PD-L1在肺癌組織學(xué)分類中的表達(dá)情況及與臨床病理特征的關(guān)系

朱燕燕，蔣艷，楊小苗，曹明，懷建國(guó)

（蕪湖市第一人民醫(yī)院 病理科，安徽 蕪湖 241000）

0 引言

肺癌是目前世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，死亡率非常高[1]。靶向治療可以明顯改善肺癌患者的生存時(shí)間，但是要求患者要有靶向藥物的驅(qū)動(dòng)基因突變，因此仍然有很大一部分患者沒(méi)有靶向治療的機(jī)會(huì)。尤其是SCLC的患者，其很少有靶向藥物基因的突變。目前肺癌的治療已經(jīng)由靶向治療發(fā)展到了免疫治療時(shí)代，其已經(jīng)成為晚期肺癌治療中的重要手段。PD-1/PD-L1免疫抑制劑藥物自面世以來(lái)就備受關(guān)注，在 Keynote-3475-042 試驗(yàn)中，PD-L1 TPS≥1%的患者總生存期高于傳統(tǒng)化療的總生存期，而且療效與腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)呈正相關(guān)，所以進(jìn)行PD-L1檢測(cè)對(duì)指導(dǎo)臨床免疫治療有重要的參考價(jià)值[2]。本研究主要通過(guò)檢測(cè)肺癌腫瘤細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)情況，探討PD-L1在腺癌、SCC、SCLC三種組織學(xué)分類中的表達(dá)特點(diǎn)及PD-L1陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系，為臨床治療提供一定的參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料。收集近5年內(nèi)蕪湖市第一人民醫(yī)院病理科的肺癌標(biāo)本，包括手術(shù)標(biāo)本和活檢標(biāo)本共98例，排除腫瘤細(xì)胞量不足（≤100個(gè)）及經(jīng)過(guò)化療的標(biāo)本。其中腺癌36例，SCC 39例，SCLC 23例。其中男79例，女19例，年齡25～88歲，平均70歲。活檢標(biāo)本71例，手術(shù)標(biāo)本27例。有吸煙史60例；腫瘤大小＞5 cm 48例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別為22例、14例、28例、34例。

1.2 組織學(xué)分類。由兩名資深病理醫(yī)師閱片，按WHO（2015）肺腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)明確診斷及分類。所有標(biāo)本均行免疫組織化學(xué)標(biāo)記 （TTF-1、Napsin-A、P40、P63、CgA、Syn、CD56、Ki-67）輔助肺癌的組織學(xué)分類。

1.3 免疫組化法檢測(cè)肺癌腫瘤細(xì)胞內(nèi)PD-L1。PD-L1一抗使用Roche公司克隆號(hào)SP263，其他試劑如二抗、DAB染色液、返藍(lán)染色液及蘇木素染色液等均為Roche全自動(dòng)免疫組化儀相配套的產(chǎn)品。全自動(dòng)免疫組化儀為Roche公司Ventana（BENCHMARK-XT）。通過(guò)電腦輸入一抗名稱并打印標(biāo)簽貼于玻片上。蠟塊3 um厚切，每一張玻片上均有腫瘤組織和作為陽(yáng)性對(duì)照的胎盤組織。將切片上機(jī)后按照電腦設(shè)置好的染色方案運(yùn)行儀器。染色完成后取出玻片，洗去緩沖液，經(jīng)95%乙醇和二甲苯脫水、透明、封片。

1.4 判讀標(biāo)準(zhǔn)及陽(yáng)性結(jié)果設(shè)定。①腫瘤細(xì)胞PD-L1的判讀為：任何強(qiáng)度PD-L1膜染色的腫瘤細(xì)胞在所有腫瘤細(xì)胞中占的百分比。本研究依據(jù)肺癌中腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)的不同百分比值分為三組：陰性組（PD-L1＜1%），低表達(dá)組（1%≤P D-L 1＜5 0%）及高表達(dá)組（P DL1≥50%）；并把PD-L1≥1%設(shè)定為陽(yáng)性表達(dá)。②腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞PD-L1的判讀為：任何強(qiáng)度PD-L1染色的免疫細(xì)胞占總免疫細(xì)胞的百分比，并把腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞PDL1≥10%設(shè)定為陽(yáng)性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。本文應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1在肺癌組織學(xué)分類的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)情況。98例肺癌中PD-L1陽(yáng)性75例，陽(yáng)性率76.5%（75/98）。其中腺癌、SCC及SCLC陽(yáng)性率依次為77.8%（28/36）、82.1%（32/39）、65.2%（15/23）。SCC中PD-L1陽(yáng)性率最高，在高表達(dá)組所占比例也最高61.9%（13/21）。腺癌中PD-L1陽(yáng)性率次之，在低表達(dá)組所占比例略高37.0%（20/54）。SCLC中PD-L1陽(yáng)性率最低，且高表達(dá)組為0%。PD-L1在三種肺癌組織學(xué)分類之間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 PD-L1在肺癌組織學(xué)分類的腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況（例）

