Inertsil ODS -3)， 以甲醇為流動相，檢測波長為280 nm，柱溫35℃，流速1.0 mL/min，進樣體積20 μL，抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫分離度大于1.5。

3.1.2溶液制備 配樣溶劑：四氫呋喃：乙腈為50：50。

對照品儲備液：精密稱取抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫適量用乙腈溶解并稀釋成每1 mL中含有100.55 μg抗氧劑1010、100.05 μg抗氧劑168、 99.80 μg抗氧劑BHT及49.75 μg硫的混合溶液。

混合對照溶液：精密量取對照品儲備液2 mL置10 mL量瓶中，乙腈稀釋至刻度，搖勻。

供試品溶液：取預充式導管沖洗器中氯化鈉注射液10 mL，以2～3 mL/min速度通過固相萃取小柱，依次用5 mL甲醇、3 mL四氫呋喃洗脫，收集洗脫液用配樣溶劑稀釋至刻度，搖勻。

3.1.3專屬性實驗 分別取3.1.2項下配樣溶劑、混合對照品溶液、供試品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。結(jié)果表明，在該條件下，配樣溶劑對檢測無干擾，抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫分離度良好，見圖1。

圖1 對照品溶液HPLC圖譜

3.1.4定量限與檢測限 量取3.1.2項下對照品溶液，加乙腈稀釋成不同濃度梯度的溶液，分別取20 μL注入液相色譜儀，測得抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫定量限分別為10.06、20.01、3.99、4.97 ng(S/N≈10)，檢測限分別為3.02、6.00、1.20、1.49 ng(S/N≈3)。

3.1.5線性實驗 精密量取對照品儲備液20、50 μL及0.1、0.5、1、2、3、4 mL，分別置10 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液1—8。精密量取上述溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，以濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標做線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系測定結(jié)果

3.1.6精密度實驗 精密量取混合對照溶液20 μL，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖及峰面積，計算抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫峰面積的RSD分別為0.47%、0.54%、0.19%、1.02%。

3.1.7溶液穩(wěn)定性實驗 精密量取混合對照溶液分別于0、2、4、6、8、12、24 h進樣20 μL，記錄色譜圖及峰面積，計算抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫峰面積的RSD分別為1.10%、0.89%、1.06%、1.21%，表明對照品溶液室溫放置24 h穩(wěn)定。

3.1.8回收率實驗 精密量取0.9%NaCl注射液10 mL，共6份，分別加入對照品儲備液0.5 mL，混勻，均以2～3 mL/min的流速通過固相萃取柱，用5 mL甲醇及3 mL四氫呋喃依次洗脫，并收集洗脫液，用乙腈：四氫呋喃(50∶50)溶液稀釋至10 mL，搖勻。分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，按外標法計算抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT、硫的平均回收率及RSD，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

3.2 鋁、鎂檢測方法驗證[8-15]

3.2.1檢測條件 采用KED模式，射頻功率：1 600 W，等離子體氣流量：15 L/min，載氣流量：0.98 L/min，輔助氣流量：1.2 L/min，氦氣流量：4.5 L/min，采樣錐/截取錐：鎳錐，數(shù)據(jù)采集次數(shù)：3次。

3.2.2溶液制備 內(nèi)標溶液：精密量取Ge、In、Re、Sc多元素內(nèi)標溶液20 uL置100 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻，配成20 μg/L的溶液。

供試品溶液：精密量取本品2 mL置10 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻。

標準曲線溶液：分別量取鎂(1 000 μg/mL)單元素標準溶液、鋁(1 000 μg/mL)單元素標準溶液各100 μL置100 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻。作為對照品儲備液。分別量取對照品儲備液0、0.5、1、2、5、10 mL置100 mL量瓶中，用2%硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻作為標準曲線溶液。并用2%硝酸水溶液作為空白。

3.2.3定量限與檢測限 取空白溶液連續(xù)測定11次，記錄信號比值(CPS)，計算11次信號的SD值，根據(jù)公式檢測限=3×SD/K；定量限=10×SD/K分別計算鋁元素、鎂元素的定量限分別為0.0170 、0.0223 μg/L，檢測限分別為0.0051、0.0067 μg/L。

3.2.4線性實驗 取標準曲線溶液，按照濃度順序依次進樣，分別以鋁、鎂元素的響應值與內(nèi)標溶液響應值比值(CPS)為縱坐標，濃度C為橫坐標，做線性回歸，結(jié)果見表3。

表3 線性關(guān)系測定結(jié)果

3.2.5精密度實驗 取線性溶液5連續(xù)測定6次，記錄其信號比值CPS，計算RSD ，結(jié)果鋁、鎂元素的RSD分別為1.60%、1.49%。

3.2.6回收率實驗 取氯化鈉注射液2 mL置10 mL量瓶中，平行6份。分別加入鋁、鎂元素各0.5 μg用2%硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻，作為回收率樣品，按照3.2.1項下檢測條件檢測，計算鋁、鎂元素的平均回收率及RSD，結(jié)果見表4。

表4 回收率試驗結(jié)果

3.3 樣品檢測

取裝有氯化鈉注射液的預充式導管沖洗器三批，置加速條件下(溫度40℃±2℃，RH25%±5%)考察6個月，分別在0、3、6月取樣，檢查抗氧劑、硫及鋁、鎂元素含量，結(jié)果見表5。

表5 遷移試驗結(jié)果

4 結(jié)論

本研究方法可以有效地分離抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT，同時對硫也有很好的分離度。加速試驗6個月結(jié)果表明，三批樣品均未檢測出抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫，按照檢測限計算抗氧劑1010、抗氧劑168、抗氧劑BHT及硫的檢出量分別為1.5、3.0、0.6、0.75μg/支，遠低于歐洲藥典要求聚丙烯材料中抗氧劑檢出量限度；鋁元素、鎂元素加速6月檢出最大量分別為0.032、2.137 μg/支，均遠低于歐洲藥典限度要求。初步研究結(jié)果表明，預充式導管沖洗器中抗氧劑、硫及鋁、鎂元素向氯化鈉注射液中的遷移量不影響藥品的質(zhì)量。