2.2 SCC與腺癌中腫瘤細(xì)胞PD-L1陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系。SCC和腺癌這兩種組織學(xué)分類的腫瘤細(xì)胞中的PD-L1的陽(yáng)性表達(dá)在患者年齡、性別、有無(wú)吸煙史、腫瘤大小及臨床分期上均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在SCC中PD-L1陽(yáng)性患者男性占96.9%、年齡≥65歲的占84.4%、吸煙患者的占84.4%，均高于腺癌中所占的比例。在腫瘤大小和臨床分期方面，SCC中PD-L1陽(yáng)性患者腫瘤大?。? cm的占59.4%、臨床分期在Ⅲ+Ⅳ期占78.1%，同樣高于腺癌。SCC在腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞PD-L1陽(yáng)性率上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 SCC與腺癌中腫之瘤間細(xì)的胞關(guān)PD系-（L1例陽(yáng)）性表達(dá)與臨床病理特征

3 討論

近年來(lái)免疫治療成為了肺癌治療的重要新興手段。代表藥物為PD-1/PD-L1抑制劑，PD-L1也稱B7-H1，是B7超家族成員，是Ⅰ型跨膜糖蛋白，廣泛表達(dá)于多種免疫細(xì)胞表面，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[3]。而當(dāng)腫瘤細(xì)胞高表達(dá)PD-L1與免疫細(xì)胞上的PD-1結(jié)合時(shí)，可以幫助腫瘤細(xì)胞逃避人體的免疫監(jiān)控和殺傷。PD-1/PD-L1抑制劑可以阻斷負(fù)向調(diào)控信號(hào)，恢復(fù)T細(xì)胞活性，對(duì)抗免疫逃逸，從而抑制和殺滅腫瘤細(xì)胞，而非簡(jiǎn)單的針對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷，使患者獲得一個(gè)更持久的療效。不管是免疫抑制劑用于肺癌治療的優(yōu)勢(shì)人群的選擇還是對(duì)免疫抑制劑療效的評(píng)估都需要了解患者腫瘤細(xì)胞的PD-L1表達(dá)水平。PD-L1在不同檢測(cè)平臺(tái)和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)也有差異[4-5]。

本研究使用的是Roche公司PD-L1 SP263克隆號(hào)作為檢測(cè)PD-L1的一抗。本研究發(fā)現(xiàn)PD-L1在肺癌腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性率為76.5%，略高于國(guó)內(nèi)一些研究結(jié)果。還發(fā)現(xiàn)PD-L1的表達(dá)與肺癌的組織學(xué)分類有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），PD-L1在SCC中表達(dá)陽(yáng)性率最高。本研究還發(fā)現(xiàn)PD-L1在SCC中高表達(dá)組（PD-L1≥50%）所占的比例也高于腺癌和SCLC。PD-L1在SCLC中的陽(yáng)性率最低，而且PD-L1表達(dá)的也多集中在低表達(dá)組，并無(wú)一例PD-L1表達(dá)≥50%，這一結(jié)果和多數(shù)研究顯示的PD-L1在SCLC中陽(yáng)性率低相符。雖然PD-L1在SCLC中的表達(dá)水平較低，但是仍然有一半的SCLC表達(dá)PD-L1（即PD-L1＞1%），而Keynote158研究證實(shí)Pembrolizumab對(duì)PD-L1＞1%的陽(yáng)性患者有療效。這說(shuō)明有部分SCLC患者仍然擁有選擇免疫抑制劑治療的機(jī)會(huì)。

綜上所述，本研究使用Roche公司PD-L1克隆號(hào)SP263做為一抗，研究結(jié)果顯示PD-L1在SCC中腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率最高，腺癌次之，SCLC陽(yáng)性率最低。在SCC和腺癌中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)和臨床病理特征上有關(guān)，在SCLC中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)和這些臨床病理特征相關(guān)性不大。